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HPLC法测定蒙药材旱麦瓶草中金丝桃苷的含量



全 文 :测定表明,蒙古山萝卜金丝桃苷含量花 >叶 >茎 >根。
金丝桃苷是天然药物的主要有效成分,现已发现的作用,抗
心肌缺血、抗抑郁、抗肝损伤、抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎[3]。
蒙古山萝卜具有抗肝损伤纤维化作用,金丝桃苷可能是该
药材抗肝损伤纤维化作用的主要成分之一。
参考文献
[1]白音夫,等.蒙古山萝卜有效物质的分离、鉴定与含量
测定[J].西北药学,2014,29(6) :564.
[2]董珉翔,等.蒙古山萝卜酸对肝纤维化大鼠血清 PC -
Ⅲ、C - Ⅳ、HA、LN 及肝组织 HSCs、胶原纤维的影响
[D](内蒙古医科大学硕士学位论文,2014.)
[3]李锦松,等.金丝桃苷药理作用及其作用机制的研究进
展[J].广东药学院学报,2015,,3(2) :269.
2016 年 2 月 29 日收稿
HPLC法测定蒙药材旱麦瓶草中金丝桃苷的含量
张晓晔
(内蒙古自治区中医医院,内蒙古 呼和浩特 010020)
摘 要:目的:建立蒙药材旱麦瓶草中金丝桃苷的 HPLC测定方法。方法:采用 HPLC法测定;流动相为甲醇 -水 -磷酸 -三
乙胺溶液(25:30:0. 1:0. 15),流速 1. 0mL·min -1,检测波长为 350nm,柱温为 30℃。结果:金丝桃苷在 0. 005 ~ 0. 16μg范围内
呈良好的线性关系,r = 0. 999;平均回收率为 105. 52%,RSD为 0. 81%(n =6)。金丝桃苷含量,叶子 0. 150%,花 0. 12%,茎 0.
02%,根 0,平均含量 0. 10%。结论:该测定方法操作简单、稳定、重现性好,可作为蒙药材旱麦瓶草质量评价指标。
关键词:HPLC法;旱麦瓶草;金丝桃苷
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2016)09 - 0054 - 02
旱麦瓶草(Silene jenisseensis Willd)蒙药名希日 -苏
古恩乃 -其黑,根为银柴胡入药。中药味甘、苦,性凉,清热
凉血,除骨蒸;蒙药味苦、辛,性平,治肺热,耳聋,鼻塞症,鼻
干,鼻息肉[1 - 2]。从根中分得 α -菠莱甾醇、豆甾醇棕榈酸
酯、汉黄芩素等;全草含有皂甙、黄酮类化合物[3]。全区境
内均有生长,产量丰富[2]。本文采用 HPLC 方法对药材不
同部位中金丝桃苷含量进行测定,为旱麦瓶草药材质量分
析、评价与控制提供新的依据。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器:1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司) ,
SPD -2A紫外检测器(岛津) ,TJ - 912 型色谱分析平台(太
极计算机公司) ,IN -180型柱温箱(上海英泰科技研究所) ,
SH6150D超生波清洗器(上海昆山) ,电子天平(梅特勒)
1. 2 试药:金丝桃苷对照品(111521 -200303)由中国药品生物
制品检定所提供;甲醇为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化
水;旱麦瓶草与2014年7 ~8月采自内蒙古大青山坝口子。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:Kromasi - C18 柱(200mm × 4. 6mm,5?
m) ;流动相:甲醇 -水 -磷酸 -三乙胺溶液(25:30:0. 1:0.
15) ;流速:1mL·min -1;温度:30℃;检测波长:350nm nm;
进样量 10μL。在此条件下待测组分可达到基线分离。样
品中金丝桃苷与其它组分有较好的分离,见图 1。
图 1 HPLC图谱
A.金丝桃苷对照品;B.供试品;1. 金丝桃苷
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取金丝桃苷对照品适
量,加甲醇制成 0. 20mg·mL -1的溶液,分别取 0. 25、0. 5、
1、2、4、8mL加到 10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2. 3 供试品溶液的制备:取本品,粉碎,过筛,精密称定
80mg,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 10mL,称质量,超声
处理 40min ,放冷,称重,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤
过,取续滤液备用,即得。
2. 4 线性关系考察:密吸取对照品溶液 10μL,注入高效液
相色谱仪,测定峰面积;以峰面积为纵坐标(Y) ,进样量为
横坐标(X)做线性回归,回归方程为 y = 7049040 x -
5074,r = 0. 999。结果表明,金丝桃苷在 0. 005 ~ 0. 16μg 范
围内呈良好的线性关系。
2. 5 稳定性实验:同一份供试品溶液,分别在 0,2,4,8,
12h进样测定,以金丝桃苷峰面积值计算 RSD 为 0. 40%。
结果表明,供试品溶液在 12h内稳定。
2. 6 精密度实验:吸取同一批供试品溶液,在上述色谱条
件下重复进样 6 次,测得金丝桃苷峰面积 RSD为 0. 45%。
2. 7 重复性实验:取同批药材叶子按 2. 3 项下平行制备 6
45 中国民族医药杂志 2016 年 9 月第 9 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.09.034
份样品溶液,并按 2. 1 项下测定,金丝桃苷的平均含量为
0. 152%,RSD = 0. 77%。
2. 8 加样回收率实验:取同批药材叶子已知含量的样品 6
份,每份取约 40mg,精密称定,分别精密加入金丝桃苷对照
品溶液 3. 0 mL(0. 020 mg) ,按 2. 3 项下制备样品溶液同法
操作,测定含量,计算回收率。金丝桃苷平均回收率为
105. 52%,RSD为 0. 81%
3 样品测定
按 2. 3 项下方法制备供试品溶液,按拟定的色谱条件
测定旱麦瓶草不同药用部位金丝桃苷含量,叶子 0. 150%,
花 0. 12%,茎 0. 02%,根 0,平均含量 0. 10%。
4 讨论结果
旱麦瓶草属植物有 500 余种,我国约 120 种,该属植物
变异大品种繁多,仍处在进化活跃期,所以旱麦瓶草药源丰
富,国内很多民族的传统医药均有入药历史,目前仍在临床
使用[3]。对该药材化学与活性研究报道不多。本文对该
药材中金丝桃苷含量进行初步研究,表明地上部分有金丝
桃苷成分,地下部分没有测出。由于蒙医药多以药材的地
上部分入药,测定金丝桃苷含量仍可以作为蒙药旱麦瓶草
质量评价指标。
参考文献
[1]内蒙古卫生局. 内蒙古中草药[M]. 呼和浩特:内蒙古
人民出版社,1972 ﹕ 248.
[2]朱亚民.内蒙古植物志[M].第一卷. 2000:349 - 350.
[3]颜永,谢海峰,高昂,等. 药用植物麦瓶草研究概况
[J]. 辽宁中医药大学学报,2011,13(4) :91 - 93.
2016 年 6 月 10 日收稿
紫外可见分光光度法测定呼和 -嘎日迪 - 13 散中紫草的含量
成志平
(包头市食品药品检验检测中心,内蒙古 包头 014060)
摘 要:目的:紫外可见分光光度法测定呼和 -嘎日迪 - 13 散中紫草的含量。方法:采用紫外可见分光光度法,样品以石油
醚(60 ~ 90℃)超声振荡提取。结果:左旋紫草素在 8. 264 ~ 28. 924μg /mL范围内呈良好的线性关系,r = 0. 99982,平均回收
率 96. 2%,RSD为 0. 43%,结论:本法灵敏、准确,操作简单,重复性好。
关键词:呼和 -嘎日迪 - 13 散;紫外可见分光光度法;左旋紫草素
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2016)09 - 0055 - 02
呼和 -嘎日迪 - 13 散由甘草、丁香、栀子和紫草等 13
味药组成复方制剂。清热,利咽。用于咽喉热症。其中紫
草为该方中的主药,紫草参照文献[1]主要化学成分为萘醌
类色素,此外还有苯酚及苯醌类成分、生物碱、酚类、三萜酸
及酸性多糖等成分。中国药典 2005 年版一部中对紫草含
量测定用的是紫外可见分光光度法,因此,确定以本品中紫
草的成分羟基萘醌总色素作为检测指标。采用紫外 -可见
分光光度法,以左旋紫草素作为对照品建立含量测定方法。
通过试验,确定了比较理想的条件。并经过方法学考察及
阴性对照实验,表明该方法操作简单,重现性好,专属性强,
方中其它组分对羟基萘醌总色素的测定无干扰。
1 仪器与试药
1. 1 仪器:惠普 2010 紫外分光光度计。天平 BS300SW型
电子天平。
1. 2 试剂与试药:左旋紫草素对照品(批号:0769 - 9803,
供含量测定用) :中国药品生物制品检定所;模拟样品(批
号:20061226 - 1、20061226 - 2、20061226 - 3 由包头市药品
检验所自制)。样品(批号:2006071 由阿拉善盟蒙医院提
供)。石油醚(60 ~ 90℃)为分析纯。水为高纯水。
2 方法学考察
2. 1 检测波长的选择
2. 1. 1 左旋紫草素对照品溶液的制备及紫外 -可见光谱
的测定:精密称取左旋紫草素对照品 10mg(实际取 10.
33mg) ,置 50mL量瓶中,加石油醚(60 ~ 90℃)溶解,并稀
释至刻度,摇匀,精密量取 5mL,置 50mL量瓶中,加石油醚
(60 ~ 90℃)至刻度,摇匀(相当于 0. 02066mg /mL) ,在 220
~ 650nm 波长范围扫描。结果:在 521nm、541. 5 和 558.
5nm波长处有最大吸收。
2. 1. 2 模拟样品溶液的制备及紫外 -可见光谱的测定:精
密称取模拟样品(批号:20061226 - 1)0. 6g,精密称定,置
100mL量瓶中,加石油醚(60 ~ 90℃)80mL,超声处理(功率
120W,频率 40HZ)30 分钟,放冷,加石油醚(60 ~ 90℃)至
刻度,摇匀,滤过,取续滤液,在 220 ~ 650nm 波长范围扫
描。结果:在 523nm、545. 5nm 和 562. 5 波长处有最大吸
收。
2. 1. 3 样品溶液的制备及紫外 -可见光谱的测定:精密称
取样品(批号:2006071)0. 6g,精密称定,置 100mL 量瓶中,
按上述方法操作。结果同上。
2. 1. 4 阴性对照溶液的制备及紫外 -可见光谱的测定:按
处方比例称取除紫草外的其它药约 0. 6g,精密称定,置
100mL量瓶中,同法操作,结果:在 450 ~ 575nm 波长处无
吸收。
2. 1. 5 紫草药材溶液的制备及紫外 -可见光谱的测定:精
密称取紫草药材 0. 05g,精密称定,置 100mL 量瓶中,同法
552016 年 9 月第 9 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.09.035