全 文 ：基金项目：国家自然科学基金（８１１６０４９８）
作者简介：王 伟（１９８８－），女，在读研究生，研究方向：中药资源调查与中药新药研究。
通信作者：聂继红，女，硕士，主任药师，硕士生导师，研究方向：中药资源调查与中药新药研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｎｊｈ４１１＠１６３．ｃｏｍ。
·维医维药·
ＨＰＬＣ法测定新疆白喉乌头不同部位
王 伟１，赵翡翠２，胡 睿３，聂继红２
（新疆医科大学１中医学院，乌鲁木齐 ８３００５１；２附属中医医院药学部，乌鲁木齐 ８３００００；３６９０１６部队卫生队，乌鲁木齐 ８３０００１）
摘要：目的 比较新疆尼勒克地区白喉乌头不同部位（根、茎、叶）中氢溴酸高乌甲素的含量。方法 采用Ｘ
Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８生物碱专用色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），以０．０４ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵－乙腈（６３∶３７）为流动相等度洗脱，
流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱温４０℃，检测波长为２５２ｎｍ，进样量１０μＬ高效液相色谱法测定白喉乌头根、茎、叶中氢溴酸
高乌甲素含量。结果 白喉乌头中氢溴酸高乌甲素在根中含量为０．２０３ ８ｍｇ／ｇ，在叶中的含量为０．０６１ １ｍｇ／ｇ，
在茎中的含量为０．０１１ １ｍｇ／ｇ。结论 白喉乌头根中氢溴酸高乌甲素含量高于叶和茎中，为白喉乌头资源的进
一步利用奠定了一定基础。
关键词：白喉乌头；不同部位；氢溴酸高乌甲素；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ９１４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１３）１１－１５７７－０３
Ａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｉｎ ａｃｏｎｉｔｕｍｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍｗｏｒｏｓｃｈ
ｂｙ ＨＰＬＣ ｉｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ
ＷＡＮＧ Ｗｅｉ １，ＺＨＡＯ Ｆｅｉｃｕｉ ２，ＨＵ Ｒｕｉ ３，ＮＩＥ Ｊｉｈｏｎｇ２
（１ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００５１，Ｃｈｉｎａ；
２ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｕｒｕｍｑｉ ８３００００，Ｃｈｉｎａ；３ Ｍｅｄｉｃａｌ ｔｅａｍ ｏｆ Ｕｎｉｔ ６９０１６，Ｕｒｕｍｑｉ ８３０００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ（ｒｏｏｔ，
ｓｔｅｍ，ｌｅａｆ）ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈｂｙ ｕｓｉｎｇ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｓｅ Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８Ａｌｋａ－
ｌｏｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ａｎｄ ｔａｋｅ ０．０４ｍｏｌ／Ｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅ－
ｔａｔｅ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｅｌｕｔｅ ｗｉｔｈ ｓａｍｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ０．８ｍｌ／ｍｉｎ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
４０℃．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｉｓ ｓｅｔ ａｓ ２５２ｎｍ，ａｎｄ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ １０μＬ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ
ｏｆ ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈｉｓ ０．２０３ ８ｍｇ／ｇ，０．０６１ １ｍｇ／ｇ
ｉｎ ｌｅａｆ ａｎｄ ０．０１１ １ｍｇ／ｇ ｉｎ ｓｔｅｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｏｎ ｉｎ Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍＷｏｒｏｓｃｈｉｎ ｒｏｏｔ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｓ ｉｎ ｌｅａｆ ａｎｄ ｓｔｅｍ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｌａｙ ｔｈｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒ－
ｔｈｅｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈｒｅｓｏｕｒｃｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ；ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ ｌａｐｐａｃｏｎｉｔｉｎｅ；ＨＰＬＣ
白喉乌头为毛茛科植物白喉乌头 （Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈ）的干燥块根，主产于我国新
疆北疆地区，具祛风散寒、止痛消肿、通经活络的功
效，在治疗风湿类等疾病方面有其独特疗效［１－２］。白
喉乌头中含有氢溴酸高乌甲素、喉乌碱及去乙酰刺
乌头碱等生物碱，其中氢溴酸高乌甲素在白喉乌头
第３６卷 第１１期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３６ Ｎｏ．１１
２０１３年１１月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎｏｖ．２０１３
氢溴酸
高乌甲素的含量
中含量很高，约占总生物碱含量的４０％［３－４］，因此白
喉乌头可作为新的植物原料生产氢溴酸高乌甲素。
本实验采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）同时测定、比
较白喉乌头药材中根、茎、叶所含氢溴酸高乌甲素的
含量，分析白喉乌头不同部位中氢溴酸高乌甲素含
量的差异性，为白喉乌头药材资源的最大利用及其
药用价值提供依据。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器 Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（美国
Ｗａｔｅｒｓ公司），Ｄｉｒｅｃｔ－ＱＴＭ５超纯水仪（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ
公司），ＳＫ３３００ＬＨ超声清洗器（上海科导超声仪器
有限公司），ＳＩ－２３４电子天平（北京丹佛仪器有限公
司），ＡＧ－１３５电子分析天平（上海梅特勒－托利多仪
器有限公司）。
１．２ 试药 白喉乌头样品采自新疆伊犁尼勒克地
区，经新疆医科大学附属中医医院李永和主任中药
师 鉴 定 为 毛 茛 科 植 物 白 喉 乌 头 （Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ Ｗｏｒｏｓｃｈ）的干燥块根。氢溴酸高乌甲
素标准品（北京伊普瑞斯科技有限公司，批号：
ＭＵＳＴ－１１０９０９０３），乙腈（色谱纯 Ｈｏｎｅｙｗｅｌ ，批
号：２０１２．０２．０３ＡＨ０１５－４Ａ１００２６９），其他试剂均为
分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱：Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８生物碱专用色
谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：０．０４ｍｏｌ／Ｌ
醋酸铵－乙腈（６３∶３７）；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：
４０℃；检测波长：２５２ｎｍ；进样量：１０μＬ。按氢溴酸
高乌甲素峰计算理论板数应不低于２ ０００，结果对照
品和供试品色谱图呈现良好的分离度，见图１。
Ａ：氢溴酸高乌甲素对照品；Ｂ：白喉乌头样品；１：氢溴酸高乌甲素
图１ ＨＰＬＣ色谱图
２．２ 对照品溶液配制 精密称取５．６ｍｇ氢溴酸髙
乌甲素对照品，置于１０ｍＬ容量瓶中，用二氯甲烷溶
解定容至刻度，摇匀后过０．４５μｍ微孔滤膜，得浓度
为０．５６ｍｇ／ｍＬ的氢溴酸髙乌甲素对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 精密称取净制粉碎后过
３号筛的白喉乌头根、茎、叶各约５ｇ，加４ｍＬ氨试
液湿润静置１ｈ，加９０％氨水饱和乙醚５０ｍＬ超声
３０ｍｉｎ，静置过夜，氨水饱和乙醚润洗３次后滤过，
滤液于水浴６０℃挥干，残渣加０．５％盐酸溶液
２０ｍＬ溶解得酸水层，再加浓氨水碱化调ｐＨ＝１０
左右，乙醚脱脂后用每次１０ｍＬ的三氯甲烷萃取３
次，合并三氯甲烷液挥干溶剂，最后残渣用三氯甲烷
∶甲醇（１∶１）溶解并定容于５ｍＬ容量瓶中。
２．４ 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液０．１、
０．５、０．８、１．２、１．６ｍＬ置于５ｍＬ容量瓶中，加二氯
甲烷定容，过０．４５μｍ微孔滤膜，精密吸取续滤液
１０μＬ注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定。
以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，
得氢溴酸髙乌甲素回归方程Ｙ＝１５ ６３９ ４０４．６１ Ｘ＋
７６ ５５０．６３，ｒ２＝０．９９９ ６，表明氢溴酸髙乌甲素在进
样浓度为０．０１１ ２～０．１７０ ０ｍｇ／ｍＬ范围内与峰面
积呈良好的线性关系。
２．５ 精密度试验 取“２．２”项下对照品溶液，按上
述色谱条件连续进样５次，测的氢溴酸高乌甲素峰
面积的ＲＳＤ＝０．８３％，结果显示精密度良好。
２．６ 重复性试验 精密称取白喉乌头根共６份，按
“２．３”项下方法制备供试品溶液，以上述色谱条件进
行测定。结果氢溴酸高乌甲素的平均含量为
０．２０５ ５ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ＝０．５５％。
２．７ 稳定性试验 取“２．３”项下制备的同一供试品
溶液，分别在０、２、４、８、１２、２４ｈ进样测定色谱峰面
积，结果高乌甲素ＲＳＤ％＝０．７７％，表明供试品溶
液在２４ｈ内性质是稳定的。
２．８ 加样回收率试验 精密称取已知含量的白喉
乌头根６份置锥形瓶中，每份分别加入“２．２”项下氢
溴酸高乌甲素对照品溶液０．１ｍＬ，按“２．３”项下方
８７５１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３６卷
法制备供试溶液，以上述色谱条件进行测定结果得
氢溴酸高乌甲素的平均回收率为９８．２７％，ＲＳＤ为
１．９６％，见表１。
２．９ 氢溴酸高乌甲素含量测定 分别精密称取白
喉乌头药材不同部位（根、茎、叶）各３份，按“２．３”项
下方法配制供试品溶液并精密吸取各供试品溶液
１０μＬ进样，按上述色谱条件测定，计算氢溴酸髙乌
甲素含量得白喉乌头中氢溴酸高乌甲素在根中含量
为０．２０３ ８ｍｇ／ｇ，在叶中含量为０．０６１ １ｍｇ／ｇ，在茎
中含量为０．０１１ １ｍｇ／ｇ，色谱图见图１，结果见表２。
表１ 氢溴酸高乌甲素加样回收率测定结果
编号 取样量／ｇ 原有量／ｍｇ 测定量／ｍｇ 加入对照品量／ｍｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
１ ５．０１６ ５ １．０３０ ８ １．０７６ ５ ０．０５６ ０ ９９．０５
２ ５．０１６ ７ １．０３０ ９ １．０８８ ３ ０．０５６ ０ １００．１３
３ ５．０１６ ７ １．０３０ ９ １．０７８ ９ ０．０５６ ０ ９９．２６ ９８．２７ １．９６
４ ５．００３ １ １．０２８ １ １．０４７ ８ ０．０５６ ０ ９６．６５
５ ５．０１６ ５ １．０３０ ８ １．０３４ ２ ０．０５６ ０ ９５．１６
６ ５．０１６ ７ １．０３０ ９ １．０８０ １ ０．０５６ ０ ９９．３７
表２ 不同部位氢溴酸高乌甲素含量测定结果
白喉乌头不同部位 取样量／ｇ
氢溴酸高乌甲素
平均含量／（ｍｇ／ｇ） ＲＳＤ／％
根 ５．０１０ ０
根 ５．００８ ２ ０．２０３ ８ ２．４８
根 ５．０１３ １
茎 ５．０００ ４
茎 ５．００３ １ ０．０１１ １ ２．３８
茎 ５．０００ ２
叶 ５．００３ ８
叶 ５．００３ ５ ０．０６１ １ ２．８３
叶 ５．００４ ６
３ 讨论
在供试品的前处理方法中 ，通过参考相关文献
［５－１１］，对白喉乌头取样量（料液比１∶１０、１∶１６、
１∶２０）、提取溶剂（甲醇、乙醇、氨水乙醚等）、提取方
法（超声、索式回流、冷浸等）进行相应考察，确定了
供试品前处理方法，同时对流动相 （分别采用
０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨ２ＰＯ４－甲醇（２８∶７２）、乙腈－醋酸铵
缓冲液（ｐＨ１０．３）（５４∶４６）、磷酸盐缓冲液（ｐＨ
２．７）－四氢呋喃（８９∶１１）等不同流动相进行考察，以
峰形、峰面积、分离度为评价指标，并对流动相比例
进行了调整，最终确定了乙腈－醋酸铵色谱系统。
在供试品前处理中，发现酸水调ｐＨ＝１时容易
发生乳化现象，通过调整三氯甲烷的萃取剂量可改
善乳化现象；而碱化使之成游离生物碱时，发现碱化
值ｐＨ＝１０和ｐＨ＝１１、１２时生物碱成分基本相同，
故本实验将ｐＨ值碱化到１０。
根据白喉乌头样品不同部位中高乌甲素含量测
定结果表明新疆白喉乌头中氢溴酸高乌甲素含量较
高，其根中的含量明显高于叶及其茎中，这和白喉乌
头特殊的生长环境也有一定关系。本课题组实地调
查中发现新疆伊犁尼勒克地区的白喉乌头生长在山
坡草地、东经８３．９０°、北纬４３．２０°、海拔１ ９５２ｍ处，
属直根系，其根可扎入土壤内长５０～１００ｃｍ，扎入
土层较深，根中生物碱的含量也就比较高。因此白
喉乌头可以作为非成瘾性镇痛药物的原料药材进一
步研究开发，但其确切的药理作用和毒性仍有待进
一步深入研究。
参考文献：
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［收稿日期：２０１３－０４－２１］
（本文编辑 施洋）
９７５１ 第１１期 王 伟，等：ＨＰＬＣ法测定白喉乌头不同部位氢溴酸高乌甲素的含量