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用HPLC法测定蒙药银露梅槲皮素含量



全 文 :2. 8 重复性试验:取同一批号(2006043)供试品 6 份,各约
0. 5g,精密称定,分别按含量测定项下方法操作,测定每份
含量,RSD为 1. 52%。
2. 9 准确度:取本品(批号 20060527,含量 1. 767mg /g)9
份,各约 0. 25g,精密称定,分别置 50mL容量瓶中再分别在
其中 3 个容量瓶中精密加入用浓度为 0. 2332mg /mL 羟基
红花黄色素 A对照品 25%甲醇溶液 1mL(约相当于供试品
含量的 50%)、另 3 个容量瓶中各精密加入上述对照品溶
液 2mL(约相当于供试品含量的 100%)、其余 3 个容量瓶
中各精密加入上述对照品 3mL,(约相当于供试品含量的
150%)分别按含量测定项下方法操作,测定每份含量,计
算回收率,结果见表 1 。
表 1 羟基红花黄色素 A加样回收试验结果
序号
样品量
(g)
供试品
含量(mg)
对照品
加入量
(mg)
测得总
量(mg)
回收率
(%)
平均
(%)
RSD
(%)
1 0. 2589 1. 767 0. 2332 0. 6978 103. 03
2 0. 2599 1. 767 0. 2332 0. 6994 103. 00
3 0. 2578 1. 767 0. 2332 0. 6958 103. 04
1 0. 2501 1. 767 0. 4664 0. 9112 100. 62
2 0. 2567 1. 767 0. 4664 0. 9217 100. 36
3 0. 2500 1. 767 0. 4664 0. 9085 100. 06
1 0. 2596 1. 767 0. 6996 1. 1716 101. 90
2 0. 2576 1. 767 0. 6996 1. 1676 101. 83
3 0. 2502 1. 767 0. 6996 1. 1497 101. 14
101. 66 1. 17
3 供试品含量测定
取本品按质量标准【含量测定】项下的方法处理,三批
供试品及模拟样的测定结果见表 2。
表 2 供试品及模拟样中羟基红花黄色素 A含量测定结果
批号 取样量
测得峰
面积值
含量
(mg /g)
平均含量
(mg /g)
RSD
(%)
0. 5266 963896 1. 6741
2006061 0. 4902 858816 1. 6022 1. 6483 2. 427
0. 5478 1052623 1. 7574
2006043 0. 5308 1019079 1. 756 1. 7556 0. 11
0. 5392 1033825 1. 7535
0. 5300 1013216 1. 7485
2006080 0. 5298 1013896 1. 7503 1. 7469 0. 27
0. 5274 1013216 1. 7418
0. 5344 1065222 1. 769
模拟样 0. 5373 1075350 1. 776 1. 7823 0. 97
0. 5493 1115262 1. 802
4 讨论
样品制备考察时,提取时间等均进行了比较试验,最终
确定超声处理 30min效果较稳定。
参考文献
[1]北京中医药大学 . 中药鉴定学(供中药类专业用)
[M].北京:科学出版社,2002:290.
[2]国家药典委员会.中国药典[S]. 一部,北京:化学工业
出版社,2005:103.
2015 年 5 月 12 日收稿
△项目来源:内蒙古自治区蒙药现代化研究项目(编号:
MX2005BZ008)
作者简介:包满节(1979 -),女,蒙古族,内蒙古医科大学蒙医药
学院讲师。
* 通讯作者:乌仁图雅,教授,硕士研究生导师,E - mail:wuren-
tuya@ yahoo. com. cn
用 HPLC法测定蒙药银露梅槲皮素含量△
包满节 乌仁图雅*
(内蒙古医科大学 蒙医药学院,内蒙古 呼和浩特 010110)
摘 要:方法:采用高效液相色谱法对金露梅中的槲皮素进行含量测定。结果:槲皮素在 0. 0255 ~ 0. 1700μg 范围内,r = 0.
9998,平均回收率为 96. 72%(RSD = 2. 169%,n = 6)。结论:方法可行,重现性好,银露梅槲皮素的平均含量 1. 2630(mg /
g)。
关键词:HPLC法;蒙药银露梅;梅槲皮素;含量
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)09 - 0027 - 01
银露梅为蔷薇科植物银露梅 Potentilla glabra Lodd. 的
茎枝。蒙药常用药材,蒙文名称孟根—乌日阿拉格,银露梅
枝有固齿、镇赫依,燥“协日乌素”,用于牙病,肺病,胸肋胀
痛,胸肋胀满,“协日乌素”病[1]。银露梅主含槲皮素、三萜
类成分及鞣质等有效成分,其中槲皮素的高效液相方法较
多,且方法成熟,故以槲皮素的含量作为其质量控制指
标[2]。
1 仪器与试药
岛津 LC ~ 10AP 高效液相色谱仪、N2000 色谱工作站
(浙江大学智达信息有限公司)、SPD ~ 10A 型紫外检测器。
LGC—1025M柱温箱、AB135 - S型电子分析天平(梅特勒
-托利多)、KQ -250 型超声波清洗机(巩义予华仪器厂)。
试剂:甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。
槲皮素对照品:购于中国药品生物制品检定所,批号:
0081 ~ 9304,(供含量测定用),银露梅样品:内蒙古赛罕乌
722015 年 9 月第 9 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.09.015
拉自然保护区,内蒙古大青山劈柴沟,内蒙古蛮罕山,国家
蒙药制剂中心。经内蒙古药品检验所蒙药科专家鉴定为蔷
薇科植物银露梅(Potentilla glabra Lodd.)的茎枝。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱:C18 柱(250mm × 4. 6mm),柱温:
30℃,检测波长:360nm,流动相:甲醇 - 0. 4%磷酸溶液(50
∶ 50),流速:1. 0ml /min,理论塔板数按槲皮素计算应不低
于 3000。
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取槲皮素对照品 0. 017g,
加甲醇定容至 100mL容量瓶中,摇匀,即得浓度为 0. 17mg /
mL的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备:取本药材粉末(过 40 目筛)约
1g,精密称定置具塞的锥形瓶中,精密加入 80%甲醇 50mL
密塞。称定重量加热回流 1h放冷,再称定重量,用 80%甲
醇补足减失重量。摇匀滤过。精密量取续滤液 10mL 加入
盐酸 1mL,置 90℃水浴中加热回流 1h,取出,迅速冷却。转
移至 25mL容量瓶中,加 80%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2. 4 线性范围的考察:精密吸取槲皮素对照品溶液(浓度
为 0. 17mg /mL)1. 5mL,2. 5mL,5mL,7. 5mL,10mL,分别定
容于 100mL容量瓶中,摇匀,得到浓度分别为 0. 00255mg /
mL,0. 00425mg /mL,0. 0085mg /mL,0. 0125mg /mL,0.
0170mg /mL,精密吸取 10μL,注入液相色谱仪,以峰面积对
进样量进行回归,以取样量为 X 轴,峰面积为为 Y 轴得回
归方程 Y =2E + 0. 6X - 18494,r = 0. 9998。结果表明:槲皮
素在 0. 0255 ~ 0. 1700μg范围内,峰面积值与进样量呈良好
的线性关系。
2. 5 精密度实验:取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品,精
密称定,按供试品溶液制备方法制成精密度试验溶液,精密
吸取溶液 10μL,在上述色谱条件下重复进样 5 次,测得
RSD为 1. 14%。表明该系统精密度良好。
2. 6 重现性试验:取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品 5
份,每份约 2. 0g,精密称定,按供试品溶液制备方法制成重
现性试验溶液,精密吸取溶液 10μl,注入液相色谱仪,结果
RSD为 1. 68%。实验结果表明,该方法重现性良好。
2. 7 稳定性试验:精密称内蒙古赛罕乌拉自然保护区样
品,按供试品溶液制备方法制成稳定性试验溶液,分别在
0、1、2、3、8h 时,精密吸取 10μL,注入液相色谱仪,测得槲
皮素峰面积的 RSD 为 1. 185%。试验结果表明,供试品溶
液在 8h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验:称取已知含量的样品(重复性试验
中的样品)六份,每份约 1. 0g,精密称定,加入适量的槲皮
素对照品,按供试品溶液制备方法制成加样回收试验溶液。
分别精密吸取 10μL,注入液相色谱仪,测定平均回收率为
96. 72%,RSD为 2. 169。加样回收率良好,见表 1。
2. 9 样品含量测定:取本药材粉末 1. 0g,分别精密称定,
按供试品溶液制备方法进行制备,各精密吸取 10μL,注入
液相色谱仪,测定,见表 2。
表 1 加样回收率实验
序号 取样量(g) 样品中对照品的量(mg) 加入对照品的量(mg) 测得总量(mg) 加样回收率(%)平均值(%) RSD(%)
1 0. 9854 1. 1194 0. 3024 1. 4077 95. 34
2 0. 9910 1. 1257 0. 3024 1. 4154 95. 80
3 1. 0020 1. 1383 0. 9072 2. 0410 99. 50
4 1. 0050 1. 1417 0. 9072 2. 0410 99. 13
5 0. 9905 1. 1252 0. 6048 1. 6961 94. 39
6 0. 9920 1. 1269 0. 6048 1. 7086 96. 18 96. 72 2. 169
表 2 样品含量测定结果
药材来源 取样量(g) 峰面积 1 峰面积 2(mg /g) 含量 1(mg /g) 含量 2(mg /g) 平均含量(mg /g)
内蒙古赛罕乌 1. 0530 163458. 297 163159. 594 1. 1136 1. 1116 1. 1126
拉自然保护区 1. 0380 158979. 797 156206. 594 1. 0988 1. 0978 1. 0983
内蒙古大青山 1. 0010 189671. 703 200268. 297 1. 3500 1. 4255 1. 3878
劈柴沟 1. 0021 202424. 234 203613. 906 1. 4189 1. 4337 1. 4263
内蒙古蛮罕山 1. 0012 116295. 500 116407. 203 0. 8386 0. 8394 0. 8390
1. 0003 115419. 797 120510. 555 0. 8331 0. 8698 0. 8514
国家蒙药制剂中心 1. 0011 237091. 797 237753. 797 1. 6989 1. 7036 1. 7013
1. 0007 235552. 000 235117. 813 1. 6885 1. 6854 1. 6870
3 讨论
3. 1 本试验所用样品均经过了原植物鉴定,并在试验前进
行了性状比较与鉴定,确保了试验结果的一致性。
3. 2 本试验建立了蒙药银露梅含量测定方法,定量精密度
高,稳定性好,可作为蒙药银露梅的质量控制重要项目。
参考文献
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民出版社,2007:632 - 633.
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国医药科技出版社,2003:400 - 403.
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2015 年 6 月 12 日收稿
82 中国民族医药杂志 2015 年 9 月第 9 期