全 文 ：收稿日期:2014 － 05 － 08
基金项目:黑龙江省中医药科研项目(ZHY12 － Z156)
作者简介:张新建(1970 －)，男，副主任药师，研究方向:中药学。
通讯作者:郭美华(1978 －)，女，主管药师。E-mail:justgoguo@ 126．
com。
参考文献
［1］ Tong Y，Zhoμ XM，Wang SJ，et al． Analgesic activity of myricetin
isolated from Myrica rμbra Sieb． et Zμcc． leaves［J］． Archives of
pharmacal research，2009，32(4):527 － 533．
［2］ Mochida K． Anti － inflμenza virμs activity of Myrica rμbra leaf
ethanol extract evalμated μsing Madino － Darby canine kidney
(MDCK)cells［J］． Bioscience，biotechnology，and biochemis-
try，2008，72(11):3018 － 3020．
［3］ 江苏新医学院．中药大辞典(上册)［M］．上海:上海科学技术
出版社，2000:1042．
［4］ Matsμda H，Yamazaki M，Matsμo K，et al． Anti － androgenic ac-
tivity of Myricae Cortex—isolation of active constitμents from
bark of Myrica rμbra［J］． Biological ＆ pharmaceμtical bμlletin，
2001，24(3):259 － 263．
［5］ Matsμda H，Morikawa T，Tao J，et al． Bioactive constitμents of
Chinese natμral medicines． VII． Inhibitors of degranμlation in
ＲBL － 2H3 cells and absolμte stereostrμctμres of three new dia-
rylheptanoid glycosides from the bark of Myrica rμbra［J］． Chem-
ical ＆ pharmaceμtical bμlletin，2002，50(2):208 － 215．
［6］ 黄运东，陈定双． 杨梅树皮中二芳基庚烷类化学成分研究
［J］．广东药学院学报，2008，24(2):141 － 143．
［7］ 黄初升，白素平，李英．天然线型二芳基庚烷类化合物［J］．天
然产物研究与开发，1997，9(2):98 － 105．
［8］ 张秀娟，凌云，于华，等．杨梅树皮素诱导人肝癌 HepG － 2 细胞
凋亡机制的研究［J］．中国中药杂志，2010，35(8):1046 －1050．
［9］ 张莉静，刘志国，孟大利，等．杨梅树皮提取物及杨梅素抗肿
瘤活性［J］．沈阳药科大学学报，2009，26(4):307 － 311．
［10］ Ko C H，Shen S C，Lee T J F，et al． Myricetin inhibits matrixmet-
allop roteinase 2 p rotein expression and enzyme activity incolorec-
tal carcinoma cells［J］． Mol Cancer Ther，2005，4(2):281．
［11］ 戴关海，童晔玲，任泽明，等．杨梅树皮提取物体外抗人肺腺
癌 A549 作用的实验研究［J］． 中华中医药学刊，2013，31
(1):81 － 82．
第 32 卷 第 10 期
2 0 1 4年 1 0月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 10
Oct． 2 0 1 4
中
华
中
医
药
2425
学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 10． 036
ＲP － HPLC法测定清炎滴丸中苦玄参昔 I A的含量
张新建，郭美华，马妍妍，李晓红，白建海，王琪
(哈尔滨医科大学附属第一医院药学部，黑龙江 哈尔滨 150001)
摘 要:目的:建立以高效液相色谱法测定清炎滴丸中苦玄参苷 IA 含量的方法。方法:色谱柱为 Kromasil
C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －水(45 ∶ 55)，检测波长 263 nm，流速:1． 0 mL·min
－1，柱温为
30 ℃。结果:苦玄参苷 IA进样量在 0． 134 ～ 2． 68 μg 的范围内呈良好的线性关系，r = 0． 999989，平均回收率为
98． 54%，ＲSD = 0． 94%(n = 6)。结论:该法操作简单、快速、准确，专属性强，可用于该制剂的质量控制方法。
关键词:清炎滴丸;反相高效液相色谱法;苦玄参苷 IA
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)10-2425-03
Determination of PiefeltarraeninⅠA in Qingyan Drop Pills by ＲP －HPLC
ZHANG Xinjian，GUO Meihua，MA Yanyan，LI Xiaohong，BAI Jianhai，WANG Qi
(1． The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University Harbin 150001，Heilongjiang，China)
Abstract:Objective:To establish a method for the determination of piefeltarraeninⅠA in Qingyan Drop Pills by ＲP －
HPLC． Methods:The Kromasil C18 column (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)was used，mobile phase was acetonitrile and waters
(45 ∶ 55)． The flow rate was 1． 0 mL·min －1;the column temperature was 30 ℃;the detection wavelength was 263 nm．
Ｒesults:The linear range of piefeltarraenin ⅠA was within 0． 134 μg ～ 2． 68 μg (r = 0． 999989)． The average recovery
was 98． 54%，ＲSD = 0． 94% (n = 6)． Conclusion:The method is simple and fast and the result is accurate and reliable． It
can be used for quality control of the piefeltarraenin ⅠA in Qingyan Drop Pills．
Key words:Qingyan Drop Pills;ＲP － HPLC;piefeltarraenin ⅠA
清炎滴丸是由肿节风、苦玄参等中药科学组方，经正交
试验筛选最佳提取工艺，然后将提取物制成滴丸剂，本品具
有清热解毒，消肿止痛的功效，可用于咽喉肿痛，急、慢性咽
喉炎，扁桃体炎，牙龈炎，疮疖等［1 － 2］。本品是在传统的中
医药理论指导下，结合现代先进制药技术产生的新型中药
制剂。苦玄参系处方的主要药味之一，其有效成分主要为
四环三萜苷类，其中又以苦玄参苷 IA 和 IB 为主［2 － 3］。本
实验以苦玄参苷 IA为指标，采用高效液相色谱法，测定其
含量，为更好地控制该制剂的质量提供依据。
1 仪器与试药
waters 600 高效液相色谱系统(包括 2996 PDA 检测器
及 717 自动进样器，沃特世科技有限公司);SB3200 型超声
波仪(上海必能信超声有限公司);CP225D 型电子天平(德
国赛多利斯股份公司);清炎滴丸(自制);苦玄参苷 IA 对
5242
第 32 卷 第 10 期
2 0 1 4年 1 0月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 10
Oct． 2 0 1 4
中
华
中
医
药
2426
学
刊
照品(中国食品药品检定研究院，批号:111745 － 200501，供
含量测定用)。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯、水为超
纯水。
2 方法与结果
2． 1 检测波长的确定
取苦玄参苷 IA对照品溶液在 210 ～ 400 nm 的波长范
围内扫描，记录光谱图。可知苦玄参苷 IA的最大吸收波长
在 262． 9 nm处。所以选择 263 nm作为检测波长。
图 1 光谱扫描图
2． 2 色谱条件
色谱柱:Kromasil 100 － 5C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5
μm);乙腈 －水(45 ∶ 55)为流动相;流速:1． 0 mL·min －1;
检测波长 263 nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL 。
2． 3 溶液的制备
2． 3． 1 对照品溶液 取苦玄参苷 IA 对照品适量，精密称
定，加甲醇制成即得每毫升含 0． 134 mg的溶液，即得。
2． 3． 2 供试品溶液 (1)提取溶剂的选择:取本品 30 粒，
研细，取 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入不同
的溶剂 50 mL 密塞，精密称定，充分振摇后，超声提取 30
min，提取液放冷后，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重
量，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定峰面积，计算其含量。
结果见表 1。
表 1 不同溶剂提取的比较
提取溶剂 30%甲醇 50%甲醇 70%甲醇 90%甲醇 甲醇
苦玄参苷 IA含量
(mg·g － 1)
6． 17 6． 42 6． 81 6． 57 6． 50
以上结果表明，以 70%甲醇提取含量较高，所以采用
70%甲醇作为制备供试品溶液的提取溶剂。
(2)提取方法的的选择:取上述研细样品 0． 5 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50 mL 密塞，精
密称定，充分振摇后，分别采用不同的提取方法提取 30
min，提取液放冷后，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定峰面积，计算其含量。
结果见表 2。
表 2 不同提取方法的比较
提取方法 冷浸提取 回流提取 超声提取
苦玄参苷 IA含量(mg·g －1) 3． 01 6． 62 6． 81
以上结果表明，超声提取法和回流提取法提取的苦玄
参苷 IA含量基本接近。考虑到超声提取法具有操作简便
的优点，故确定提取方法为超声提取。
(3)提取时间的选择:取上述研细样品 0． 5 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50 mL密塞，精密
称定，充分振摇后，分别超声提取不同时间，放冷，再称定重
量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液进
样，测定峰面积，计算其含量。结果见表 3。
表 3 不同超声提取时间的比较
提取时间(min) 15 20 30 40 60
苦玄参苷 IA含量(mg·g －1) 5． 89 6． 22 6． 81 6． 75 6． 79
以上结果表明，超声提取 30 min 时含量较高，延长
提取时间，含量不再升高，故确定超声提取时间为 30
min。因此，确定供试品溶液的制备方法为:取本品 30
粒，研细，取 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
入 70%甲醇 50 mL，密塞，精密称定，充分振摇后，超声
提取 30 min，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的
重量，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定峰面积，计算其含
量。
2． 3． 3 阴性样品溶液
阴性对照溶液的制备 按工艺制备缺苦玄参药材的滴
丸，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2． 4 系统适应性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液按色谱
条件进样测定，见图 2。可知，基线平稳，苦玄参苷 IA 与杂
质峰分度良好，杂质对其测定无干扰，且柱效高，峰形理想。
2． 5 线性范围的考察
精密吸取苦玄参苷 IA 对照品溶液经针头过滤器过滤
后进样，在软件内设置使自动进样器将样品按 1、2、4、8、
12、16、20 μL的体积依次进样，记录峰面积，以峰面积响应
值(Y)为纵坐标，以对照品进样量(X μg)为横坐标，绘制
标准曲线，拟合回归方程。得到回归方程为:Y =7． 77 × 105
X － 2． 05 × 104，r = 0． 999989，n = 7，线性范围为:0． 134 μg ～
2． 68 μg。在线性范围内，苦玄参苷 IA 峰面积值与进样量
有良好的线性关系，见图 3。
A
B
6242
第 32 卷 第 10 期
2 0 1 4年 1 0月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 10
Oct． 2 0 1 4
中
华
中
医
药
2427
学
刊
C
A．对照品，B．供试品，C．阴性样品，1．苦玄参苷 IA
图 2 高效液相色谱图
图 3 校正曲线图
2． 6 精密度试验
精密吸取上述同一份的对照品溶液 10 μL和同一份的
供试品溶液 20 μL，分别在上述的色谱条件下连续进样 6
次，计算峰面积的 ＲSD分别为 0． 51%和 0． 88%。
2． 7 稳定性试验
取同一份供试品溶液分别于 0、1、2、4、6、8、10、12 h，分
别进样 20 μL，测定苦玄参苷 IA的峰面积，ＲSD为 0． 62%，
稳定性良好。
2． 8 重复性试验
对同一批样品分别取样 6 份，按拟定的含量测定方法，
制备供试品溶液，在上述的色谱条件下测定供试品溶液和
对照品溶液的峰面积，计算苦玄参苷 IA 的含量，并计算
ＲSD值。平均含量为 6． 81 mg·g －1，ＲSD为 1． 09%。
2． 9 回收率试验
取本品 6 份，每份 20 粒，分别研细，分别取 0． 25 g，精
密称定，精密加入苦玄参苷 IA对照品适量(用 70%甲醇制
成的苦玄参苷 IA 对照品溶液 10 mL，0． 1704 mg·mL －1)，
按上述供试品溶液的制备方法制备成加样回收供试品溶
液，测定峰面积，计算其含量。结果见表 4。试验结果表
明，回收率在 95% ～100%之间，回收率良好。
表 4 回收率测定结果(n = 6)
试验
号
样品量
(g)
样品中苦玄参
苷 IA含量(mg)
加入苦玄参
苷 IA(mg)
测出苦玄参
苷 IA(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
1 0． 2533 1． 725 1． 704 3． 423 99． 65
2 0． 2476 1． 686 1． 704 3． 349 97． 58
3 0． 2508 1． 708 1． 704 3． 388 98． 59 98． 54
4 0． 2542 1． 731 1． 704 3． 427 99． 52 (ＲSD = 0． 94%)
5 0． 2492 1． 697 1． 704 3． 358 97． 47
6 0． 2517 1． 714 1． 704 3． 391 98． 41
2． 10 样品测定
按照上述的含量测定方法，分别对 3 批样品进行含量
测定。见表 5。
表 5 样品中苦玄参苷 IA的含量测定结果
批号 苦玄参苷 IA(mg·g － 1) 平均值(mg·g － 1)
1
6． 801
6． 832
6． 81
2
6． 581
6． 575
6． 58
3
6． 752
6． 727
6． 74
3 讨 论
对于提取条件的选择，在供试液制备方法考察中，曾对
不同种类的提取溶剂氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇等进行了
考察，结果表明，氯仿、乙酸乙酯、乙醇等提取的样品，存在
峰面积较小或样品溶液杂质干扰较大等不足，同时，结合相
关文献［4 － 6］，选择了甲醇作为提取溶剂，并对不同浓度的甲
醇溶液、不同提取方法、不同提取时间的提取效果进行了系
统考察，结果表明，以正文收载的供试液制备方法提取的样
品最优。
本研究考察了不同比例的乙睛 －水流动相系统，结果
表明，选择采用乙睛 －水(45 ∶ 55)作为流动相，有峰形及分
离度良好、出峰时间快等优点。
在高效液相色谱定量分析中，通常采用某一母液稀释
成一系列浓度的标准溶液，利用每个不同浓度标准溶液得
到不同响应值而制备标准曲线，操作步骤较为繁锁。本试
验的标准曲线是用体积定量法(自动进样器)进行绘制的，
所以与传统方法相比较，采用不同体积产生不同响应值的
办法获得标准曲线，简化步骤，方便快捷。其所获得曲线的
相关系数(r)更好，可达到 0． 9999 以上，曲线标准差(S)精
密度更高，更准确。此方法的优势已被相关论著证明。用
新方法定量未知样品时，进样体积，可以根据需要灵活调
整，不受限制。所以，随着自动进样器的普及，此法应得到
推广应用。
笔者在本实验中所建立方法，能达到有效分离各组分
的目的。该法重复性及稳定性好、提取方法简便、稳定，专
属性强，可作为本品的质量控制方法。
参考文献
［1］ 周斌，刘可越，常军．中药肿节风的化学成分和药理作用研究
进展［J］．中国现代应用药学杂志，2009，26(12) :982 － 986．
［2］ 岑菲菲，甄汉深，宋志华．苦玄参化学成分和定量分析研究进
展［J］．时珍国医国药，2008，19 (2) :290 － 292．
［3］ 黄永林，陈月圆，文永新，等． 苦玄参的化学成分研究［J］． 广
西植物，2010(6):887 － 890．
［4］ 唐秀玲，吕轶峰． HPLC 法测定妇炎净胶囊中苦玄参苷 IA 的
含量［J］．中国药师，2011，14(3):429 － 431．
［5］ 陈勇，甄汉深，刘蜻，等． HPLC 法侧定苦玄参中苦玄参苷 IA
的含量［J］．世界科学技术一中医药现代化，2006，8(2):28 －
31．
［6］ 石天松． HPLC法测定消炎灵片中苦玄参苷 IA的含量［J］．中
国药师，2012，15(5):674 － 675．
7242