全 文 ：第 卷 第 期
年 月
中 华 中 医 药 学 刊
日
含耳叶牛皮消普 血清的抗肿瘤作用实验研究
淘锋 , , 张如松
浙江医学高等专科学校药学系 浙江 杭州 浙江中医药大学药学院 浙江 杭州
摘 要 目的 研 究含耳叶牛皮消苍 血清对肿瘤细胞的抑制 作用及细胞形 态变化 。 方法 选择 大
鼠 , 采用灌胃方式给予 , 待血药浓度到高峰时取血 , 法确 定含药血清对多种肿瘤 细胞的生长抑制作用 , 并
通过倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形 态学的改变 。 结果 含 血清对多种肿瘤 细胞均具有抑制作用 , 并
在倒置显微镜和荧光显微镜下可 以看到显著的细胞凋亡形 态学变化 。 结 论 经代谢后 的 血清仍具有抑制肿
瘤细胞生长作用 , 且具有诱导肿瘤细胞凋亡的能力 。
关键词 耳叶牛皮消苍 血清药理学 抗肿瘤
中图分类号 文献标志码 文章编号 一 一 一
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中华医药
白 首 乌 系 萝 摩 科 鹅 绒 藤 属 植 物 耳 叶 牛 皮 消
仰 、 矶 的干燥块根 。 是
一味补气养益的常用中药 。 研究发现 , 昌体是白首乌的
主要活性 成分 ,具 有清除 体内游 离基 ,调 节免疫 等作
用 「 一 」 达到抗肿瘤的功效「 一 」 。 耳叶牛皮消普 是
本课题组从白首乌 昌体总普中分离得到的单体化合
物 其结构见图 。 前期研究中发现 ,耳叶牛皮消普 体
内外抗肿瘤作用相差较大 ,所以有必要研究其代谢产物
与抗肿瘤作用的关系 。 本次研究通过考察 含药血清对
肿瘤细胞的抑制作用 ,为今后探讨 代谢物的抗肿瘤机
制打下相应基础 。
材 料
细胞株
小鼠黑色素瘤 一 细胞 ,人肺癌 细胞 ,人结肠
癌 细胞 ,人急性髓性白血病 细胞 ,人前列腺
癌 一 细胞 由浙江省医学科学院药物研究所提供 。
实验动物
清洁级 大 鼠 ,雄性 , 购自浙江中医药大学动物中
心 许可证号 沪 一 。
学刊
收稿日期 一 一
基金项目 浙江省医药卫生科学研究基金资助 项目
作者简介 陶锋 一 男 讲师 博士 研究方向 天然药物化学 。
通讯作者 张如松 一 男 教授 博士研究生 导师 研究方向
中药药效物质与创新药物的研究开发 。
图 耳 叶牛皮消奋 的结构
含药血清制备
取 只 大鼠 。 以 的剂量给予 ,
第 给药 后相同剂量再给药 次 江 后 腹腔静脉取
血 血液合并 。 置 冰箱过夜 ,离心 印 ,
分离出血清 所 灭活 置 一 冰箱保存 。
试剂
培养基 ,含双抗 , 公 司 新生小牛血
清 航州四季青生物工程材料研究所 胰蛋白酶 ,上
海生工公司 进口分装 二甲基亚砚 ,无锡海硕生物有限公
司 四甲基偶氮哩盐 航州昊天生物技术有限公司
叮噬橙 土海试剂站分装 。
仪器
细胞培养箱 一 美国 介
DOI :10.13193/j.issn.1673-7717.2013.10.075
第 卷 第 期
年 月
中 华 中 医 药 学 刊
公司 超净工作台 一 苏州安泰空气技术公
司 侄置显微镜 一 日本 公司 酶标仪 一 司
美国 一 公司 倒置显微镜 一 、 荧光显
微镜 旧本 公司 。
方 法
法测定含 血清对肿瘤细胞的抑制率
取对数生长期的小 一 细胞 、 细胞 、
细胞 、 细胞 、 一 细胞 ,将所选的细胞数接种于
孔板上 江 林 孔 。 培养 后加如含药血清及空白血
清 始药血清终浓度分别为 、 、 、 巧 、 。
每组设 复孔 焙养 后 海孔加入 林
焙养 后倾去培养液 ,分别加入 巧 林 溶解 振摇后 。 用酶标仪在 波长处测定 值 。 并算出
不同浓度 对肿瘤细胞的抑制率 。
抑制率计算公式
正 常对照孔 给药孔
正 常对照孔 空白对照孔
合凋亡的形态特征 。 如插页 图 所示 。
荧光显微镜观察结 果 经叮噬橙染色后在荧光显
微镜下观察显示 尸 一 正常对照组细胞核大 核内染色质
分布均匀 ,呈绿色荧光 并且细胞分裂旺盛 。 含药血清组则
出现具有细胞凋亡的特征如 细胞体缩小 、 核固缩 、核断裂 、
部分细胞膜崩解 ,核内染色质分布不均匀等 插页 图
所示 。 该结果和倒置显微镜中观察的结果相吻合 。
讨 论
许多研究表明 大量中药提取物体内外抗肿瘤效果相
差较大 其原因在于它们在体内代谢后抗肿瘤活性发生了
改变 因此研究这些物质在体内代谢情况和抗肿瘤作用 的
关系是非常必要的 一 。」 。 中药血清药理学是 年日本
学者田代真一提出的一种能客观反映药物代谢后发挥效应
过程 符合中药特点的科学药理实验方法 。 为中药白
首乌中一个抗肿瘤活性单体 ,前期研究中发现此化合物抗
体内抗肿瘤效果强于体外抑瘤能力 ,所以研究其代谢情
况和抗肿瘤关系有重要意义 。
本次研究采用 中药血清药理学方法考察了含 血清
的抗肿瘤作用 发现其对多种肿瘤细胞均有生长抑制作用 ,
表明 经代谢后仍然具有显著的抗肿瘤活性 ,且具有明
显的量 一效关系 。
调亡细胞 、 活细胞和坏死细胞在形态学上有显著差异 ,
根据相应特征可以区别开来 。 细胞调亡可用多种方法同时
检测 倒置显微镜和荧光显微镜观察是最常用的方法之一 。
本次研究中发现含药血清组中的 一 细胞形态发生了
一系列符合细胞凋亡的特征 ,初步证实了 在体内具有
诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,同时也为 体内作用机制进
一步探索打下 了基础 。
参考文献
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中华医药
含药血清对细胞形态学的影响
倒置显微镜观察 取对数生长期的 一 单细胞
悬液 调整细胞浓度以 了个 孔细胞数接种于 孔培养
板上 海孔 。 设正常对照组 孔 。 置于 、
饱和湿度的培养箱培养 ,给药组加入对肿瘤细胞抑制
作用较强的含药血清 。 正常对照组加入等量培养液 ,置于
、 饱和湿度的培养箱中继续培养 得到观
察所需的供试液 。 在倒置显微镜下观察 一 肿瘤细胞
形态 并比较正常对照组和给药组的区别 。
荧光显微镜观察 取上述 法所制得的观察
所需的供试液 平板式离心机离心 印 、 。 弃上
清液 。 用无 十 、 十 的 液洗涤 次 海次洗涤后
均离心 去除细胞碎片及杂质 。 每孔加入叮噬橙 林 ,室
温避光染色 尸 洗 次 ,于荧光显微镜 激发光波
长 一 吸收波长为 下观察细胞形态 ,并
比较正常对照组和给药组的区别 。
结 果
含 血清对肿瘤细胞的抑制率
含 血清对肿瘤细胞的抑制作用见表 。 结果表明
含药血清对肿瘤细胞具有显著的抑制能力 且含药血清浓度
越高 对细胞的生长抑制率越高 ,呈现显著的剂量 一 效应关
系 。 而空白组血清的抑制率随浓度的增加 基本保持不变 。
表 含药血清对肿瘤细胞的抑制作用 弄士 、
不同血清浓度抑制率瘤株 组别 —一 空白血清组 士 士 士 士 男士含药血清组 士 士 士 士 阶 士空白血清组 士 士 士 士 士含药血清组 士 士 士 士 士心 空白血清组 士 士 士 士 他 士含药血清组 士 士 士 士 士一 空白血清组 士 士 士 竹 士 士含药血清组 士 士 士 士 士一 空白血清组 士 士 士 士 士含药血清组 士 士 士 士 士含药血清对细胞形态学的影响倒置显微镜观察结果 倒置显微镜中观察显示 ,一 正常对照组细胞生长旺盛 ,形态单一 、 饱满 、 折光率
大 、 立体感强 。 含药血清组中出现细胞数量逐渐降低 形态
不规则化并出现皱缩 破碎细胞逐渐增加 折光率降低等符
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