全 文 ：分析测试
文章编号:1002-1124(2006)02-0037-03　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
高效液相色谱法测定不同
产地苦玄参中苦玄参苷 IA含量
郑成远 ,钟　宏
(中南大学 化学化工学院 ,湖南长沙 410083)
　　摘　要:建立了高效液相色谱法测定不同产地苦玄参中苦玄参苷 IA 含量的方法。色谱条件为:Kro-
masil C-18 柱 (4.6mm ×250mm , 5μm), 柱温为 35℃;流动相乙腈-0.5%醋酸=36:64 , 流速为 1.0mL·
min-1 ,检测波长为 264nm。苦玄参苷 IA 含量在 2.42 ～ 21.78μg·mL-1范围内线性关系良好 , 回收率在
96.05%～ 101.65%之间。该方法操作简单 , 结果准确 ,重现性好 ,可用于苦玄参药材及其饮片的质量控制。
关键词:苦玄参;苦玄参苷 IA;高效液相色谱
中图分类号:O657.71　　文献标识码:A
Determination of picfeltarraenin IA in picria fel-tarrae lour by HPLC
ZHENG Cheng-yuan , ZHONG Hong
(College of Chemistry and Chemical Engineering ,Central South University ,Changsha 410083, China)
　　Abstract:Content of picfeltarraenin IA in picria fel-tarrae was determined by HPLC.The chromatographic analysis
was carried out using a Kromasil C-18 column and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.5%(volume fraction)
acetic acid water(36:64 , v/ v , in 20min).The flow rate was 1.0mL·min-1.A diode array detector was used to detect
the compounds and 264 nm was chosen as the detection wavelength.The whole process could be performed within 20
minutes.The operating curves were found to be linear over the ranges of 2.42 ～ 21.78μg·mL-1(r=0.99985).The re-
covery was found in range of 96.05%～ 101.65%.The method is simple , convenient and accurate with good repro-
ducibility and little in terference.
Key words:picria fel-tarrae;picfeltarraenin IA;HPLC
收稿日期:2006-01-04
作者简介:钟宏(1961-),浙江龙泉人 ,畲族 ,博士 , 中南大学教授 ,
博士生导师 ,发表学术论文 100余篇。
　　苦玄参来源于玄参科苦玄参属植物苦玄参(Pi-
criafel-tarrae Lour)的干燥全草 ,又名苦草 ,蛇总管 。
在广西民间作为药用已有很长历史 ,其性寒味苦 ,主
治风热感冒 、咽喉肿痛 、痄腮 、疖肿 、泄泻痢疾 、痔疮 、
湿疹 ,毒蛇咬伤 、跌打损伤 、毒蛇咬伤等 ,具有清热解
毒 ,凉血消肿之功效[ 1 ,2] 。该药已收载于《广西中药
材标准》1990年版。2000版中国药典正文中尚未记
载该品种 ,而以其为原料的中成药如妇炎净胶囊已
记载入中国药典中 。因此 ,对苦玄参药材有效成分
含量测定进行研究有重要意义 。
国内外对苦玄参进行研究 ,发现其有效成分主
要为四环三萜苷类。本实验以苦玄参苷 IA 作为苦
玄参的主要指标性成分 ,探索了其含量测定的方法 ,
同时对不同产地苦玄参中苦玄参苷 IA含量进行测
定 ,为苦玄参药材的内在质量控制和品质提供科学
依据 。
1　仪器与试剂
戴安高效液相色谱仪:P680A LPG 四元低压梯
度泵(在线脱气);TCC-100 型柱温箱 ,UVD170U型
紫外检测器(200 ～ 595nm);PDA-100型二极管阵列
检测器和 PeakNet色谱工作站;Kromasil C-18色谱
柱 ,250×4.6mm , 5μm;FA2004型电子天平(上海天
平仪器厂);SYZ-A型石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏
省宜兴市勤华石英玻璃仪器厂);KQ2200型超声波
清洗器(昆山超声仪器有限公司);溶剂过滤器 ,
0.45μm微孔滤膜(上海医药工业研究院)。
甲醇和乙腈(色谱纯　中国医药集团上海化学
试剂公司);苦玄参苷ⅠA对照品(Sigma公司);苦玄
参分别购自湖南张家界 、广西梧州 、安徽亳州 、江西
樟树和河南商丘。
2　实验部分
2.1　对照品和供试品溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备　精密称取苦玄参苷 IA
Sum 125 No.2　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
化 学 工 程 师
Chemical　Engineer 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006年 2月
DOI :10.16247/j.cnki.23-1171/tq.2006.02.015
6.05mg置 50mL 的容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀得浓度为 121mg·L-1的对照品溶液 。
2.1.2　供试品溶液制备　精密称取约 2g 苦玄参药
材粉末于 100mL 锥形瓶中 ,加入 45mL 80%甲醇浸
泡10min ,超声 20min ,滤过 ,以少量 75%甲醇洗涤药
渣 ,合并滤液并定容至 50mL 容量瓶中。取样品溶
液5mL 于微型离心管 , 以 10000r·min-1速度离心
10min ,取上清液置 HPLC 用样品瓶中 ,备用。
2.2　色谱条件
色谱柱为 KromasilC -18 柱(4.6mm ×250mm ,
5μm),柱温为 28℃;流动相乙腈 -0.5%醋酸(36:
64 , v/v);流速为 1.0mL·min-1;检测波长为 264nm;
进样量20μL。
3　结果与讨论
3.1　检测波长的选择
本实验使用 C18柱对苦玄参药材提取液进行测
定 ,用 DAD检测器可获得色谱-光谱三维图谱 ,进
样后得到苦玄参苷 IA的最大吸收波长为 264nm 。
3.2　流动相的选择
文献使用乙腈-0.5%醋酸混合液作流动相 ,本
实验根据实际进样情况 ,流动相配比有所改变 ,试验
选定乙腈-0.5%醋酸(36:64)作为流动相 ,苦玄参
苷 IA在 16min 左右出峰 ,与相邻组分达到基线分
离 ,且色谱峰无拖尾 ,能够完全满足色谱定量要求 。
3.3　样品提取条件的选择
3.3.1　提取溶剂的选择　分别以氯仿 、乙酸乙酯 、
甲醇 、EtOH作为溶剂对苦玄参药材进行提取 ,提取
液用 HPLC 测定 ,结果表明 ,氯仿 、乙酸乙酯提出的
苦玄参苷 IA的峰面积较小 ,甲醇 、EtOH提取液峰面
积相近 ,而 EtOH黏度较大 ,故选择甲醇作为提取溶
剂。
3.3.2　提取方式的选择　分别采用冷浸法 、索氏提
取法 、超声波提取法对苦玄参药材进行提取 ,提取液
用HPLC测定苦玄参苷 IA的含量 ,结果发现用超声
提取效率最高。
3.3.3　提取溶媒浓度的确定　取同一批药材 ,用甲
醇超声提取 ,试验不同溶媒浓度(100 、90 、80 、70 、60 、
50 、40 、30%),不同提取时间对样品提取的影响 ,表
明用 70%甲醇超声提取 20min得到苦玄参苷 IA含
量较大 ,且提出的色素较少 ,滤过速度适中 ,提取时
间不长。
3.4　校准曲线
将2.1.1对照品溶液稀释成不同浓度 ,注入高
效液相色谱仪 ,按 2.2色谱条件测定峰面积 ,以对照
品的浓度为横坐标(x),峰面积为纵坐标(y),绘制
标准曲线 , 得到回归方程 y =824.560494x -
8.5165053 ,相关系数 r =0.99985。苦玄参苷 IA 在
2.42 ～ 21.78μg·mL-1范围内线性关系良好 。
3.5　精密度试验
吸取苷 IA的对照品溶液 ,连续进样 5 次 ,测定
其峰面积值 ,其峰面积的 RSD=1.24%(n=6)。
3.6　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,于配制后 0 , 5 , 10 , 20 , 30d
后进样 ,测定苦玄参苷 IA的峰面积 , RSD =2.3%(n
=6)。
3.7　重现性试验
精密称取 5份苦玄参药材粉末 ,每份约 2g ,依
照 2.1.2供试品溶液制备方法提取 ,分别进样 20uL ,
测定苦玄参苷 IA的峰面积 ,RSD=1.74%(n=5)。
3.8　回收率试验
精密称取已测得苦玄参苷 IA含量的样品 5份 ,
每份 2.0g ,分别精密加入苦玄参苷 IA对照品溶液适
量 ,混匀 ,蒸干 ,按照 2.1.2 供试品溶液方法制备待
测液 ,按 2.2 色谱条件测定。回收率在 96.05%～
101.65%。
3.9　样品测定
分别精密称取 5个不同产地的苦玄参药材粉末
约 2g ,按供试品溶液制备法制备成样品溶液 ,进样 ,
结果见表 1。5个产地苦玄参药材样品 HPLC 图见
图 1 ～ 5。
图 1　湖南张家界苦玄参提取液 HPLC 色谱图
图 2　广西梧州苦玄参提取液HPLC 色谱图
图 3　安徽毫亳州苦玄参提取液 HPLC 色谱图
38 郑成远等:高效液相色谱法测定不同产地苦玄参中苦玄参苷 IA 含量　　　　　　　　　2006年第 2期
图 4　江西樟树苦玄参提取液 HPLC 色谱图
图 5　河南商丘苦玄参提取液 HPLC
表 2　样品测定结果(n=3)
产地　　　 含量/ % RSD/ %
湖南张家界 0.187 1.30
广西梧州　 0.238 1.72
安徽亳州　 0.431 2.4
江西樟树　 0.373 3.67
河南商丘　 0.206 1.33
　　结果显示不同产地苦玄参药材中苦玄参苷 IA
的含量差异较大。
4　结论
本实验对苦玄参有效成分的提取条件 、检测波
长 、色谱分离条件等方面进行了探索 ,实验结果证明
本实验方法提取到的苦玄参苷 IA 量较多 ,样品在
30d内稳定 ,用 RP -HPLC 法作为苦玄参药材中苦
玄参苷 IA的含量测定方法 ,方法准确度 、重现性好 ,
而且简便 、快速 、可靠。可作为中药苦玄参的质量控
制方法。
不同产地含量测定显示 ,各地苦玄参药材中苦
玄参苷 IA的含量差异较大 ,安徽亳州和江西樟树所
产苦玄参药材中苦玄参苷 IA的含量较高。含量的
差异与很多因素有关 ,与采收的季节也有关系 ,本实
验中由于样品采收的季节不完全相同 ,因此 ,有所差
异。今后可用本方法对苦玄参的最佳采收期及最适
加工方法进行进一步考究。
参　考　文　献
[ 1] 　广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准(1990年版)[ M] .南
宁:广西科学技术出版社 , 1992.225.
[ 2] 　中国药材公司.中国中药资源志要[M] .科学出版社 ,
1994.1149.
(上接第 36页)
表 2　加标回收实验
化合物
样品
/mg
加入量
/mg
测定值
/mg
回收率
/%
平均值率
/ %
芪类化合物 39.0 10.0
20.0
30.0
40.0
50.0
48.4
58.6
68.8
78.3
88.8
98.5
98.9
99.4
98.3
99.6
98.9
　
　
　
　
蒽醌类化合物 33.6 10.0
20.0
30.0
40.0
50.0
46.1
54.8
66.5
74.1
85.5
107.3
103.5
108.7
101.6
105.8
105.4
　　结果表明 , 芪类化合物平均加标回收率为
98.9%。蒽醌类化合物平均加标回收率为 105.4%。
2　结论
(1)本文提出了虎杖提取液中芪类(以白藜芦醇
为代表)和蒽醌类化合物(以大黄素为代表)紫外分
光光度同时定量测定的方法。
(2)白藜芦醇 、大黄素二者在紫外区吸收光谱相
互重叠 ,改变体系的 pH 值可影响白藜芦醇 、大黄素
羟基存在形式 ,从而改变其紫外吸收光谱。通过加
入一定量 NaOH ,使白藜芦醇 、大黄素紫外吸收峰位
移动 ,部分消除了谱峰重叠问题 ,实现了虎杖提取液
中芪类和蒽醌类化合物的定量分析。
(3)采用标准加入和平行测定对方法进行考察 ,
芪类类化合物的加标回收率为 98.3%～ 99.6%, 5
次平行测定 RSD为 1.4%(平均含量为 1.95%);蒽
醌类化合物的加标回收率为 101.6%～ 108.7%, 5
次平行测定 RSD为 2.1%(平均含量为 1.68%),其
结果与HPLC法测定结果能较好吻合。
参　考　文　献
[ 1] 　孟昭仁 ,奚洪民,刘进帮 ,等.[ J] .化学世界, 2002 ,(10):511-514.
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392006年第 2期　　　　　　　　　　郑成远等:高效液相色谱法测定不同产地苦玄参中苦玄参苷 IA含量