全 文 ：00 6 2第八卷 第二期 ★ V. o l8 No Z
H P LC法侧定苦玄参中苦玄参替 IA的含量 “
口陈 勇 * *甄汉深 刘
(广西中医学 院药学院 南宁
蜻 李耀华 叶 乐
5 30 0 1)
摘 要 :目的 :建立苦玄参药材 凡 i ra e f z一 e t ~o L盯 .的含量侧定方法 。 方法 :P R一 H P Lc法 , 采用
C ,: o D S Z柱 (5协m , 4 . 6 x Z s o m m ) , 乙睛 一 0 . 3%磷酸 (3 4 : 6 6 )为流动相 ,流速为 l m L /m i n ,检坝q波长为 2 6 4 r lm 。
结果 : 苦玄参普 IA进样量在 .0 42 林g 一 2 . or 林g 的 范围内呈 良好的线性关 系 , r 二 .0 9 9 , 平均 回收率为
10 .4 %
,
RS D=l
.
64 % (=n 6 )
。 结论 : 该 法操作简便 、 准确 、 专属性强 , 可作为苦玄参药材的质量控制方
法 。
关键词 : 苦玄参 苦玄参普 I , 含量测定 高效液相 色谱法
苦玄参 凡 ir a fe l一 et ~ oL ur .为玄参科苦玄参属唯一 的一种植物 , 主要分布于广西 、 广东及云南等
地 。 其作为广西民间用药 已有 20 多年历史 ,具有清
热解毒 , 凉血 消肿 之功效 ,用 于治疗感 冒风热 、 咽喉
肿痛 、 痒腮 、 胃热腹痛 、 痢疾 、 跌打损伤 、 毒蛇 咬伤及
痈疖等川 , 因其味极苦 ,别名又称苦草 。
苦玄参是广 西民间常用药 , 2 005 版中国药典正
文中尚未收载该品种 ,但有些 以其为原料的中成药如
妇炎净胶囊等已收载人中国药典 ( 20 0 年版及 20 5
版 ) l2] 。 对苦玄参药材及其中成药 中苦玄参昔 IA 含量
的测定 已有相关报道 3[ 间 , 但均采用薄层扫描法测定 ,
本文则采用 H PCL 法对不 同产地 、不 同采收季节苦玄
参中苦玄参昔 IA 进行含量测定 , 现报道如下 。
一 、 仪器与试剂
. 仪 器
A isl en t 110 0 高效液相 色谱仪 (美 国安捷 伦公
司 ) ; G B 1S B 一D A D 二极管 阵列检测器 : G 13 14 A一 V W D
可 变 波 长 检 测 器 ; A刘en t 化 学 工 作 站 ; H yeP sr il
C , , O D SZ 色谱柱 ( 5协m , 4 . 6 x 2 5 0m m , 大连 依利 特公
司 ) ; B 2P l l D 电子分 析天平 (德 国赛多利斯公 司 ) ;
M i ll i p o r e s im p l i e i ty 一 18 5 超 纯水 器 (美 国密 理 博公
司 ) ; SB 3 2X() T 超声波清洗 器 (上海必能信有限公司 ) ;
L1G 6
一W 离心机 (北京医用离心机厂 ) 。
2
. 试 剂
苦玄参昔 IA 对照品 由广西桂林植物研究所植化
室梁小燕 老师提供 , 经 H P L C 归一化法检测 ,含量达
到 9 .8 0% 以 上 。 乙睛 为色谱纯 (天津 四友生物医 学技
术有限公司 ) , 水为超纯水 , 其余所用试剂均为分析
纯 。
本实验所用药材经广西 中医学 院药学院陈勇教
授鉴定为玄参科植物苦玄参 凡 ir a fe l一 et ~ 肠 ur . 的干燥全草 。
* *
28
收稿 日期 : 20() 5一 10 一2 8
修回 日期 : 2 (洲)6一 03 一20
科学技术部西部开发科技行动资助项 目 (Zo BZ A90 lA 14 一C ) : 广 西特产中草药苦 玄参质量标准研究 , 负责人 : 陈勇 。
联系人 : 陈勇 ,教授 , 广西中医学院药学院副院长 , 从事中草药及其制剂的质量分析 , eT L 07 71 一 31 37 5 85 , E一 m al : cy 63 81 @ 16 3 .co m 。
〔W。而 cs ic cn 。 山1汉 eT ch on 肠爵八而 de 、 女at 衍 n of rT 口d i如耐 hC i , eS eM idc i en a n d M山 e o eM d ic司
世界科学技术一中医药现代化 ★基础研究
二 、 含最测定方法与结果
1
.供试品溶液的制备
精密称取约 29苦玄参药材 (全草 )干燥粗粉 , 置
l o m L 具塞锥形瓶 中 , 精密加人 75 % 甲醇 25 m L , 超
声处理 30 m in , 放冷 , 补足重量 , 滤过 , 滤液备用 。 取上
述样 品溶液 l m L 于微型离心管 中 , 以 10() 0() r/ m in 速
度离心 10 m in , 取上清液备用 , 即得 。
2
. 对照品溶液 的制备
精密称取苦玄参昔 I A 对照品适量 (5 . 25 m g ) , 置
2 5m L 量瓶中 ,用适量 甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得浓度为 0 . 2 1m g /m L 的对照品溶液 。
3
. 色谱条件
色谱柱为 C l : o D SZ 柱 (5卜m , 4 . 6 x 2 5 0m m , 大连依
利 特公司 ) , 流动相为 乙睛 一 0 . 3%磷 酸 (3 :4 66) , 流速为
l m U m in
,检测波长 为 264 n m , 柱温为 25 ℃ , 理论塔板
数按苦玄参昔 I* 计算应不低于 3 0 0 0 。 在上述色谱条
件下 , 供试 品中苦玄参昔 I A 色谱峰能与其它成分分
离 , 色谱图见 图 3 , 图 4 。
4
. 线性关 系考察
分别精密 吸 取 上 述苦玄参昔 IA 对 照 品溶 液
(0
.
2 1m g /m L )2林L 、 4卜L 、 6林L 、 8林L 和 10林L , 注 人液 相
色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰面积值 。 以峰面积为
纵坐标 ,对照 品进样量伽 g )为横坐标 ,绘制标准曲线 ,
并求出回归方程为 y = 773 . x0 +l . 85 , : 二 0 . 9 9 9 。 结果表
明苦玄参昔 I A 进样量在 .0 4 2 ~ 2 . 10 林g 间呈 良好线性
关系 , 结果见表 1 , 色谱图见图 1 , 标准曲线见 图 2 。
5
. 精密度试验
精密 吸取 苦玄 参 昔 I A 对 照品 溶液 (0 . l2 m g /m )L
5林L , 注人液相色谱仪 , 重复进样 5 次 ,测定苦玄参昔
IA 峰面积值 ,计算 R SD = 0 . 21 % , 结果见表 2 。
6
. 稳定性试验
取供试品溶液 (宁 明 ) , 每隔 4 小时分别进样
or 林L , 测定苦玄参昔 I A 峰面积值 , 计算 R SD = 0 . 10 % ,
表明供试品溶液在 2 4 小时内保持稳定 ,结果见表 3 。
7
. 重复性试验
精密称取 同一 产地供试 品 (平乐 )各 5 份 , 按样
品测定项下方法进行测定 ,结果见表 4 。
8
. 加样回收率试验
精密称取 .0 2 9 已测知苦玄参昔 IA 含量的供试品
(龙州 )干燥 粗粉 ,分别精密加人一定量的苦玄参昔 I^
对照品溶液 (0 . 2 1m g /m L ) Zm L , 按供试 品溶液制备方
法制备待测溶液 ,按上述色谱条件测定 , 计算加样 回
收率 ,结果见表 5 。
9
. 样品测定
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液 (0 . 21 m g /
表 1 苦玄参普 IA 线性关系考察结果
序 号 进样量恤目 峰面积 ()A
1 0
.
42 3 30
.
0
2 0
.
84 6 55
.
0
3 1
.
2 6 9 94
.
8
4 1
.
6 8 133 1
.
3
5 2
.
10 1630
.
0
表 2 精密度试验结果
进样次数 峰面积 (A ) 平均峰面积 (习 R S (D %)
1 86 8
.
9
2 87 2
.
6
3 87 2
.
6 87 0
.
7 0
.
2 1
4 870
.
0
5 86 9
.
3
表 3 稳定性试验结果
时间沙时 ) 峰面积 ()A 平均峰面积 (习 R S (D % )
0 19 85
.
1
4 19 80
.
9
8 19 80
.
0 19 82
.
2 0
.
10
12 198 2
.
8
16 1 980
.
9
20 198 2
.
5
2 4 198 3
.
0
表 4 重复性试验结果
序 号 含量 (m岁g ) 平均含量 (m岁g ) RS (D% )
2
.
50 0
.
76
飞àOQ了…5今ù2,`ù且勺`,J
2
.
48
2
.
49
『。而 cS 比cn 。 山己d eT hc on l o郡报 dde r’n ` at 勿 n of rT ad it勿耐 hC ien se eM idc i en a n d M 泛对e iar eM idc 司
20 6第八卷 第二期 ★ V. olS N认 2
mL )各 0 1林 L, 注人液相 色谱仪 , 测 定峰 面积 值 , 结 果
见表 6 , 色谱 图图例见图 3( 梧州 )和图 4( 龙州 ) 。
三 、 讨 论
1
. 分 别以 甲醇 、 乙醇 、 氯仿 、 乙 酸乙 酷为溶剂对
苦玄参进行超声提取 , 提取液进行 H P LC 测定 。 结果
表明 , 甲醇 、 乙 醇提取液测得 色谱峰 的峰面积最大 ,
但 乙醇 比甲醇的勃度大 , 不利于滤过净化处理 , 于是
选用 甲醇为提取溶剂 。 比较 以 不同浓度 甲醇为溶剂
所测的峰面积 , 结果 7 5% 甲醇测得的峰面积最大 , 故
本实验选用 75 % 甲醇进行提取 。
2
. 分别采 用 回流 提取 法和 超声 提取法 进行 提
取 , 所得 提取液采用 H PL C 法测定苦玄参 昔 I人 色谱
峰的峰面积 。 结果表明 , 超声提取法测得苦玄参昔 L
含量较高 , 且 时间较 短 , 无其他组 分峰干扰 , 操作 步
骤简单 ,故本实验采用超声提取法进行提取 。
表 5 加样回收率试验结果
序号 原有量
(m g)
0
.
5 104
0
.
5 105
0
.
5 1 12
0
.
5 1 10
0石0 93
0
.
5 14 4
加入量
(m g )
汉吐得量
(m g )
0
.
9 2 2 3
0
.
9 3 1 0
0
.
9 4 12
0
.
9 30 9
0
.
9 26 8
0
.
94 36
回收率
( % )
X
(% )
RS D
吸% )
0
.
4 2
0 4 2
0
.
4 2
0
.
4 2
0
.
4 2
0
.
42
9 8
.
10
10
.
1
10 24
100 刀
99
.
40
10 2
.
2
10
.
4
表 6 样品含且测定结果《n 二 2)
批号 (或产地 )
03 10 1 3
03 12 1 7
04 02 1 8
04 0 83 0
04 10 1 2
平乐
宁明
梧州
越南
龙州
龙州 (叶子 )
峰面积 ()A 平均含量 (m郭助
24 64
.
8
26 6 1
.
8
2 164
.
7
15 2 1
.
2
2 0 15
.
0
19 5 1
.
1
19 82
.
8
3 l 0()
.
9
30 16
.
0
22 54
.
0
2 464
.
7
2
.
7 5
2
.
97
2
.
4 2
1
.
7 2
2 2 3
2
.
2 1
2
.
25
3
.
5 1
3
.
4 2
2
.
5 6
2
.
80
3 0 〔W o ldr S c ic nc e 超nZ 之1 eT e h n o lo 邵诩 `de nr `: at io n of rT 更dz it如 n斑 hC i ne s e Me d ic ine an d M `扛巴lar Me d ic a 〕
世界科学技术一中医药现代化★基础研究
3
.利用 DA D检测器可 同时获得 色谱 一光谱三维
图谱 , 从该图谱中可得 出苦玄参普 I、 的最大吸收波
长 , 进 样 后 测得 苦玄参 昔 I A 的最 大 吸 收 波 长 为
2 64
n m
。
4
. 本实验采用乙睛 一0 . 3%磷酸为流动相 ,改变流
动相配 比进行最佳流动相的选择 ,结果表 明 , 苦玄参
昔 IA 在流动相为乙睛 一 0 . 3%磷酸 ( 3:4 66) 时与相邻组
分峰分离度 R >1 . 5 , 达到分离要求 , 能完 全满足 色谱
峰定量要求 。
5
. 对同一产地 (龙州 )苦玄参 中不同部位 (全 草
和叶子 )的苦玄参昔 IA 含量进行考察 , 发现叶子所含
苦玄参昔 IA 较全草高 ,但相差不大 , 说明苦玄参昔 I、
主要存在于叶子 。
6
. 不同产地药材含量测定结果表 明 , 梧州所产
苦玄参苦玄参昔 I* 含量最高 , 而平乐所产 含量最低 。
由于 5 个不 同产地苦玄参 的采收季节不同 , 无法对
不同产地的苦玄参昔 I , 含量高低下定论 。 比较同一
产地 、 不同采收季节的苦玄参中苦玄参昔 I A含量 ,采
收季节不同 , 苦玄参昔 I人 含量各不相 同 , 苦玄参采收
季节不同是影响其含量的一个 因素 。
参考文献
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(责任编辑 : 周立东 , 责任编审 : 果德安 , 责任译审: 秦光道 )
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(责任编辑 : 刘维杰 , 责任编审 : 果德安 ,责任译审 :秦光道 )
〔评。而 sc ic cn 。 朋J eT hc on .lo爵八` 旋 rn 众at 勿 n of rT dn i t勿耐 hc i en s。 eM idc ien an 泛才2协对己ha eM idc 司 了I