全 文 ：2010 年 6月第 7卷第 16期 ·实验研究·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
苦玄参为玄参科植物苦玄参（Picria fel-tarrae Lour）的干
燥全草，别名苦草、蛇总管。 苦玄参味苦、性寒，具有清热解
毒、消肿止痛的功能，用于感冒风热、咽喉肿痛、痄腮、胃热腹
痛、痢疾、跌打损伤、疖痈、毒蛇咬伤等 [1]。 苦玄参在广西壮族
自治区已得到较好的开发应用，多个以苦玄参为主要成分的
中成药已上市销售[2]。 目前对苦玄参只有解热和抗菌的药理
研究[3-4]，尚无其抗乙肝的相关试验研究报道。 笔者对苦玄参
不同提取部位含药血清的体外抗乙肝作用进行了初步研究，
现报道如下：
1 材料与方法
1.1 药材
苦玄参经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授鉴
定为玄参科植物苦玄参（Picria fel-tarrae Lour.）的干燥全草。
1.2 动物
昆明种小白鼠，体重 22～26 g，雌雄兼用，由广西中医学
院实验动物中心提供，合格证号：桂医动字第 11004 号。
1.3 细胞
HBV-DNA 克隆转染人肝癌细胞的 2215 细胞， 购自中
国医学科学院中国医药生物技术研究所。
1.4 仪器与试药
仪器：二氧化碳培养箱（美国 Forma 公司）；倒置显微镜
（德国 Leica 公司）；酶标仪（奥地利 Sunrise 公司）。
试药：新生牛血清（NBS，杭州四季青公司，批号：070720）；
卡那霉素（Sigma 分装）；二甲基亚砜（DMSO，上海生物工程有
限公司，批号：54186）；HBsAg、HBeAg 检测试剂盒（上海荣盛
生物科技有限公司，批号：20070606、20070712）。
1.5 方法
1.5.1 苦玄参不同提取部位的制备 取苦玄参 95％乙醇提取
干浸膏 30.1 g（每克干浸膏相当于 8.7 g 生药），溶于 300 ml
水中，依次用适量乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别合并各萃取
层，减压回收溶剂，备用。另取 30.1 g 苦玄参干浸膏和上述各
苦玄参不同提取部位抑制 2215细胞分泌
HBeAg和 HBsAg的实验研究
曾金强 1*，潘小姣 2，杨 柯 2，韦志英 2，陈 晨 2
（1.广西边防总队医院，广西南宁 530022；2.广西中医学院，广西南宁 530001）
[摘要] 目的：观察苦玄参不同提取部位的含药血清对 2215 细胞分泌 HBeAg 和 HBsAg 的抑制作用。 方法：将含药血
清作用于 2215 细胞，然后用酶联免疫法测定 HBsAg 和 HBeAg 的水平。结果：苦玄参各提取部位对 HBeAg 有明显的
抑制作用，但没有明显的量效关系。其中乙醇总提取部位、水提取部位和正丁醇提取部位对 HBeAg 的抑制效果比乙
酸乙酯提取部位好，抑制率最高可达 80％以上（P＜0.05）；苦玄参各提取部位对 HBsAg 也有一定的抑制作用，不同提
取部位的抑制作用相差不大。 结论：苦玄参不同提取部位的含药血清能抑制 2215 细胞分泌 HBeAg 和 HBsAg，其中
极性较大的化合物对 HBeAg 的抑制作用较强。
[关键词] 苦玄参；2215 细胞；酶联免疫法；血清药理学
[中图分类号] R329.2+8 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2010）06（a）-027－03
Experimental study on the inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted
by 2215 cells of different extracts of Picria fel-tarrae Lour
ZENG Jinqiang1*, PAN Xiaojiao2 ,YANG Ke2, WEI Zhiying2, CHEN Chen2
(1.Guangxi Frontier Hospital, Nanning 530022, China; 2.Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning
530001, China)
[Abstract] Objective: To observe the inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cells of different extracts
in serums of Picria fel-tarrae Lour. Methods: The different extracts in serums of Picria fel-tarrae Lour were used to act on
2215 cells and the enzyme linked immune response was used to investigate the level of HBeAg and HBsAg. Results: All
extracts showed the obvious inhibitory activity on HBeAg, but there wasnt any obvious dose-effect relationship. The EtOH,
BuOH and H2O extracts showed the better inhibitory activity on HBeAg than the EtOAc extracts did. The best inhibitory
rates of them on HBeAg were more than 80% (P＜0.05). All extracts showed some inhibitory activity on HBsAg and this
kind of activity was similar among them. Conclusion: The different extracts of Picria fel-tarrae Lour in serums have the
inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cells and the compounds possessing of bigger polarity show the
stronger inhibitory activity.
[Key words] Picria fel-tarrae Lour; 2215 cells; Enzyme linked immune response; Seropharmacology
*通讯作者
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2010 年 6月第 7卷第 16期·实验研究·
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乙醇总提取物血清组
乙酸乙酯提取部位血清组
正丁醇提取部位血清组
水提取部位血清组
空白血清组
无血清细胞对照组
培养液空白对照组
组别
最终的
血清浓度（％）
5
10
20
5
10
20
5
10
20
5
10
20
5
10
20
0
0
0.114±0.010②
0.113±0.090②
0.160±0.020②
0.164±0.060②
0.141±0.034①
0.166±0.013②
0.107±0.020②
0.108±0.015②
0.119±0.055②
0.172±0.019②
0.105±0.029②
0.096±0.032①
0.284±0.036
0.286±0.044
0.306±0.053
0.293±0.037
0.072±0.016
81.00
81.30
60.03
58.37
68.93
57.47
84.16
83.86
78.58
54.60
85.22
88.99
4.07
3.32
0.00
0.408±0.041②
0.475±0.056②
0.509±0.044②
0.326±0.020②
0.306±0.065①
0.429±0.018①
0.364±0.081①
0.428±0.051①
0.506±0.161
0.366±0.045②
0.452±0.025②
0.541±0.071②
0.764±0.036
0.754±0.012
0.759±0.035
0.771±0.062
0.125±0.011
56.14
45.82
40.61
68.89
71.98
52.89
62.95
53.10
40.97
62.75
49.33
35.60
1.08
2.63
1.81
HBeAg
OD 值 抑制率（％）
HBsAg
OD 值 抑制率（％）
提取部位，分别溶于适量水中，最后定容成 100 ml，4℃保存
备用。
1.5.2 含药血清的制备 [5] 取小鼠 40 只，体重 22～26 g，雌雄兼
用，分为 5组：空白血清组（灌胃给予生理盐水），乙醇总提取
物血清组，乙酸乙酯提取部位血清组，正丁醇提取部位血清
组，水提取部位血清组。 含药血清组按每次 20 ml/kg（相当于
52.4 g 生药/kg）剂量灌胃给药，每天给药 2 次（每天的总给药
量约为苦玄参半数致死量的 1/2），连续 3 d，末次给药后 1 h，
摘眼球取血，离心分离血清，56℃灭活 30 min。 用 MEM 培养
液稀释成 40%、20％和 10％的血清浓度，过滤，4℃保存备用。
1.5.3 细胞培养 2215 细胞用 MEM 培养液培养（培养液含
10%胎牛血清，0.03%谷氨酰胺，G 418 380 μg/ml，卡那霉素
50 U/ml，pH 7.2），用 0.25%胰酶消化 3～4 min 后计数，配制成
1×105个/ml 的细胞悬液，接种于 96 孔培养板，每孔 100 μl；
然后将其置于 5％的 CO2培养箱中，37℃培养 24 h，待细胞长
成单层后进行实验。 将含各浓度血清的 MEM 培养液加入
96孔板中，每孔 100 μl，平行设 3 孔，使含药血清最终浓度分
别为 20％、10％和 5％。同时设空白血清组、无血清细胞对照组
和培养液空白对照组。收集第 4天细胞培养上清液，在 450 nm
波长处用酶标仪测 OD 值。
1.5.4 抑制率 按以下公式计算抑制率，抑制百分率（%）＝[（无
血清细胞对照组 OD 值－苦玄参提取物血清组 OD 值） ／ （无
血清细胞对照组 OD 值－培养液空白对照组 OD 值）]×100％。
1.6 统计学方法
数据以均数±标准差（x±s）表示，采用 SPSS 14.0 软件对
实验所得的 OD 值进行组间 t 检验，P＜0.05 表示差异有统计
学意义。
2 结果
见表 1。
结果表明， 苦玄参各提取部位对 HBeAg 有明显的抑制
作用，但没有明显的量效关系。其中乙醇总提取部位、水提取
部位和正丁醇提取部位对 HBeAg 的抑制效果比乙酸乙酯提
表 1 苦玄参不同提取部位对 2215 细胞分泌 HBeAg 和 HBsAg 的抑制作用（x±s）
Tab.1 The inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cells of different extracts of Picria fel-tarrae Lour (x±s)
取部位好，抑制率最高，可达 80％以上（P＜0.05），提示苦玄参
中极性较大的化合物对 HBeAg 的抑制作用较强； 苦玄参各
提取部位对 HBsAg 也有一定的抑制作用， 不同提取部位的
抑制作用相差不大，提示苦玄参中各种极性化合物对 HBsAg
都有一定的抑制作用。
3 讨论
乙型肝炎病毒（HBV）是引起急、慢性病毒性肝炎的主要
病原体之一，故寻找有效的抗 HBV 药物是当务之急。目前临
床已有不少用中药治疗乙型肝炎的观察 [6-7]，但尚缺乏研究依
据， 而 HBV-DNA 克隆转染人肝癌细胞的 2215 细胞系的建
立，为抗 HBV 药物的筛选提供了有效手段 [8]。 笔者利用血清
药理学方法， 研究苦玄参不同提取部位在体外对 2215 细胞
分泌 HBeAg 和 HBsAg 的抑制作用，结果表明，苦玄参不同提
取部位含药血清都有较好的体外抗乙肝作用，提示苦玄参不
同提取部位可能在体内对乙肝病毒具有抑制作用。至于苦玄
参通过何种途径实现其抑制 2215 细胞分泌 HBeAg 和
HBsAg，还有待于进一步研究；而其具有抑制作用的化学单
体有哪些也有待于进一步筛选。
与空白血清组比较，①P＜0.01，②P＜0.05
Compared with blank serum group， ①P＜0.01, ②P＜0.05
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[参考文献]
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草药的初步研究[J].中华传染病杂志,1993,4(10):22.
（收稿日期：2010-02-04）
赛来昔布（Celecoxib）是一种新型抗感染药，用于治疗类
风湿性关节炎和骨关节炎等炎症性疾病。由美国 Searle 公司
开发研制，于 1999 年在美国上市，该药被美国 FDA 以特快
程序批准，被誉为“超级阿司匹林”。 它是第一个上市的Ⅱ型
环氧合酶（Cxo-2）抑制剂 ，目前已在近四十个国家上市。 最
新研究表明，Celecoxib 可延缓老年痴呆的发展进程，对结肠
癌也有潜在的治疗作用，可用于结肠癌化疗的辅助治疗 [1]，它
抑制小鼠直肠癌的发生率和增殖率分别为 93% 和 97%，减
少直肠负荷 87%以上 [2]。 Celecoxib 可以抑制肿瘤生长，减少
移植瘤组织 VEGF 的表达，减少微血管生成，具有抗血管生
成作用[3]。
国内外报道的赛来昔布的合成路线很多 [4-6]，主要是以对
甲基苯乙酮与三氟乙酸乙酯在甲醇钠的作用下进行 Claisen
缩合， 得到中间体 1-（4-甲基苯基）-4，4，4-三氟-1，3-丁二
酮，二酮中间体再与对磺胺基苯肼盐酸盐在溶剂乙醇中脱水
环合制得。 文献[7-8]报道的合成路线已可进行工业化放大，
但该路线存在稳定性较差、溶剂污染大、产品重结晶困难、可
操作性不高等问题。因此本文在参考相关文献的基础上对赛
来昔布合成工艺进行改进。
1 仪器与试药
核磁共振仪为 Bruker-Dpx 300 核磁共振仪（TMS 内标，
CDCl3为溶剂）；Carlo Erba 1106 型元素分析仪； 所用试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2.1 25%甲醇钠甲醇溶液制备
将 13.3 g甲醇钠在氮气下，加入圆底烧瓶中，然后加入无
水甲醇 40 g，体系放热，搅拌，甲醇钠溶解，为无色透明液体。
2.2 赛来昔布的合成
见图 1。
将异丙醇（54.8 g， 0.912 mol），三氟乙酸乙酯（38 g，0.267 mol）
和 25%甲醇钠甲醇溶液（53.3 g，0.246 mol）加入到 250 ml 反
应瓶中。开始搅拌，然后加入对甲苯乙酮（27 g，0.206 mol），反
应体系加热到 50℃，保持 2 h。
新型抗感染药赛来昔布的合成新工艺
姚德勇，王巧玲
（青岛康地恩药业有限公司，山东青岛 266061）
[摘要] 目的：研究一步法制备赛来昔布的合成方法。方法：以异丙醇为溶剂，对甲基苯乙酮与三氟乙酸乙酯为原料缩
合得到 1-(4-甲基苯基)-4,4,4-三氟-1,3-丁二酮，直接与对磺胺基苯肼盐酸盐在溶剂脱水环合。结果：本法总收率达
83%。 结论：赛来昔布新合成方法切实可行。
[关键词] 赛来昔布；环氧化酶；合成
[中图分类号] R914.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2010）06（a）-029－02
New synthesis technology about celecoxib of a new anti-inflammatory
YAO Deyong, WANG Qiaoling
(Qingdao Continent Pharmaceutical Co., Ltd., Qingdao 266061, China)
[Abstract] objective: To improve the one stage synthetic method of celecoxib. Methods: In isopropyl alcohol, the conden-
sation of 4-methylacetophenone with ethyl trifluoroacetate by means of sodium methoxide gives 1-(4-methylphenyl)-4, 4,
4-trifluorobutane which was cyclodehydrated with (4-sulfamoylphenyl) hydrazine hydrochloride to give celecoxib. Results:
The total yield reached up to around 83%. Conclusion: The new synthesis process of celecoxib is practicable.
[Key words] Celecoxib; Cyclooxygenase; Synthesis
[作者简介] 姚德勇（1978-），男，硕士，主要从事兽药的合成与应用研究。
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