全 文 ：(总 )广西中医药2008年8月第31卷第4期
苦玄参又名苦草、蛇总管,系玄参
科苦玄参(Picriafel-taraeLour)的干
燥全草,产于我国广东、广西、云南和
贵州南部,在广西作药用历史已久。其
性寒味苦,可用于治疗高热、蛇伤及痈
疖等,具有清热解毒,凉血消肿之功
效[1]。国内外对苦玄参的研究表明,其
有效成分主要为四环三萜皂苷类,目
前已知的主要苷类化合物有苦玄参苷
IA,IB,Ⅱ等[2-3]。目前随着对苦玄参研究
的深入,对其抗肿瘤活性成分苦玄参
苷IA的需求也逐渐增多,但是苦玄参
苷IA很难提取分离,使得其高纯度单
体化合物的市场售价非常昂贵。本文
摸索出一个较为简单的提取分离苦玄
参苷IA的方法,现报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相色
谱仪(美国安捷伦公司),日本岛津
LC-8A高效液相色谱仪(日本岛津公
司),C18分析柱(4.6×250mm,依利特),
C18制备柱(10×250mm,依利特),红外
光谱仪 (美国尼高力 NEXUS470),
BP211D电子天平(德国赛多利斯)。
1.2 试药 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正
丁醇、氯仿、硅胶、羧甲基纤维素钠等
均为分析纯;乙腈(色谱纯);超纯水;
苦玄参苷IA对照品(购自广西植物研
究所,纯度≥95%);苦玄参药材(采自
广西梧州,经广西中医学院药学院刘
寿养副教授鉴定为玄参科苦玄参 Pi-
criafel-taraeLour)。
2 方法与结果
2.1 提取 苦玄参药材 10kg,用水煮
沸提取 2次,用水量依次为约15倍和
10倍,提取时间依次为2h和 1h,合并
2次提取液,用乙醇调节含醇量约为
70%,静置 24h,过滤,滤液回收乙醇后
得到1.75L流浸膏。
2.2 分离
2.2.1 萃取 取苦玄参流浸膏 45ml,
加水约 250ml混匀,用正丁醇萃取 3
次,每次300ml,合并正丁醇层,减压回
收溶剂,45℃干燥至恒重,重量为
7.1945g,正丁醇萃取物相对于原药材
的提取率为2.80%。
2.2.2 硅胶柱色谱 精密称取正丁醇
萃取物 5.4380g进行硅胶柱色谱分离
纯化,用乙酸乙酯-甲醇-水(10∶1∶1)洗
脱,收集馏分,大约每 50ml装 1瓶,同
时取每瓶馏分适量点于硅胶 G薄层
板上,用苦玄参苷IA对照品作对照,以
洗脱剂为展开剂,以3%磷钼酸乙醇溶
液为显色剂,对馏分进行TLC检测。根
据TLC检测结果,合并与苦玄参苷 IA
对照品在相同位置有相同颜色斑点的
第 8～22瓶馏分,减压回收溶剂,45℃
干燥至恒重,馏分重量为 3.3865g,相
对于原药材的提取率为1.74%。
2.2.3 制备 HPLC条件的摸索 分析
HPLC色谱条件:Agilent1100高效液相
色谱仪,C18分析柱,流动相为 40%乙
腈,流速1.0ml/min,检测波长为264nm,
柱温为常温。将2.2.2制备得到的少量
馏分溶于适量甲醇中作供试品,用苦
玄参苷 IA对照品作对照,进行 HPLC
分离条件摸索,得到结果如图 1、图 2。
从上述 HPLC图谱可知,该色谱条件
可以很好地把苦玄参苷IA与其他组分
分离,且保留时间适宜,约为 9.6min,
故确定将该色谱条件中的流动相、检
测波长和柱温应用到制备HPLC中。
2.2.4 制备HPLC 制备HPLC的色谱
条件:日本岛津LC-8A高效液相色谱仪,
C18制备柱,流动相为40%乙腈,流速
4.0ml/min,检测波长为264nm,柱温为常
温。将2.2.2制备得到的馏分3.3641g用
40%的乙腈定容至 100ml,每次进样
200μl,共进样45次,收集馏分A,减压回
收溶剂,45℃干燥至恒重,重量为0.0382g,
相对于原药材的提取率为0.22%。
2.3 纯度检查与结构确证
2.3.1 纯度检查 采用 2.2.3中的色
谱条件对馏分A进行检测,结果表明,
馏分A为单体化合物,通过峰面积归
一化法计算,其纯度为97.66%。通过与
对照品苦玄参苷IA的保留时间进行对
比,确认馏分A为苦玄参苷IA。
2.3.2 TLC定性分析 将分离得到的
馏分A少量用适量甲醇溶解,作供试
品溶液;取苦玄参苷IA适量,用适量甲
醇溶解,作为对照品溶液。取供试品与
对照品溶液适量点于同一薄层板上,
分别以正丁醇-甲醇-水(10∶1∶1),乙酸
乙酯-甲醇-水(10∶1∶1),氯仿-甲醇-水
(10∶3∶1),氯仿-甲醇-水(6∶4∶1)为展开剂
展开,以3%邻钼酸乙醇溶液为显色剂,
于 105℃加热至斑点显色清晰。结果表
明,馏分A为单一斑点,是单体化合物。
通过与苦玄参苷IA对照品的Rf值进行
对比,确认馏分A为苦玄参苷IA。
2.3.3 红外光谱结构确证 取适量苦
玄参苷IA对照品和馏分A分别用KBr
压片,然后进行红外光谱检测,结果发
现两者的红外光谱图一致,主要吸收峰
有3420cm-1(OH),1685cm-1(C=O),1585
cm-1(C=C-C=O),1160～950cm-1(C-O)。
由此可知,馏分A为苦玄参苷IA。
3 讨 论
3.1 皂苷在热水中溶解度较好,而且大
部分皂苷易溶于70%乙醇,通过水提醇
从苦玄参中制备苦玄参苷IA的实验研究
潘小姣 广西中医学院 530001 南宁市明秀东路179号
曾金强 广西边防总队医院 530022
韦志英 陈 晨 广西中医学院 530001
摘 要 目的:建立从苦玄参中制备苦玄参苷IA的方法。方法:采用各种提取分离技术(萃取、CLC和HPLC
等),同时使用对照品进行对照,对苦玄参苷IA进行提取分离、纯度检测和结构确证。结果:提取分离得到纯度为
97.66%的苦玄参苷IA。结论:方法简便可靠,提取效率高,适用于苦玄参苷IA的制备。
关键词 苦玄参;苦玄参苷IA;制备
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2008)03-0049-02
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沉,可以除掉大部分不溶于70%乙醇的
化学成分,如粘液质、油脂等;然后通过
一次硅胶柱色谱和一次制备 HPLC的
分离纯化,就能得到纯度大于97%的单
体化合物,制备过程较为简单。
3.2制备 HPLC的色谱条件除了色谱
柱和流动相的流速之外,其他都与分析
HPLC的色谱条件相同,这样制备HPLC
与分析 HPLC两者的色谱图除了色谱
峰保留时间整体延长一些之外,色谱峰
峰形是一致的,很容易从制备HPLC图
中判断出哪一个是需要收集的苦玄参
苷IA色谱峰。先用分析HPLC摸索出制
备HPLC的色谱条件,可以节约大量的
对照品、供试品和色谱试剂。
3.3根据文献报道[4],广西梧州产苦
玄参干药材中苦玄参苷 IA的含量为
0.35%,而用本法制备得到的苦玄参苷
IA相对于原药材的提取率为 0.22%,证
明本法提取效率比较高(63%) ,能把药
材中大部分的苦玄参苷IA提取出来。
参考文献
[1]广西壮族自治区卫生厅编.广西中药
材标准[S].南宁:广西科学技术出版
社,1992:225.
[2]成桂仁,金静兰.苦玄参化学成分的
研究Ⅶ-苦玄参苷 IA和 IB的结构[J].
化学学报,1985,43:374.
[3]金静兰,成桂仁.苦玄参化学成分的
研究Ⅷ-苦玄参苷Ⅱ的结构[J].化学
学报,1987,45:1133.
[4]陈勇,甄汉深,刘婧,等.HPLC法测定
苦玄参中苦玄参苷 IA的含量[J].世
界科学技术-中医药现代化,2006,8
(2) :28.
(2008-03-27收稿/编辑 陈明伟)
白花丹 (Plumbago Zeylanica
L.)是蓝雪科蓝雪属植物,又名白
雪花,一见消等。主要分布在东南
亚地区及我国华南地区、西南地
白花丹素和白花丹素-铜配合
物体外抗肿瘤活性研究
王希斌 黄慧学 刘华钢 刘丽敏 杨 斌
广西医科大学药学院 530021南宁市双拥路2号
摘 要 目的:观察白花丹素及白花丹素-铜配合物对肿瘤细胞株的
生长抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度
的白花丹素及白花丹素-铜配合物对体外培养的多种肿瘤细胞株的生长
抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。结果:白花丹素-铜配合物对大多数
肿瘤细胞株的抑制率大于白花丹素,但抗肿瘤谱小于白花丹素,推测白花
丹素-铜配合物的抗癌活性强于白花丹素,但抗肿瘤谱缩小,可能与白花
丹素-铜配合物的配位关系、构效关系有关。结论:白花丹素及白花丹素-
铜配合物具有体外抗肿瘤活性。
关键词 白花丹素;白花丹素-铜配合物;肿瘤细胞株;MTT法;抗肿
瘤活性
中图分类号:R962 文献标识码:A
文章编号:1003-0719(2008)04-0050-03
Study on Anti-tumor Activity of Plumbagin
and Plumbagin-Cu Complex in Vitro
WangXibin,HuangHuixue,L u Huagang,et al
Pharmaceutical faculty,Gu ngxi Medical University,
Nanning,Guangxi,530021
Abstract Objective:To observ the inhibitory effect of plumbagin and
plumbagin-Cu complex on ten types of tumor cell lines in vitro and preliminarily
study its mechanism. Methods:MTT assay was used to test the inhibitory effect of
plumbagin and plumbagin-Cu complex on different types of tumor cell lines in
vitro with different concentration and IC50was calcul ed. Results:Plumbagin-Cu
complexhas higher inhibition rate than plumbagin in most of the tumor cell lines,
but the anti-tumor spectrum was narrower than plumbagin,it ca conj cture that
plumbagin-Cu complexshows stronger anti-tumor activitythan plumbagin. Reduce
of anti-tumor spectrum may be related to the coordination and the structure-
activity relationship of plumbagin-Cu complex. Conclusions:Both plumbagin and
plumbagin-Cu complexhave anti-tumor activityin vitro.
Key Words Plumbagin;Plumbagin-Cu complex;T m r cells;MTTassay;
Anti-tumor activity
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图1 苦玄参苷IA对照品的HPLC图
图2 供试品HPLC图
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