全 文 ：张璐璐 ,李军乔 ,卢永昌.HPLC法测定密花香薷中芸香苷的含量 [ J] .江苏农业科学 , 2011, 39(2):437-438.
HPLC法测定密花香薷中芸香苷的含量
张璐璐 , 李军乔 , 卢永昌
(青海民族大学化生院 ,青海西宁 810007)
　　摘要:采用 ZorbaxSB-C18色谱柱(250 mm×4.6mm, 5 μm), 流动相为甲醇 ∶水(含 0.04%磷酸)=40∶60,流速
1 mL/min,检测波长 254 nm, 柱温 25 ℃建立反相高效液相色谱法测定密花香薷中芸香苷的含量。结果表明 , 芸香苷
与其他物质达到基线分离 , 芸香苷在 0.02 ～ 0.14 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8), 平均回收率为 101.01%
(RSD=1.99%)。
　　关键词:反相高效液相色谱法;密花香薷;芸香苷
　　中图分类号:O652.63　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2011)02-0437-02
(上接第 436页)
[ 6]田迪英 ,杨荣华.果蔬抗氧化活性与总酚含量相关性研究 [ J] .
化学世界 , 2004(2):70-73, 112.
[ 7]田迪英 ,杨荣华.香椿的抗菌作用研究 [ J] .食品工业科技 ,
2002, 23(11):21-22.
[ 8]李秀信 ,张院民 , 杨秀萍.香椿嫩枝叶总黄酮最佳提取工艺的研
究 [ J] .陕西林业科技 , 2001(4):4-5, 61.
[ 9]李秀信 ,张院民 , 刘青利, 等.香椿叶提取物抗氧化作用的研究
[ J] .内蒙古农业大学学报:自然科学版 , 2002, 23(3):114-117.
[ 10]郭长江 ,韦京豫 ,杨继军 ,等.66种蔬菜、水果抗氧化活性的比较
研究 [ J] .营养学报 , 2003, 25(2):203-207.
[ 11]刘芳竹 ,查　慧.茶多酚的抗氧化作用 [ J] .食品研究与开发 ,
2002, 23(5):77-78.
[ 12] BoverisAD, PuntaruloS.Free-radicalscavengingactionsofnatu-
ralantioxidants[ J] .NutritionResearch, 1998, 18(9):1545 -
1557.
[ 13]王奎兰 ,黎碧娜 ,叶凯贞 , 等.银杏叶中有效成分的提取及其应
用 [ J] .日用化学工业 , 2004, 34(3):170-172, 186.
[ 14] JiaZS, TangMC, WuJM.Thedeterminationofflavonoidcontents
inmulberyandtheirscavengingefectsonsuperoxideradicals[ J] .
FoodChemistry, 1999, 64(4):555-559.
[ 15] JayaprakashaGK, SinghRP, SakariahKK.Antioxidantactivityof
grapeseed(Vitisvinefera)extractsonperoxidationmodelsinvitro
[ J] .FoodChemistry, 2001, 73:285-290.
[ 16] LeeSC, JeongSM, KimSY, etal.Effectoffar-infraredradiation
andheattreatmentontheantioxidantactivityofwaterextractsfrom
peanuthuls[J].FoodChemistry, 2006, 94(4):489-493.
[ 17] BenzieIF, StrainJJ.Thefericreducingabilityofplasma(FRAP)
asameasureof“antioxidantpower”:theFRAPassay[ J] .Analyti-
calBiochemistry, 1996, 239(1):70-76.
[ 18] YamaguchiT, TakamuraH, MatobaT, etal.HPLCmethodforeval-
uationofthefreeradical-scavengingactivityoffoodsbyusing
1, 1, -diphenyl-2-picrylhydrazyl[ J] .BioscienceBiotechnology
Biochemistry, 1998, 62(6):1201-1204.
　　密花香薷 (ElsholtziadensaBenth.)为唇形科 (Labiatae)
香薷属(Elsholtzia)一年生草本植物 ,别称咳嗽草 、野紫苏 、臭
香茹 、蟋蟀巴 ,主要分布在河北 、山西 、陕西、甘肃 、青海 、四川 、
云南 、西藏 、新疆等地 ,生于林缘、高山 、草甸 、林下 、河边及山
坡荒地 ,海拔 2 800 ～ 4 100 m的范围内 [ 1 ] 。它可作为正品香
薷的代用品 [ 2] ,全草入药 ,能治疗夏季感冒 、发热无汗 、中暑 、
急性胃炎、胸闷 、口臭、小便不利等 [ 3 ] ,藏医用全草治疗培根
病 、胃病 、梅毒性鼻炎 、喉炎及寄生虫病 ,外用治脓疮及皮肤
病 [ 4] 。芸香苷具有抗自由基活性 、抗脂质过氧化 、抗血小板
活化因子、抗流感病毒等作用 [ 5] ,目前有关于密花香薷中芸
香苷的含量测定未见报道 。本研究建立了高效液相色谱测定
密花香薷中芸香苷含量的方法 ,旨在为密花香薷的开发利用
提供科学依据 。
收稿日期:2010-06-09
基金项目:青海省重点攻关项目(编号:2009-Z-705)。
作者简介:张璐璐(1985—),女 , 河南洛阳人 ,硕士研究生 ,主要从事
药物分析方面的研究。 E-mail:zhangluluzhang@yeah.net。
通信作者:李军乔,教授。 E-mail:ljqlily2002@ 126.com。
1　材料与方法
1.1　材料
密花香薷全草 ,分别采自青海海东和海北地区(经青海
大学韦梅琴副教授鉴定),晾干后将全草用粉碎机粉碎后 ,过
60目筛备用 。
1.2　仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪(配置:手动进样器 、在线脱
气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温箱 、DAD检测器 、Agilent1100
色谱工作站)、ZorbaxSB-C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm,
5 μm), KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、
FZ102微型植物试样粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)、
ME2353型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)、RE52-
98旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
芸香苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:10080
-200306);甲醇:色谱纯 (山东禹王实业有限公司禹城化工
厂);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈百立食品有限公司);磷酸:
AR级(北京红星化工厂)。
1.3　溶液的配制
1.3.1　对照品溶液的配制　精确称取芸香苷对照品 5 mg,
—437—江苏农业科学　2011年第 39卷第 2期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2011.02.061
置于 50mL的容量瓶中 ,以甲醇溶解并定容 ,配制成对照品储
备液备用。
1.3.2　供试品溶液的配制 　精确称取密花香薷粉末 1 g,加
入甲醇 20 mL,超声提取 60 min后抽滤 ,滤渣重复上述操作
1次 ,合并 2次滤液 ,定容至 100 mL,摇匀 ,作为供试品溶液 ,
用 0.45μm的微孔滤膜滤过 ,待上机分析。
1.4　色谱条件
ZorbaxSB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相
为甲醇 ∶水(含 0.04%磷酸)=40 ∶60梯度洗脱;检测波长:
254 nm;流速:1 mL/min;柱温 25 ℃;进样量 10 μL。
1.5　线性关系的考察
分别吸取上述芸香苷对照品储备液 1、2、3、4、5、6、7 mL,
置于 50 mL的容量瓶中 ,以甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,分别进样
10μL,记录色谱图 ,以峰面积 (y)对进样量 (x)进行线性回
归 ,得芸香苷的标准曲线及回归方程 。
2　结果与分析
2.1　标准曲线及回归方程
按 “1.5”操作 ,得回归方程为:y=158.47x-9.415 , r=
0.999 8。结果表明芸香苷进样量在 0.02 ～ 0.14 μg范围内线
性关系良好 。
2.2　色谱图
在 “1.4”色谱条件下 ,芸香苷的保留时间为 15 min,对照
品及样品色谱图见图 1。
2.3　精密度试验
取对照品溶液 ,重复进样 6次 ,每次进样 10 μL,记录峰
面积 。芸香苷对照品的峰面积的 RSD=0.89%,表明精密度
良好 。
2.4　稳定性试验
取同一批供试品溶液 ,室温下放置 ,分别于 0、2、4、6、8、
10、12 h后进样 10 μL,记录峰面积 , RSD=1.23%,结果表明
供试品溶液在 12h内稳定 。
2.5　重复性试验
取密花香薷粉末 ,按 “1.3.2”操作 ,平行制备 6份 ,上机测
定 ,计算出芸香苷的含量 , RSD=1.98%,表明重复性良好 。
2.6　回收率试验
精确称取已知含量的密花香薷粉末 5份 ,分别加入适量
的芸香苷对照品溶液 ,按 “ 1.3.2”操作 ,按 “ 1.4”的色谱条件
进行测定 ,计算出芸香苷的平均回收率为 101.01%, RSD=
1.99%。结果见表 1。
表 1　回收率试验数据(n=5)
试验号 称样量(g)
样品含量
(mg)
加标量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.501 4 9.777 3 5.48 15.284 9 100.50
2 0.502 6 9.800 7 5.21 15.201 7 103.67
3 0.500 8 9.765 6 5.37 15.104 2 99.42
4 0.504 3 9.833 8 5.14 15.101 6 102.49
5 0.503 1 9.810 4 5.25 15.007 5 98.99
平均 101.01 1.99
2.7　含量测定
精确吸取样品溶液 10 μL注入色谱仪 ,在选定的色谱条
件下分别测定其峰面积值 ,按外标法以峰面积值计算含量 ,得
海东地区密花香薷中芸香苷的含量为 1.95%,海北地区密花
香薷中芸香苷的含量为 1.08%。
3　结论与讨论
比较样品与芸香苷对照品在 274、360、238、254 nm波长
处的吸收 ,发现在 254 nm样品出峰数适中 ,因此选用 254 nm
作为检测波长 。且发现在流动相的水中加入 0.04%的磷酸
可以改善峰形 ,增加分离度 ,因此选用甲醇和 0.04%的磷酸
水溶液作为流动相 。
用甲醇和乙醇回流和超声提取 ,发现用甲醇超声提取 ,提
取率高且操作简便 ,因此选用甲醇超声提取的提取方法 。
本研究所建立的测定方法稳定 、可靠 、重复性好 ,可以作
为密花香薷中芸香苷的含量测定方法 。本研究表明 ,密花香
薷中芸香苷的含量相对较高 ,为今后进一步对密花香薷进行
开发利用提供了科学依据 。
参考文献:
[ 1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第 66卷 [ M] .
北京:科学出版社 , 1977:332.
[ 2]中国科学院西北高原生物研究所.藏药志 [ M].西宁:青海人民
出版社 , 1991.
[ 3]张　继 ,王振恒 ,姚　健 , 等.密花香薷挥发油成分的分析研究
[ J] .草叶学报 , 2005, 14(1):112-116.
[ 4]青海省藏医药研究所, 青海省药品检验所.中国藏药 [ M] .上
海:上海科学技术出版社 , 1996.
[ 5]林　静.芦丁的临床药理特点 [ J] .中国临床药理学杂志 , 2009,
5:256, 263.
—438— 江苏农业科学　2011年第 39卷第 2期