全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2010，25(3)∶344 ～ 346
基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目［黔科合中药专字［2006］5007号］;贵州省科技计划项目(黔科合带帽字［2008］5005号)
作者简介:周婵媛，女，正攻读农药学专业的硕士学位。
* 通信作者(Correspondenter author)，Email:alice9800@ sina. com
紫外分光光度法测定吉祥草中的总皂苷
周婵媛1，2，陈华国1，3，周 欣1，3* ，刘 海1，2
(1.贵州师范大学 天然药物质量控制研究中心，贵州 贵阳 550001;2.贵州大学 精细化工研究开发中心，贵州 贵阳 550005;
3.贵州师范大学 贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室，贵州 贵阳 550001 )
摘要:目的 建立测定吉祥草中总皂苷含量的方法，并测定不同来源的吉祥草药材中总皂苷的含量。方法 采用 UV法，在
453 nm处测定吉祥草中总皂苷的含量。结果 凯提皂苷元 26 ～ 136 μg与吸光度的线性关系良好(r = 0. 9996)，方法的平均回
收率为 97. 3%(n = 9)，RSD = 1. 8% ;不同来源的吉祥草药材中总皂苷含量有较大差异。结论 所用测定方法简便、准确、灵
敏、可靠，可控制吉祥草的药材质量。
关键词:吉祥草;总皂苷;凯提皂苷元;紫外分光光度法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2010)03 － 0344 － 03
Determination of total saponins in Reineckea carnea by UV
ZHOU Chan － yuan1，2，CHEN Hua － guo1，3，ZHOU Xin1，3* ，LIU Hai1，2
(1. The Research Center for Quality Control of Natural Medicine，Guizhou Normal University，Guiyang，Guizhou，550001 P. R. China;
2. Research and Development Center of Fine Chemicals of Guizhou University，Guiyang，Guizhou，550025 P. R. China;3. Key Laboratory
for Information System of Mountainous Areas and Protection of Ecological Guizhou Normal University，Guiyang，Guizhou，550001 P. R.
China)
Abstract:OBJECTIVE To establish a quantitative method of total saponins in Reineckea carnea(Andr.)Kunth and to determine
the content of the general saponins of Reineckea carnea(Andr.)Kunth from different places. METHODS The general saponins was
determined by UV spectrophotometry at 453 nm . RESULTS The calibration curve was linear over the range of 26 － 136 μg with the
correlation of 0. 9996. The average recovery of kitigenin was 97. 4% with RSD of 1. 8%(n = 6). The contents of the total saponins in
Reineckea carnea(Andr.)Kunth from various habitats were quite different. CONCLUSION The method is simple，accurate，sensitive
and reliable. It can be applied to the quality control of Reineckea carnea(Andr.)Kunth.
Key words:Reineckea carnea(Andr.)Kunth;Total saponins;Kitigenin;UV
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2010)03 － 0344 － 03
吉祥草 Reineckia carnea(Andr.)kunth为百合科
植物的全草，全年可采，用于肺结核、咳嗽咯血、慢性
支气管炎、哮喘、风湿性关节炎的治疗;外用可治跌
打损伤、骨折等［1］。作为贵州的常用苗药，吉祥草
的各种制剂已应用于临床。其主要化学成分有甾体
皂苷类和皂苷元等［2 － 3］。其中，皂苷类成分主要为
凯提皂苷元非糖部分的多种甾体皂苷［1］。吉祥草
中总皂苷具有一定止咳、化痰、抗炎的作用［5］。有
关吉祥草质量标准的研究除氯仿提取部位的薄层鉴
别外［4］，还未见其他方法的报道，因此，作者首次采
用比色法测定了吉祥草中总皂苷的含量，并比较了
10 种不同来源的吉祥草中总皂苷的含量。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
UV － Visible 100Bio 紫外分光光度计(美国瓦
里安);KQ －250B 型超声波清洁器(昆山市超声仪
器有限公司)。凯提皂苷元对照品(自制，通过
IR、1HNMR、13CNMR、MS 分析，鉴定其结构);吉祥
草药材(采自贵州扎佐、贵阳、平镇、六枝、孟关、牛
郎关、广西玉林、云南沼通、云南昆明)经鉴定为吉
祥草 Reineckia carnea(Andr.)kunth 的全草;其余试
剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 溶液的制备 精密称取 6. 5 mg凯提皂苷元
对照品(105 ℃干燥至恒重)，置 50 mL量瓶中，加甲
醇溶解并定容，制成 0. 013 mg·mL －1的对照品溶液。
精密称取 1. 0 g药材粗粉，置 250 mL 圆底烧瓶中，
加入 40 mL 80%乙醇，水浴中回流(2 h × 3)，合并提
取液，过滤，将提取液减压浓缩至干，加 20 mL 水溶
解，用石油醚萃取(15 mL × 3)，弃去石油醚液，水层
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2010.03.024
用水饱和正丁醇萃取(15 mL × 4)，回收正丁醇液，
水浴中蒸干，用甲醇溶解残渣并定容至 25 mL 量瓶
中，作为供试品溶液。
1. 2. 2 测定方法 精密吸取 50 μL 对照品溶液和
适量供试品溶液，水浴中挥干溶剂，依次加入 0. 2
mL 8%香草醛乙醇溶液和 0. 1 mL 高氯酸溶液，密
塞，摇匀后置 70 ℃水浴中恒温加热 15 min，取出后
立即用冰水冷却 5 min，加 5 mL冰醋酸，摇匀。以甲
醇同法制备空白参比。
1. 2. 3 测定波长的选择 按“1. 2. 2”项方法在
400 ～ 800 nm内扫描，确定最大吸收波长为 453 nm。
样品的测定结果以凯提皂苷元为基准计算总皂苷的
含量，对照品与供试品的图谱见图 1。
0.4
0.2
0
0.6
0.4
0.2
0
A a b
400 500 600 700 800 400 500 600 700 800
A
姿/nm
图 1 凯提皂苷元对照品(a)和供试品(b)溶液的吸收图谱
Fig 1 The absorption curves of control solution(a)and sample so-
lution(b)
1. 2. 4 稳定性试验 分别取对照品溶液及适量供
试品溶液，按“1. 2. 2”项下方法于 453 nm 处测定吸
光度，30 min内从起始时间开始，每隔 5 min 测定 1
次，共 6 次。凯提皂苷元对照品溶液的吸光度为
0. 529 ～ 0. 548，RSD = 1. 3%，表明凯提皂苷元对照
品溶液显色后在 30 min 内测定基本稳定(RSD <
3%);供试品溶液的为 0. 448 ～ 0. 459，RSD = 1. 2%，
表明供试品溶液显色后 30 min 内测定也基本稳定
(RSD < 3%)。
1. 2. 5 精密度试验 精密移取对照品溶液及适量
供试品溶液，按“1. 2. 2”项下显色，于 453 nm 处在
30 min内测定吸光度。凯提皂苷元对照品溶液的吸
光度为 0. 574 ～ 0. 577，RSD = 0. 20%;供试品溶液
的为 0. 453 ～ 0. 459，RSD = 0. 30%，表明仪器的精密
度良好。
1. 2. 6 线性关系的考察 分别精密吸取 0. 2、0. 4、
0. 6、0. 8、10 mL 对照品溶液，分别置 10 mL 具塞试
管中，水浴中挥干溶剂，按“1. 2. 2”项下方法处理并
在 453 nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标、浓度
(mg·mL －1)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为:
Y = 8 × 10 －3X + 3 × 10 －3(r = 0. 9996)，凯提皂苷元
26 ～ 136 μg与吸光度有良好的线性。
1. 2. 7 药材的提取条件 选择热回流时间(A)、乙
醇浓度(B)、乙醇用量(C )、提取次数(D)等 4 个因
素，每因素 3 个水平，按 L9(3
4)正交表实验(表 1、
2)，优选出最佳的提取条件进行实验。试验表明:
药材的最佳提取条件为 A3B2C2D2，即用 40 mL 80%
乙醇提取 2 次，提取时间为 2 h。影响提取结果的最
主要因素为热回流时间。
表 1 L9(34)因素 －水平表
Table 1 Factor and levels of L9(34)
Levels Refulxtime
(A)/h
Ethanol
(B)/%
Ethanol volume
(C)/mL
Extractiontime
(D)/ times
1 0. 5 70 20 1
2 1 80 40 2
3 2 95 60 3
表 2 L9(34)正交实验表及结果
Table 2 Orthogonal design of reflux and extraction conditions for
medicinal material
No. A B C D A Content /%
1 1 1 1 1 0. 2725 1. 73
2 1 2 2 2 0. 2835 1. 80
3 1 3 3 3 0. 3022 1. 92
4 2 1 2 3 0. 2897 1. 84
5 2 2 3 1 0. 3069 1. 95
6 2 3 1 2 0. 2991 1. 90
7 3 1 3 2 0. 4551 2. 90
8 3 2 1 3 0. 4660 2. 97
9 3 3 2 1 0. 4395 2. 80
Ⅰ 54. 5 64 66. 17 64. 5
Ⅱ 56. 5 68. 17 64. 5 67. 5
Ⅲ 87. 17 66 67. 5 66. 17
R 32. 67 4. 17 3 2. 67
1. 2. 8 方差方析 为验证直观分析结果，对实验数
据进行了方差分析(表 3)。结果表明:在被考察的
诸因素中，A因素即提取所用时间对提取的效果影
响显著，与直观分析的结果相符。
表 3 正交设计的方差分析表
Table 3 Variance analysis of the results of orthogonal test
差异来源 离均差平方和 自由度 变异均方 统计量 F P
A 223. 5531 2 111. 7766 173. 7789 < 0. 01
B 2. 8998 2 1. 4499 2. 2541 > 0. 01
C 1. 5064 2 0. 7532 1. 1710 > 0. 01
D 1. 2864 2 0. 6432 1 > 0. 01
误差总计 229. 2457 8
1. 2. 9 重复性试验 取同一批次药材 6 份，按“1.
2. 1”项方法制备供试品溶液，按“1. 2. 1”项方法测
定吸光度。根据吸光度，计算出样品中总皂苷的含
量(表 4)。
1. 2. 10 回收率试验 分别精密称取 0. 5 g 已知总
皂苷含量的吉祥草样品 9 份，加入一定量的凯提皂
苷元对照品，按“1. 2. 1”项方法制备供试品溶液，并
按“1. 2. 2”项方法测定吸光度。计算凯提皂苷元的
543第 3 期 周婵媛，等。紫外分光光度法测定吉祥草中的总皂苷
华西药学杂志
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含量并计算回收率(表 5)。
表 4 重复性实验
Table 4 Results of reproducibility test
No. Sample /g A Content /% RSD /%
1 1. 0020 0. 458 2. 93 1. 2
2 1. 0022 0. 459 2. 92
3 1. 0010 0. 449 2. 87
4 1. 0022 0. 453 2. 89
5 1. 0012 0. 459 2. 93
6 1. 0020 0. 458 2. 93
表 5 回收率实验(mg，n =9)
Table 5 Results of recovery test(mg，n =9)
Original Added Found Recovery /% 珔X /% RSD /%
14. 529 7. 000 20. 862 100. 1 97. 3 1. 6
14. 529 7. 000 20. 832 98. 6
14. 558 7. 000 20. 835 98. 5
14. 558 14. 000 27. 662 95. 5
14. 587 14. 000 27. 871 95. 2
14. 529 14. 000 27. 352 96. 3
14. 529 16. 000 30. 628 97. 8
14. 529 16. 000 30. 327 96. 5
14. 558 16. 000 30. 512 97. 5
表 6 不同来源吉祥草药材中总皂苷的含量测定结果
Table 6 Determination results of the samples
No. Habitats Total saponins /mg·g － 1 Content /%
1 Kaiyang，Guizhou 32. 64 3. 26
2 Liuzi，Guizhou 32. 35 3. 23
3 Guiyang，Guizhou 30. 98 3. 09
4 Guiyang，Guizhou 24. 26 2. 42
5 liulangguan，Guizhou 27. 18 2. 71
6 Mengguan，Guizhou 23. 88 2. 38
7 Xiuwen，Guizhou 29. 16 2. 91
8 Kunming，Yunnan 35. 23 3. 51
9 Zhaotong，Yunnan 28. 24 2. 82
10 Yuling，Guangxi 26. 15 2. 61
1. 2. 11 样品的测定 分别精密称取 10 批不同来
源的吉祥草药材，置 250 mL 圆底烧瓶中，按
“1. 2. 1”项制备供试品溶液，甲醇为空白对照，显色
后在 453 nm测定吸光度。由标准曲线回归方程计
算出样品中总皂苷的含量，由于来源和收集的时间
不同，药材中总皂苷存在差异(表 6)。
2 讨论
实验以凯提皂苷元为对照品，通过用香草醛冰
醋酸 －高氯酸 －冰醋酸进行显色反应，测定吉祥草
中总皂苷的含量，比色法所显颜色随显色温度和时
间的变化而变化，因此，必须严格控制条件，尽量排
除干扰。
参考文献:
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tory activity on cAMP phosphodiesterase［J］. Chem Pharm Bull，
1994，42(4):926 － 931.
收稿日期:2009 － 08 － 28
作者简介:宋萍萍(1982—)，女，四川成都，正攻读临床药学专业的硕士学位。Email:shelly_sp@ sina. com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:jxh1013@ 163. com
HPLC测定注射用蒲公英冻干粉针剂中的绿原酸和咖啡酸
宋萍萍，王 凌，蒋学华*
(四川大学华西药学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 建立 HPLC测定注射用蒲公英粉针剂中绿原酸、咖啡酸含量的方法。方法 采用 DikmaTM C18柱(200 mm × 4. 6
mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0. 1%磷酸水溶液(17∶83)，流速为 1. 0 mL·min －1，检测波长为 326 nm，柱温为 30 ℃。结果 绿
原酸浓度 0. 108 ～ 3. 464 μg·mL －1与峰面积的线性关系良好(r = 0. 9998)，平均加样回收率为 99. 68% (n = 9);咖啡酸浓度
0. 114 ～ 3. 648 μg·mL －1与峰面积的线性关系良好(r = 0. 9999)，平均加样回收率为 98. 73%(n = 9)。结论 所建方法灵敏、简
便、准确、重复性好，可用于蒲公英冻干粉针剂中绿原酸、咖啡酸的含量测定。
关键词:蒲公英粉针剂;绿原酸;咖啡酸;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2010)03 － 0346 － 03