全 文 :山鸡椒酒精浸提液对体外细菌的抑制对比研究
李 静, 赵 洪, 马 媛
(黔南民族师范学院生命科学系,贵州 都匀 558000)
摘 要:山鸡椒酒精浸提液对大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等 4 种细菌的抑制试验结果表明:
山鸡椒酒精浸提液对这 4 种细菌都有非常强的抑制作用,且抑制的效果随着酒精浓度的降低逐渐降低。 其中,对金黄色葡
萄球菌的抑制效果最好,蜡样芽胞杆菌次之,大肠杆菌第三,痢疾杆菌最差。 对抑制时间的研究结果表明,山鸡椒酒精浸提
取液对大肠杆菌起杀菌作用,对金黄色葡萄球菌抑制时间最长,蜡样芽胞杆菌次之,痢疾杆菌最短。
关键词:山鸡椒; 抑菌环; 抑菌作用
中图分类号: S567.23+9 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2010)03-0196-03
Comparative study for antiblastic functions of alcohol
extract of the Litsea cubeba in vitro
LI Jing, ZHAO Hong, MA Yuan
(Department of Life Science, Qiannan Normal College for Nationalities, Duyun 558000,China)
Abstract:Analysis results of the size of bacteriostatic annulus showed to inhibition test for four types of bacteria that
alcohol extract of the litsea cubeba of very strong inhibition for them all.And with reducing concentrations of alcohol, the effect
of bacteriostasis was lowered gradually. Among the inhibition effect of four types of bacteria best, staphylococcus aureus, bacillus
cereus, colon bacillus, dysentery bacillus second worst again. The study results for controlling times showed that the litsea
cubeba on colon bacillus was tericidal action, inhibition times was the longest on staphylococcus aureus and bacillus cereus,
dysentery bacillus shortest.
Key words:litsea cubeba; bacteriostatic annulus; bacteriostasis
山鸡椒 [Litsea cubeba (Lour.)Pers.] 属于樟科
(Lauraceae)木姜子属(Litsea cubeba)植物,又名木香
子、木姜子、山苍子、青皮树、山苍树、过山香、山胡椒、
野胡椒、大筑子皮、澄茄子等 [1]。 山鸡椒是落叶灌木或
小乔木,高 8~10 m;树皮幼时黄绿色、光滑,老时灰褐
色。 小枝细瘦,无毛。 叶互生,有香气,矩圆形或披针
形,长 7~11 cm,宽 1.5~3.0 cm,上面深绿色,下面带苍
白色,两面无毛。 伞形花序:花 4~6 朵,花小,黄白色。
果实近球形,有不明显小尖头,直径 4~6 cm,无毛。 幼
时绿色,熟时黑色,花期 11 月至翌年 4 月,果期 5~9
月[2]。
山鸡椒在贵州各地区均有分布,山鸡椒的果实在
民间主要有两大用途:一是食品香料,在各种菜肴里
添加果实,使其具有独有的香味;还可添加在各种腌
渍的食品内,使其既具有特殊风味又能抑制好氧菌的
生长。二是药用,如食积气胀、脘腹冷痛、反胃呕吐、肠
鸣泄、中暑、支气管哮喘等疾病,用鲜果捣烂吞食;还
可治疗无名肿痛、皮肤病等疾病,用鲜果捣烂外敷;此
外还用于牲畜的一些疾病的治疗。在贵州偏远的少数
民族地区,缺医少药的情况下,山鸡椒起了很大的作
用。
目前对山鸡椒的研究主要集中在山鸡椒油方面,
其重要成分主要是柠檬醛、柠檬烯、香茅醛、甲基庚烯
酮、α-蒎烯等[3]。 研究发现,山鸡椒油及其主要成分柠
檬醛是一种广谱抗真菌药物,并证实其有杀菌作用 [4]。
但山鸡椒酒精浸提液抑制细菌方面的试验还未见报
道,本研究旨在对食品研究与民族医药方面提供一些
借鉴。 现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试新鲜山鸡椒果实购自贵州都匀市农贸市场。
供试菌株如大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄
球菌、痢疾杆菌均由贵阳医学院提供。
供试牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏 3 g、蛋白胨 10
收稿日期:2009-10-15
作者简介:李静(1968-),女,副教授,E-mail:dylinjing@
126.com
广东农业科学 2010 年第 3 期196
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2010.03.039
g、NaCl 5 g、 琼脂 15~20 g、 水 1 000 mL、pH 7.0~7.2、
121℃下灭菌 20 min,冷却待用。
1.2 试验方法
1.2.1 酒精制备 分别配置浓度为 95%、75%、55%、
35%、15%等 5种浓度的酒精,设 1个空白对照。
1.2.2 山鸡椒的制备 称取新鲜的山鸡椒果实 50 g,
放入灭菌的碾钵碾碎备用。
1.2.3 浸提液的制备 称取 4 份 50 g 碾碎的山鸡椒,
分别添加 50 mL 不同浓度的酒精,制成浸提液,浸提
时间为 30 min。
1.2.4 菌悬液的制备 取各种供试菌株,分别加入 10
mL无菌水,制成菌悬液,充分混匀,采用直接计数法计
数,菌悬液约在 108~1010 cfu/mL。
1.2.5 抑菌试验 将灭菌后的培养基 20 mL 倒入
无菌培养皿中制成平板。用无菌吸管吸取 0.5 mL 菌
悬液于平板培养基内, 再在其上倒入一层培养基混
匀,使菌悬液与培养基均匀分布在平板内。 用无菌打
孔器将滤纸打成直径 6 mm 的圆片 [4],经灭菌,浸在
山鸡椒水浸液中,每叠 4 片,贴入平板,每平板 3 叠。
将贴好滤纸片的培养皿倒置,于 37℃培养箱中培养,
24 h 后测量抑菌环直径, 并继续培养, 观察抑菌时
间。
1.2.6 测量方法 采用毫米直尺量取抑菌环的直径。
1.2.7 抑菌时间的计时方法 从出现抑菌环开始计
时, 到抑菌环中重新长出第一个菌落为止, 为抑菌时
间[5]。
1.2.8 判断标准 依据判定标准,按消毒技术规范,抑
菌环直径大于 7 mm 者才能判为抑菌显著, 小于或等
于 7 mm者判为无抑菌作用[6]。
2 结果与分析
2.1 山鸡椒对 4种细菌抑菌效果的分析
山鸡椒酒精浸提液抑制细菌生长试验结果见表
1,对表 1数据进行方差分析,结果见表 2。
表 1 山鸡椒酒精浸提液抑制细菌生长试验结果(抑菌环单位:mm)
yi.
22.50
21.33
21.00
21.61
21.50
21.50
22.50
21.83
27.33
24.83
25.00
25.72
19.50
18.83
19.50
19.28
22.11
Ti.
135
128
126
389
129
129
135
393
164
149
150
463
117
113
117
347
1592
CK
18
17
15
50
14
15
14
43
19
16
18
53
15
11
11
37
183
15.25
15%
18
16
16
50
18
19
20
57
25
23
23
71
14
14
15
43
221
18.42
35%
20
20
18
58
20
20
21
61
26
24
26
76
16
15
18
49
244
20.33
55%
22
22
19
63
22
22
24
68
28
26
27
81
18
22
20
60
272
22.67
75%
25
24
22
71
26
25
27
78
31
29
28
88
25
24
26
75
312
26.00
95%
32
29
26
97
29
28
29
86
35
31
28
94
29
27
27
83
360
30.00
处理号
1
2
3
Tij
1
2
3
Tij
1
2
3
Tij
1
2
3
T.j
T.j
y.j
细 菌
大肠杆菌
蜡样芽胞杆菌
金黄色葡萄球菌
痢疾杆菌
山鸡椒
F0.01
26.130
9.020
2.868
F0.05
8.530
4.365
2.066
F
54.540**
126.860**
2.229*
MS
133.09
309.56
5.44
2.44
DF
3
5
15
48
71
SS
399.27
1547.78
81.57
117.33
2145.94
变异来源
细菌
留兰香
细菌×山鸡椒
误差
总计
表 2 山鸡椒酒精浸提液抑制细菌生长试验方差分析表 根据方差分析(表 2)可知,细菌之间抑菌效果的
差异性极其显著; 酒精各浓度之间对细菌的抑菌效果
差异极其显著;该试验浓度与细菌之间抑菌差异显著。
由于细菌之间抑菌效果的差异极其显著, 要进行多重
比较,可采用 Tukey 固定极差法分析 [Sy=0.295,根据
DF=48、K=4、α=0.05 时 qα 临界表 qα=(4,48) =3.79。
TFR0.05=0.295×3.79=1.118 ]检验结果见表 3。
197
根据 Tukey 固定极差法检验,4 种细菌之间抑菌
的差异都显著,金黄色葡萄球菌抑制效果最好,蜡样芽
胞杆菌次之、大肠杆菌第三,痢疾杆菌最差。
2.2 不同浓度山鸡椒酒精浸提液抑菌效果的分析
由图 1 分析可知,随着酒精浓度的降低,山鸡椒
酒精浸提液抑菌作用逐渐降低 ; 山鸡椒水浸提液
(CK)的抑菌效果也很显著,它们的抑菌环都大于 7
mm。
2.3 不同浓度山鸡椒酒精浸提液抑制细菌生长的时
间分析
将不同浓度山鸡椒酒精浸提液对 4 种细菌抑制细
菌生长的时间记录如表 4所示。对表 4分析可知,大肠
杆菌抑菌圈菌落不能再恢复, 说明山鸡椒酒精浸提液
对大肠杆菌起杀菌作用;对其他 3种菌的抑菌时间为,
金黄色葡萄球菌抑菌时间最长,蜡样芽胞杆菌次之,痢
疾杆菌最短。
3 结语
根据山鸡椒酒精浸提液对大肠杆菌、 蜡样芽孢杆
菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌抑菌环的分析,山鸡椒
对这 4种细菌的抑制作用都非常强; 细菌之间抑菌效
果的差异性极其显著, 酒精各浓度之间对细菌的抑菌
效果差异也极其显著。其中,金黄色葡萄球菌抑制效果
最好,蜡样芽胞杆菌次之,大肠杆菌第三,痢疾杆菌最
差。
不同浓度山鸡椒酒精浸提液对细菌抑菌作用不
同。随着酒精浓度的降低,山鸡椒酒精浸提液抑菌作用
逐渐降低;山鸡椒水浸提液(CK)的抑菌效果也很显
著。
从山鸡椒酒精浸提液对 4种细菌抑菌时间的分析
可知,山鸡椒对大肠杆菌起杀菌作用;对其他 3 种菌的
抑菌时间为: 金黄色葡萄球菌最长, 蜡样芽胞杆菌次
之,痢疾杆菌最短。
参考文献:
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图 1 山鸡椒酒精浸提液抑制细菌生长抑菌环平均数对比
抑
菌
环
直
径
( m
m
)
酒精浓度(%)
yi.
∝
2.56
2.50
2.23
Ti.
∝
46
45
41
CK
-
-
-
1
1
1
1
1
1
1
1
1
15%
-
-
-
2
1
1
2
1
1
2
1
1
35%
-
-
-
3
2
1
3
2
2
3
2
1
55%
-
-
-
4
3
3
4
3
3
3
3
3
75%
-
-
-
4
3
3
4
3
3
3
3
3
95%
-
-
-
5
4
4
4
4
3
4
3
3
处理号
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
细 菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
蜡样芽胞杆菌
痢疾杆菌
酒精浓度
表 4 山鸡椒酒精浸液抑制细菌生长的时间(单位:d)
注:“-”代表抑菌时间∝。
平均数
25.72a
22.50b
21.61c
19.28d
细 菌
金黄色葡萄球菌
蜡样芽胞杆菌
大肠杆菌
痢疾杆菌
表 3 4 种细菌抑菌环平均数间差异的 Tukey 固定极差法检验
注:表中同列数据后小写英文字母不同者表示该 DMRT 法
检测差异显著。
198