全 文 ：ＨＰＬＣ法测定乌蕨中酚酸类成分含量研究
李小芳１，２，罗国安２＊，朱婉婷１，３
（１．江西中医药大学，江西 南昌３３０００４；２．清华大学，北京１０００８４；
３．广东药学院 中药学院，广东 广州５１０００６）
摘　要：目的：采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定不同产地乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛２个酚酸化合物的含量。方
法：色谱柱为依利特ＯＤＳ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇－０．１％磷酸水溶液（２５∶７５）为流动相，
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２６０ｎｍ，柱温：２５℃。结果：原儿茶酸在０．１４～２．８μｇ范围内线性关系良好
（ｒ＝０．９９９　８），平均回收率为１００．１９％（ＲＳＤ＝０．１２％）；原儿茶醛在０．０６～１．２μｇ范围内线性关系良好
（ｒ＝０．９９９　９），平均回收率为９８．６５％（ＲＳＤ＝１．７１％）。结论：该方法简便、快速、准确可靠，可为乌蕨的
质量控制提供依据。
关键词：乌蕨；原儿茶酸；原儿茶醛；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ２８４．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０８－００３６－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０８０１５
收稿日期：２０１５－１１－１３
作者简介：李小芳（１９８９－），女，江西中医药大学硕士研究生，研究方向为药物质量控制。
通讯作者：罗国安（１９４６－），男，清华大学教授，博士生导师，研究方向为药物分析及中医药系统生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：１５０８３７９９３３
＠１６３．ｃｏｍ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　Ｐｈｅｎｏｌｉｃ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　Ｓｔｅｎｏｌｏｍａｃｈｕｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
Ｌｉ　Ｘｉａｏｆａｎｇ１，２，Ｌｕｏ　Ｇｕｏａｎ２＊，Ｚｈｕ　Ｗａｎｔｉｎｇ３
（１．Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３０００６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｓｉｎｇｈｕａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８４，Ｃｈｉｎａ；３．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　ａｌｄｅｈｙｄｅ　ｉｎ　Ｓｔｅｎｏｌｏｍａｃｈｕ－
ｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｕｒｃｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－０．１％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（２５∶７５）；Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ；Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２６０ｎｍ；Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ａｔ　２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　ａｌｄｅ－
ｈｙｄｅ　ｗｅｒｅ　０．１４～２．８μｇ（ｒ＝０．９９９　８），０．０６～１．２μｇ（ｒ＝０．９９９　９）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙｓ　ｗｅｒｅ　１００．１９％（ＲＳＤ＝０．１２％）ａｎｄ
９８．６５％（ＲＳＤ＝１．７１％）（ｎ＝６），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ａｌｓｏ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ａｓ　ａ
ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｓｔｅｎｏｌｏｍａｃｈｕｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｔｅｎｏｌｏｍａｃｈｕｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ；Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　Ａｃｉｄ；Ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ　Ａｌｄｅｈｙｄｅ；ＨＰＬＣ
　　乌蕨（Ｓｔｅｎｏｌｏｍａ　ｃｈｕｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ　ｉｎ　Ｓｉｎｅｎｓｉａ）
为鳞始蕨科植物（Ｌｉｎｄｓａｅａｃｅａｅ）乌蕨属植物，其主要分布在
西南及江苏、安徽、浙江、广东、广西等地，具有清热解毒、利
湿、止血等功效，又称乌韭、大叶金花草，别名野黄连、水黄
连、金花草、苦黄连等。其化学成分主要为牡荆素、丁香酸、
原儿茶醛、原儿茶酸等［１－５］，其中酚酸类化合物的生物活性广
泛而温和，具有抗菌、消炎、抑制血小板聚集、抗凝及血栓形
成等作用，原儿茶酸、原儿茶醛均具有明显的抗菌活性、抗
炎作用和调节脂肪肝细胞作用［６－９］。本实验参考相关文
献［１０－１２］对乌蕨中原儿茶酸、原儿茶醛２个酚酸类成分进行
含量测定，为乌蕨质量标准建立提供参考依据。
１　材料与试剂
１．１　材料
Ｗａｔｅｒｓ　２６９５高效液相色谱仪，ＡＵＷ２２０Ｄ型电子天平
（十万分之一，日本岛津公司）；ＢＳ２２４Ｓ型电子天平（万分之
一，Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）；ＫＱ２５０ＤＢ型数控超声波清洗器（巩义市予华
仪器有限责任公司）；ＫＱ５２００型水浴锅（昆山市超声仪器有
限公司）。
—６３—
１．２　试剂
原儿茶酸对照品（批号：１１０８０９－２０１２０５，含量以９９．９％
计，中国食品药品检定研究院），原儿茶醛对照品（批号：
１１０８１０－２０１００７，含量以９８．２％计，中国食品药品检定研究
院），甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
本实验收集到不同批次的乌蕨样品共１０批，样品经南
昌市食品药品检验所副主任药师吴蓓鉴定为乌蕨（Ｓｔｅｎｏｌｏ－
ｍａｃｈｕｓａｎｕｍ（Ｌｉｎｎ．）Ｃｈｉｎｇ．）。见表１。
表１　样品信息
编号 产地 编号 产地
Ｓ１ 江西 Ｓ６ 贵州
Ｓ２ 福建 Ｓ７ 云南
Ｓ３ 湖北 Ｓ８ 河南
Ｓ４ 安徽 Ｓ９ 山东
Ｓ５ 浙江 Ｓ１０ 广西
２　方法与结果
２．１　乌蕨药材供试品溶液制备
精密称取乌蕨药材粉末（过４号筛）１．０ｇ，置具塞锥形
瓶中，精密加入７０％乙醇５０ｍＬ，称重，回流提取１．５ｈ，称重
补重，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
２．２　对照品溶液制备
精密称取原儿茶酸、原儿茶醛对照品适量，分别加７０％
乙醇制备原儿茶酸浓度为０．１４ｍｇ·ｍＬ－１、原儿茶醛浓度为
０．０６ｍｇ·ｍＬ－１的对照品溶液。
２．３　色谱条件
色谱柱：依利特ＯＤＳ　Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动
相：甲醇－０．１％磷酸溶液（２５∶７５）；检测波长：２６０ｎｍ；体积
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温２５℃。理论塔板数按原儿茶酸计算
不低于４　０００，原儿茶醛不低于７　０００。乌蕨药材供试品溶液
中原儿茶酸、原儿茶醛分离度良好。见图１、图２、图３。
图１　原儿茶酸对照品色谱
图２　原儿茶醛对照品色谱
图３　乌蕨药材供试品色谱
２．４　线性关系试验
精密吸取原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶液适量，分别按
１．０、４．０、７．０、１１．０、１５．０、２０．０μＬ注入液相色谱仪中，按
“２．３”项色谱条件测对照品峰面积，将样品浓度与峰面积进
—７３—
行回归处理。原儿茶酸回归方程为：Ｙ＝１７２　４７０．４８０　１Ｘ＋
１　５８７．７５３　５（ｎ＝６），ｒ＝０．９９９　８，原儿茶酸对照品在０．１４～
２．８μｇ范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系；原儿茶醛
为：Ｙ＝４６１　３７３．３４２　２Ｘ－３６５．５３８　５（ｎ＝６），ｒ＝０．９９９　９，原
儿茶醛对照品在０．０６～１．２μｇ范围内进样量与峰面积呈良
好的线性关系。
２．５　精密度试验
分别精密吸取原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶液１０μＬ，
按“２．３”项色谱条件，重复进样６次，测定原儿茶酸、原儿茶
醛峰面积值；结果显示：原儿茶酸ＲＳＤ为０．２１％，原儿茶醛
ＲＳＤ为０．３２％，表明仪器的精密度较好。
２．６　稳定性试验
取供试品溶液，精密吸取供试品溶液１０μＬ，按“２．３”项色
谱条件，在１２ｈ内每隔１ｈ或２ｈ或４ｈ，测定供试品溶液中原
儿茶酸、原儿茶醛峰面积值；结果显示：原儿茶酸 ＲＳＤ为
０．４３％，原儿茶醛ＲＳＤ为１．２３％，表明供试品在１２ｈ内稳定。
２．７　重复性试验
取已知含量乌蕨药材１．０ｇ，共６份，按“２．１”项实验方
法制成供试品溶液，按“２．３”项色谱条件进行测定，计算溶
液中原儿茶酸、原儿茶醛的含量；结果显示：原儿茶酸平均
含量为２．０４２　３ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ为１．６２％），原儿茶醛平均含量
为０．７９４　１ｍｇ／ｇ（ＲＳＤ为０．４５％），表明该方法重现性良好。
２．８　平均加样回收率试验
称取已知含量的样品约１．０ｇ，共６份，精密称定，置具塞
锥形瓶中，加入浓度０．０４１　６ｍｇ／ｍＬ原儿茶酸、０．０１６ｍｇ／ｍＬ
原儿茶醛混合溶液５０ｍＬ；按“２．１”项实验方法制备供试品
溶液，测定溶液原儿茶酸、原儿茶醛的含量，计算回收率。
结果见表２、表３。
表２　原儿茶酸加样回收率
样号 样品中原儿茶酸量（ｍｇ） 加入原儿茶酸量（ｍｇ） 测出原儿茶酸含量（ｍｇ） 回收率（％） 平均值（％） ＲＳＤ（％）
１　 ２．０８６　６　 ２．０８　 ４．１７５　４　 １００．４２
２　 ２．０８７　４　 ２．０８　 ４．１６９　８　 １００．１１
３　 ２．０８７　６　 ２．０８　 ４．１７１　１　 １００．１７
１００．１９　 ０．１２４　 ２．０８７　８　 ２．０８　 ４．１７０　１　 １００．１１
５　 ２．０８６　５　 ２．０８　 ４．１６９　５　 １００．１４
６　 ２．０８６　５　 ２．０８　 ４．１７０　４　 １００．１８
表３　原儿茶醛加样回收率
样号 样品中原儿茶醛量（ｍｇ） 加入原儿茶醛量（ｍｇ） 测出原儿茶醛量（ｍｇ） 回收率（％） 平均值（％） ＲＳＤ（％）
１　 ０．８２４　４　 ０．８　 １．６３２　１　 １００．９６
２　 ０．８２４　９　 ０．８　 １．６２２　１　 ９９．６５
３　 ０．８２６　２　 ０．８　 １．５９７　１　 ９６．３６
９８．６５　 １．７１４　 ０．８２４　５　 ０．８　 １．６１２　３　 ９８．４８
５　 ０．８２７　１　 ０．８　 １．６２１　２　 ９９．２６
６　 ０．８２４　５　 ０．８　 １．６０１　９　 ９７．１８
２．９　样品含量测定
取不同乌蕨药材１０批，分别按“２．１”项方法平行制备
供试品溶液，按“２．３”项色谱条件进行测定，每份进样３次，
计算原儿茶酸、原儿茶醛的含量。结果见表４。
表４　样品酚酸化合物含量测定结果 （ｍｇ／ｇ）
产地 原儿茶酸 原儿茶醛
Ｓ１　 １．１２１　３　 ０．７２１　２
Ｓ２　 ２．０８２　４　 ０．８０１　１
Ｓ３　 ２．１４２　２　 ０．９４０　２
Ｓ４　 ２．１４４　３　 １．２３３　０
Ｓ５　 ２．１８１　５　 １．１１１　７
Ｓ６　 １．１２５　４　 ０．８０３　２
Ｓ７　 １．８６３　７　 １．２５１　２
Ｓ８　 １．８３８　１　 ０．６９７　６
Ｓ９　 ２．０４２　５　 １．０４４　５
Ｓ１０　 ２．０４６　４　 ０．５９２　１
３　讨论
根据原儿茶酸、原儿茶醛的溶解性及乌蕨药材化学成
分，本实验考察了不同溶剂的提取（甲醇、乙醇、水）及不同的
提取方法（超声、回流）。结果发现，７０％乙醇为最佳提取溶
剂，而回流提取效果明显优于超声，因此提取方式选择回流。
由表４中数据可知，原儿茶酸平均含量稍高于原儿茶
醛含量。同时，不同产地中原儿茶酸、原儿茶醛含量亦有差
异；原儿茶酸含量最高的来自浙江，原儿茶醛含量最高的来
自云南，２种成分含量可能由于地域的差异导致成分各异，
对临床针对某一病症的活性成分选择药材来源及功效评判
具有一定的参考意义。
参考文献：
［１］　任冰如．乌蕨（Ｓｔｅｎｏｌｏｍａ　ｃｈｕｓａｎｕｍ）化学成分研究及其资源
利用评价［Ｄ］．南京：南京农业大学，２００８．
［２］　岳银，杨加竹，陈业高．乌蕨的化学成分及活性研究进展［Ｊ］．
广州化工，２０１３，４１（１７）：４１－４３．
［３］　卢海啸，李家洲，农秀珍，等．乌蕨乙酸乙酯部位化学成分
［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１４，２０（９）：１１４－１１７．
［４］　陈明，段萍，赵鸿宾．乌蕨中黄酮类成分提取分离方法的研究
进展［Ｊ］．黔南民族医专学报，２０１４，２７（２）：８４－８６．
［５］　任冰如，李维林．乌蕨的研究进展［Ｊ］．中国野生植物资源，
２００６（２）：１２－１４．
［６］　邹长军，吴晓珍．原儿茶酸－环丙沙星／脱乙酰几丁质抗菌药
膜的制备及缓释动力学［Ｊ］．烟台大学学报：自然科学与工程
版，２００４（１）：４２－４５．
［７］　王晗，刘天庆，关水，等．原儿茶酸促进人脂肪干细胞体外迁
移研究［Ｊ］．大连理工大学学报，２００９（３）：３２７－３３２．
［８］　刘梅，夏鑫华，张志敏，等．丹参素、原儿茶醛、咖啡酸和丹酚酸
Ｂ体外抗氧化活性比较研究［Ｊ］．中药材，２００９，３２（２）：２６５－２６７．
［９］　韩纯洁，林蓉，刘俊田，等．原儿茶醛对ｏｘ－ＬＤＬ损伤的血管内
皮细胞保护作用［Ｊ］．中药材，２００７，３０（１２）：１５４１－１５４４．
—８３—
中医治疗偏头痛肝阳上亢型研究进展
向文涛，金　曦＊
（长春中医药大学，吉林 长春１３０１１７）
摘　要：偏头痛发生率呈逐年升高的趋势，现代临床治疗偏头痛缺乏行之有效的方法，肝阳上亢证为偏
头痛的常见证候之一。对偏头痛肝阳上亢证候的病因病机及药物治疗进展进行总结，运用中医学理论，
辨病、辨证结合，采用中医药立体化、多样化干预治疗肝阳上亢型偏头痛，以期为中医临床治疗偏头痛提
供参考依据。
关键词：偏头痛；肝阳上亢；病因病机；方药
中图分类号：Ｒ２４６．６　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０８－００３９－０２
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０８０１６
收稿日期：２０１５－１１－２０
基金项目：吉林省科技计划发展项目（２０１５０２０４０４６ＹＹ）
作者简介：向文涛（１９８９－），男，长春中医药大学硕士研究生，研究方向为中医内科学。
通讯作者：金曦（１９６８－），女，长春中医药大学主任医师，研究方向为中医内科学。
　　偏头痛又称血管性头痛，为神经内科常见多发性疾病。
目前，全球大概有２．４亿偏头痛患者，每年经受着大约１４亿
次偏头痛的折磨［１］。世界卫生组织（ＷＨＯ）调查结果［２］显
示，重度偏头痛为最常见的内科疾病之一。研究［３］结果显
示，我国偏头痛患者发病率达７９．１７／１０万，且呈逐年上升
的趋势。以中医学整体理论辨证论治为基本诊疗原则，对
偏头痛患者采用个体化临床干预措施，往往可获得较好的
疗效。本文就偏头痛肝阳上亢证候研究进展进行总结，概
述如下。
１　病因病机认识
肝阳上亢证为偏头痛临床最常见的证候之一。《素问
·金匮真言论》［４］云：“东风生于春，病在肝，俞在颈项……
故春气者病在头。”肝为刚脏，体阴而用阳，若情志暴怒，则
肝失疏泄，肝之阳气上亢，气血逆乱，发为偏头痛。《素问·
至真要大论》云：“诸风掉眩，皆属于肝。”肝为风木之脏，肝
用失常，则内风易起，上犯清窍，发为头痛。
胡志强等［５］认为，偏头痛的病因病机其主要责之于肝
胆失疏、风阳上扰。肝胆失疏为偏头痛之基础，风阳上扰为
偏头痛始动因素，痰瘀阻窍、络脉失宁为导致偏头痛的主要
病理变化。根据该理论创立以“平肝熄风、化痰降浊、通络
止痛”为主的基本治法。孙建宁［６］认为偏头痛因肝胆热结，
热极生风，痰阻血瘀，从而导致清窍失和，络脉闭塞，发而为
病，多因忧思恼怒，气血上逆而诱发。
２　临床干预措施
２．１　方药治疗
采用中药治疗肝阳上亢型偏头痛，可根据患者的不同
情况对机体气血阴阳失衡状态进行调节，疗效较好。刘乃
勤［７］使用天麻钩藤饮加减治疗肝阳上亢型偏头痛患者６８
例，对照组患者５６例采用盐酸氟桂利嗪胶囊口服治疗；结
果显示：治疗组患者治疗总有效率为９２．６５％，明显高于对
照组的６９．６４％，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。丁砚兵
等［８］采用天舒胶囊治疗肝阳上亢型偏头痛３０例，对照组患
者给予西比宁胶囊口服；治疗１个月，结果显示：治疗组偏
头痛患者临床症状及中医证候明显改善，且优于对照组，差
异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。陈孝银等［９］采用平肝潜阳
汤治疗肝阳上亢型偏头痛患者３２例，可取得满意的疗效。
于红专等［１０］采用平肝熄风胶囊治疗肝阳上亢证患者，治疗
组患者治疗总有效率９４．４４％，明显优于对照组的８６．１１％，
差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５

）。
［１０］　姜鸿，王光函，张颖，等．ＨＰＬＣ法测定火绒草中原儿茶酸、
原儿茶醛、绿原酸和咖啡酸［Ｊ］．中成药，２０１１，３３（１１）：２０２３－
２０２５．
［１１］　张淑蓉，裴妙荣，裴香萍，等．反相高效液相色谱法测定炎立
消胶囊中原儿茶酸、原儿茶醛和酪醇的含量［Ｊ］．中国实验
方剂学杂志，２００８，１４（６）：１２－１４．
［１２］　周燕园．ＨＰＬＣ法测定烫狗脊配方颗粒中原儿茶酸和原儿
茶醛［Ｊ］．中成药，２０１２，３４（９）：１８２２－１８２５．
（责任编辑：李岚春）
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