全 文 ：JTCVM
年第 3 期2014
线叶龙胆 Gentiana farreri Balf.f 为龙胆科龙胆属植物，
主产于青海、西藏、甘肃等地，甘南当地称其为龙胆草、喇
叭花、高山龙胆，以全草入药。其性味苦寒，归肝胆经，具
有清热燥湿、泻火定惊的功效，用于湿热黄疸、喉痛、目
赤、阴囊肿痛、胆囊炎等证。
线叶龙胆的主要成分为龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜
苷、落干酸等。目前，对该药的生药学研究较少，为进一步开
发利用龙胆科植物，笔者等采用 HPLC法测定 7个不同产
地的线叶龙胆中獐牙菜苦苷的含量，旨在对不同产地的线
叶龙胆药材品质进行比较，为其开发利用提供科学依据。
1 材料、试剂和仪器
1.1 药材
线叶龙胆分别采自甘肃（夏河、甘南、合作、马衔山）、
青海湟源、河南、西藏林芝，经甘肃中医学院药学系生药教
研室林丽老师鉴定为龙胆科植物线叶龙胆。
1.2 试剂
獐牙菜苦苷对照品（批号：0785-200203，购自中国药
品生物制品检定所）；甲醇、乙腈、乙醇、氢氧化钠、氢氧化
钾、磷酸、碳酸钠、对二甲氨基苯甲醛、氨水、正丁醇、磷酸
二氢钾均为分析纯；蒸馏水；纯净水。
1.3 仪器
高效液相 Agilent1200（安捷伦公司），检测器：G131513
二极管阵列检测器（美国）；BS 224 S 型电子天平（北京赛
多利斯仪器系统有限公司）；KQ-250 高频数控超声波清
洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；101-2 电热恒温鼓风干
燥箱（上海跃进医疗器械厂）；DJ-02 型中药粉碎机（上海
淀久中药机械制造有限公司）；HHS112 型电热恒温水浴锅
（北京长安科学仪器厂）；C 型玻璃仪器气流烘干器（河南
省予华仪器有限公司）；SHB-3型循环真空泵（郑州杜甫仪
器厂）；药筛；具塞三角瓶、容量瓶（5、10 mL）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 ZORBAX Edipse XDB－C18柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为甲醇－纯净水（37∶63）；流速为 0.8 mL/min；
检测波长为 240 nm；柱温为 30 ℃；进样量为 1 μL，样品分
离良好。各待测样品色谱图见图 1。
1
2
3
收稿日期：2013-12-26
基金项目：中医药公共卫生专项（财社［2011］76 号）；中医药行
业科研专项（2012507002）
作者简介：宁艳梅（1977-），女，讲师，主要从事临床中药学教学
与研究，E-mail：hiningyanmei@qq.com
通讯作者：杨 韬（1977-），男，中级实验师，主要从事药用植物
栽培研究，E-mail：848861763@qq.com
不同产地线叶龙胆中獐牙菜苦苷含量测定
宁艳梅 1，2，3，杨秀娟 1，2，杨 韬 1，3，林 丽 1，3，杜 弢 1，3
（1.甘肃中医学院，甘肃兰州 730000；2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室（培育基地），甘肃兰州
730000；3.甘肃中医学院药用植物遗传育种研究所，甘肃兰州 730000）
摘 要：目的：测定不同产地线叶龙胆中獐牙菜苦苷的含量，为科学评价及有效控制其质量提供依据。方
法：采用反相高效液相色谱法，以 ZORBAX Edipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱；流动相：甲醇-
水（37∶63）；流速：0.8 mL/min；检测波长:240 nm；柱温：30 ℃。结果：獐牙菜苦苷在 0.038-0.375 μg范围内与峰面
积有良好的线性关系，其平均回收率为 98.8%，RSD为 1.13%（n=6），7个不同产地的线叶龙胆的獐牙菜苦苷含
量由高到低为：马衔山＞湟源＞桑科＞林芝＞夏河＞河南＞合作。结论：该方法操作简便、准确、重复性好，可用于线
叶龙胆中獐牙菜苦苷的含量测定。
关键词：线叶龙胆；獐牙菜苦苷；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：S853.7 文献标志码：A 文章编号：1000-6354（2014）03-0042-03
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2014.03.011
实
验
技
术
42
JTCVM
年第 3 期2014
4
5
6
7
8
图 1 高效液相色谱图
Figure 1 High performance liquid chromatography
（HPLC） figure
注：1.獐牙菜苦苷标准品；2.合作供试品；3.马衔山供试品；
4.西藏供试品；5 桑科供试品；6 夏河供试品；7 湟源供试品；8 河
南供试品。
Notes：1. Swertiamarin standard; 2. samples from Hezuo City; 3.
samples from Maxian Mountains; 4. samples from Tibet; 5. samples
from Sanke Grasslands; 6. samples from Xiahe County; 7. samples
from Huangyuan County; 8. samples from Henan Province.
2.2 对照品溶液的制备
精密称取獐牙菜苦苷对照品 4 mg，置 10 mL 容量瓶
中，加入甲醇溶解，并定容至刻度，再吸取 1 mg，于 10 mL
容量瓶中定容至刻度，摇匀，其浓度为 0.04 mg/mL。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取不同产地线叶龙胆粉末各（过 60目筛）0.5 g，
每产地各 3 份，置 25 mL 具塞锥形瓶中，加甲醇 20 mL，提
取 30 min，冷却至室温，过滤，滤液置于 25 mL 容量瓶中，
用甲醇定容，摇匀即得。
2.4 标准曲线的绘制
按“2.1”项色谱条件精密进样獐牙菜苦苷对照品溶液
1、3、5、7、9 μL，测定峰面积，以峰面积（Y，mAu）为纵坐
标、进样量（X，μg）为横坐标，进行线性回归，得到回归方
程为：Y=1 442 .3X-10 .759，r=0.999 5。结果表明，獐牙
菜苦苷进样量在 0.038-0.375 μg 范围内与峰面积积分值
呈良好的线性关系，标准曲线见图 2。
图 2 标准曲线
Figure 2 Standard curve
2.5 精密度试验
精密吸取“2.2”项下对照品溶液 1 μL，按“2.1”项下色谱
条件连续进样 5 次，结果，獐牙菜苦苷峰面积 RSD 为
1.58%，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取同一批（甘肃桑科）样品约 0.5 g，精密称定，按“2.3”
项方法制备供试品溶液，于制备 0、4、8、12、16 h后，各进样
5 μL，按“2.1”项色谱条件进行测定。结果獐牙菜苦苷平均
峰面积为 164.84，RSD为 2.56%，表明供试品溶液 16 h内基
本稳定。
2.7 重现性试验
取同一批（甘肃桑科）样品约 0.5 g，共 6 份，精密称
定，按“2.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件
进样，测定。结果 6 份样品中獐牙菜苦苷平均含量为
0.140%，RSD为 2.18%，表明方法重现性良好。
2.8 加样回收试验
取已知含量的同一批样品（甘肃桑科）共 6 份，精密称
定，分别加入獐牙菜苦苷对照品，按“2.3”项方法制备供
试品溶液，按“2.1”项色谱条件进样分析测定，计算加样回
收率，结果见表 1。
m
A
u
R滋 g
实
验
技
术
43
JTCVM
年第 3 期2014
表 1 加样回收率试验结果（n=6）
Table1 Results of sample recovery rate（n=6）
2.9 含量测定
取每个不同产地的同一批次药材各 3 份，按“2.3”项
方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样测定，
结果见表 2。
表 2 样品中獐牙菜苦苷含量测定结果（n=3）
Table 2 Swertiamarin content in all samples（n=3）
3 讨论
3.1 实验结果表明，7 个不同产地的线叶龙胆中均含有獐
牙菜苦苷，含量高低顺序为：马衔山＞湟源＞桑科＞林芝＞夏
河＞河南＞合作。甘肃桑科、夏河与西藏林芝的含量接近，
因此甘、青、藏三省区的线叶龙胆均具有良好的开发前景。
3.2 药典中尚未记载线叶龙胆中獐牙菜苦苷含量测定的
方法，在实验中选用水-甲醇（70 ∶30、67 ∶33、65 ∶35）为流动
相，出峰效果差，不能与其他成分很好的分离。经过查阅资
料、参考药典中测龙胆苦苷的方法，最终选择以水-甲醇
（63 ∶37）为流动相，流速为 0.8 mL/min、检测波长 240 nm、
柱温为 30 ℃、进样量为 1 μL 的条件进行含量测定，避免
了杂质的强吸收干扰，并使獐牙菜苦苷能获得良好的分离
测定。
3.3 本试验采用热回流方法提取獐牙菜苦苷，杂质较多，
并且可能由于獐牙菜苦苷在温度较高时不稳定，导致测得
的獐牙菜苦苷含量较低，因此在今后的研究中可以尝试常
温或冷浸法提取。
参考文献：
[1] 高光跃，李 鸣，冯毓秀，等.11 种獐牙菜及近缘植物中
有效成分的高效液相色谱测定 [J].药学学报，1994，29
（12）：910-914.
[2] 许传梅，董 琦，星玉秀，等.藏药提宗龙胆和线叶龙胆
中四种苦苷类成分的 HPLC 测定[J].天然产物研究与开
发，2008，20：466-468.
[3] 陶曙红，吴凤锷. 生态环境对药用植物有效成分的影响
[J].天然产物研究与开发，2005，15（2）：174-177.
[4] 刘海清，刘亚蓉，朱志强 .青海省龙胆属药用植物资源
概况[J].中药材，1995，18：119-125.
[5] 田成旺，张铁军 .HPLC 测定藏茵陈中獐牙菜苦苷和龙
胆苦苷[J].中草药，2006，37（3）：442-443.
[6] 吴 江，林鹏程，卢永昌，等 .HPLC 法同时测定红直獐
牙菜中 3 种有效成分的含量[J].青海大学学报：自然科
学版，2005，23（6）：66-69.
加入量/mg 测得量/mg 回收率/%X/% RSD/%
0.700 4 1.4289 99.67
0.699 8 1.4123 97.32
0.700 2 1.4290 99.71 98.82 1.135
0.700 6 1.4312 100.08
0.700 5 1.4185 98.31
0.700 8 1.4176 97.90
产地 峰面积/mAu 含量/% 平均含量/%
马衔山 319.8 0.2292
329.1 0.2356 0.2333
328.4 0.2351
桑科 169.4 0.1249
158.7 0.1174 0.1194
156.3 0.1158
夏河 159.2 0.1178
151.4 0.1124 0.1131
146.7 0.1092
合作 57.3 0.0472
56.7 0.0467 0.0473
58.4 0.0479
青海湟源 227.0 0.1648
221.3 0.1609 0.1615
218.6 0.1590
河南 78.9 0.0621
76.4 0.0604 0.0617
79.2 0.0624
西藏林芝 158.6 0.1174
156.8 0.1161 0.1134
142.9 0.1065
Determination of Swertiamarin in linearleaf gentian from different habitats
NING Yan-mei1，2，3, YANG Xiu-juan1，2,YANG Tao1，3, DU Li1，3, DU Tao1，3
（1.Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou Gansu 730000; 2.Key Laboratory of Pharmacology and
Toxicology for Traditional Chinese Medicine of Gansu Province（Nurturing Station）, Lanzhou Gansu 730000; 3. Institute of
Medicinal Plant Genetics and Breeding, Gansu University of TCM, Lanzhou Gansu 730000,China）
Abstract：Objective: To etermine the content of Swertiamarin in linearleaf gentian from different regions and provide
experiment basis for scientific assessment. Methods: A reversed -phase HPLC method was established, the samples were
injected into ZORBAX Edipse XDB-C18 capillary column; Mobile phase：methanol and water（37∶63）; Flow rate：0.8 mL·
min -1; Determine wavelength：240 nm; Temperature：30 ℃ . Results：Swertiamarin had a good linear relationship with the
peak area in the range of 0.038 μg-0.375 μg, the average recovery rate was 98.8% with RSD of 1.13%（n=6）. The content
of Swertiamarin from high to low was Maxian Mountains, Huangyuan County of Qinghai Province, Sanke Grasslands of Gansu
Province, Nyingchi Prefecture of Tibet, Xiahe County of Gansu Province, Henan Province and Hezuo City of Gansu Province.
Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility, so it can be used to determine the content of
Swertiamarin in linearleaf gentian.
Key words：linearleaf gentian; Swertiamarin; content determination; HPLC
实
验
技
术
44