全 文 ：猴耳环消炎胶囊中没食子酸、槲皮苷的含量测定
李志强，王静仪
(广州市花城制药厂，广东 广州 510555)
摘要:目的 建立猴耳环消炎胶囊中没食子酸、槲皮苷含量测定的方法。方法 采用 HPLC法测定，色谱柱
为 Diamonsil C18柱(200 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;以乙腈为流动相 A，以 0． 2%(体积分数)H3PO4 为流动相
B，梯度洗脱;没食子酸检测波长为 270 nm，槲皮苷检测波长为 350 nm;流速为 1． 0 mL /min，柱温为 30
℃。结果 没食子酸在 0． 600 4 ～ 6． 004 μg范围内线性良好(r = 0． 999 4) ，平均回收率为 100． 17%，RSD
值为 0． 82%;槲皮苷在 0． 031 ～ 0． 310 μg范围内线性良好(r = 0． 999 4) ，平均回收率为 99． 82%，RSD值
为 0． 38%。结论 建立的方法简便、准确，可用于猴耳环消炎胶囊中没食子酸、槲皮苷的测定。
关键词:猴耳环消炎胶囊;HPLC法;没食子酸;槲皮苷;含量测定
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2013． 04． 013
文章编号:1006-8783(2013)04-0400-03
Determination of gallic acid and quercetin in Houerhuan anti-inflammatory capsules
LI Zhiqiang，WANG Jingyi
(Guangzhou Huacheng Pharmaceutical Factory，Guangzhou 510555，China)
Abstract:Objective To establish a determination method for gallic acid and quercetin in Houerhuan anti-
inflammatory capsules．Methods HPLC was performed on Diamonsil C18 column(200 mm × 4． 6 mm，5
μm)gradiently eluting with acetonitrile as mobile phase A，and 0． 2% H3PO4 as B at a flow rate of 1． 0
mL /min． Gallic acid was detected at the wavelength of 270 nm，and quercetin was detected at 350 nm． The
column temperature was 30 ℃ ． Results The linearity of gallic acid was good in the range of 0． 600 4 －
6. 004 μg(r = 0． 999 4) ，and the average recovery was 100． 17% (RSD = 0． 82%)． The linearity of
quercetin was good in the range of 0． 031 － 0． 310 μg(r = 0． 999 4) ，and the average recovery of 99． 82%
(RSD = 0． 38%)． Conclusion The established method is simple，accurate and may be used for the
determination of gallic acid and quercetin in Houerhuan anti-inflammatory capsules．
Key words:Houerhuan anti-inflammatory capsules;HPLC;gallic acid;quercetin;determination
收稿日期:2013-03-26
作者简介:李志强(1964 －) ，男，工程师，从事药品质量标准研究，Email:lifangli1929@ 21cn． com。
网络出版时间:2013-07-11 11:32 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． R． 20130711． 1132． 002． html
猴耳环消炎胶囊收载于《卫生部药品标准》中
药成方制剂第 6 册(WS3—B—1249—92) ，具有清热
解毒、凉血消肿、止泻之功效，用于上呼吸道感染、急
性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性胃肠炎等症，为广东
粤北之民间验方。原标准中只有该制剂的通则检查
项及没食子酸的薄层鉴别项，无法全面控制制剂的
质量，因此笔者对猴耳环消炎胶囊进行含量测定方
法的研究。猴耳环消炎胶囊系猴耳环药材单方制
剂，其中没食子酸具抗菌、抗病毒、抗肿瘤功能［1］，
槲皮苷能降低血压、保护心肌缺血再灌注损伤，有抗
氧化、清除氧自由基、增强免疫功能及抗癌、抗菌、抗
病毒和镇痛等作用［2］;因此，本文选择没食子酸、槲
皮苷作为指标，建立其含量测定方法［3 － 4］，为该制剂
质量标准的完善奠定基础。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
LC-10AD 高效液相色谱仪(日本岛津公司，
SPD-M20A型 PDA 检测器、岛津色谱工作站) ;UV-
2450 紫外-可见分光光度计(日本岛津公司) ;ER-
182A电子天平(广州市艾安得仪器有限公司)、
HN006B台式超声波清洗器(广州市华南超声设备
有限公司)。
1． 2 试药
没食子酸对照品(批号:110831-200803)、槲皮苷
对照品(批号:111538-200403)均由中国药品生物制
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Aug． 2013，29(4)
品检定所提供;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，
水为重蒸馏水。供试品由广州市花城制药厂提供，批
号分别为:20100701、20101001、20101002、20101003、
20110901、20110902、20111001、20111002、20111003、
20111004，规格:0. 23 g /粒(含猴耳环干浸膏 0． 2 g)。
2 方法与结果
2． 1 混合对照品溶液的制备
分别取没食子酸、槲皮苷对照品适量，精密称
定，加甲醇制成每 1 mL 分别含没食子酸、槲皮苷
300、15 μg的混合对照品溶液，摇匀，即得。
2． 2 供试品溶液的制备
取本品 10 粒，倾出内容物，研细，取 0． 5 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈-0． 2%(体积
分数，下同)H3PO4(体积比 25 ∶ 75)50 mL，密塞，称
定质量，超声处理(功率 250 W，频率 33 kHz)20
min，放冷。再称定质量，用溶剂补足减失的质量，摇
匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 3 阴性对照溶液的制备
配制缺猴耳环的阴性样品，按照“2． 2”项下供
试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2． 4 色谱条件与系统适用性试验［5］
色谱柱为 Diamonsil C18柱(200 mm × 4． 6 mm，5
μm) ;以乙腈为流动相 A，以 0． 2% (体积分数)
H3PO4 为流动相 B，按表 1 条件梯度洗脱;没食子酸
检测波长为 270 nm［6］，槲皮苷检测波长为 350
nm［7］，流速:1． 0 mL /min，柱温:30 ℃。
表 1 梯度洗脱程序表
Table 1 Gradient elution program
t /min 流动相 A/% 流动相 B /%
0 ～ 15 5→25 95→75
15 ～ 25 25 75
25 ～ 27 25→30 75→70
27 ～ 40 30 70
分别精密吸取混合对照品、阴性对照、供试品
溶液(批号:20111001)10 μL，注入高效液相色谱
仪，按上述条件测定，记录色谱图。结果各峰分离
度好;阴性对照无干扰;理论板数按没食子酸峰计
应在 4 000 以上，按槲皮苷峰计应在 10 000 以上。
见图 1。
t/min
0 10 20 30 40 50
t/min
0 10 20 30 40 50
t/min
0 10 20 30 40 50
t/min
0 10 20 30 40 50
800
600
400
200
0
m
AU
5 000
4 000
3 000
2 000
1 000
0
50
40
30
20
10
0
200
150
100
50
0
1 2
A DCB
1．没食子酸峰(270 nm) ;2．槲皮苷峰(350 nm) ;A．没食子酸对照品(270 nm) ;B．槲皮苷对照品(350 nm) ;C．没食子酸供试
品;D．槲皮苷供试品。
图 1 对照品和供试品溶液的 HPLC图
Figure 1 HPLC of referecce and samples
2． 5 线性关系的考察
精密吸取混合对照品溶液(每 1 mL 分别含没
食子酸、槲皮苷 300、15 μg) ，分别精密吸取 2、4、8、
10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，按“2． 4”项下
色谱条件测定峰面积，以进样量(X)为横坐标，峰面
积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得没食子酸回归方
程为:Y = 5. 292 × 106X － 3． 007 × 105，r = 0． 999 4，
没食子酸在 0． 600 4 ～ 6． 004 μg 范围内线性良好;
槲皮苷回归方程为:Y = 2． 593 × 106X － 7． 514 × 103，
r = 0． 999 4，在 0． 031 ～0． 310 μg范围内线性良好。
2． 6 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，连续进样 6
次，按“2． 4”项下色谱条件测定峰面积。结果没食
子酸、槲皮苷峰面积的 RSD分别为 0． 99%、1． 12%，
表明仪器精密度良好。
2． 7 稳定性试验
取同一批(批号:20111001)猴耳环消炎胶囊，
按“2． 2”项下方法制备供试品溶液，分别在 0、4、8、
12、24、36、48 h精密吸取 10 μL注入液相色谱仪，按
“2． 4”项下色谱条件测定峰面积。结果没食子酸峰
面积 RSD 值为 0． 78%，槲皮苷峰面积 RSD 值为
0. 65%，表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2． 8 重复性试验
取同一批(批号:20111001)猴耳环消炎胶囊，
共 6 份，按“2． 2”项下方法制备供试品溶液，按
“2. 4”项下方法测定。没食子酸、槲皮苷质量分数
104第 4 期 李志强，等．猴耳环消炎胶囊中没食子酸、槲皮苷的含量测定
的 RSD值分别为 0． 58%、0． 62%，表明本方法重复
性良好。
2． 9 加样回收率试验
取已测定质量分数的同一批(批号:20111001)
猴耳环消炎胶囊，研细，取约 0． 25 g，精密称定，共 6
份，置具塞锥形瓶中。精密加入没食子酸对照品溶
液(6． 02 mg /mL)2 mL 与槲皮苷对照品溶液(0． 28
mg /mL)1 mL，再精密加入乙腈-0． 2% H3PO4(体积
比 25∶ 75)47 mL，按“2． 2”项下方法制备供试品溶
液。分别精密吸取对照品、供试品溶液各 10 μL，按
“2． 4”项下色谱条件测定，结果见表 2。结果表明没
食子酸和槲皮苷加样回收率均良好。
表 2 猴耳环消炎胶囊中没食子酸、槲皮苷加样回收率试验结果
Table 2 Recovery test results of gallic acid and quercetin in Houerhuan anti-inflammatory capsules(n = 6)
化合物 编号 样品量 /g 样品中的量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
没食子酸 1 0． 251 8 11． 774 5 12． 04 23． 74 99． 38
2 0． 254 2 11． 596 6 12． 04 23． 55 99． 28
3 0． 250 6 11． 432 4 12． 04 23． 61 101． 14
4 0． 255 9 11． 674 2 12． 04 23． 84 101． 04 100． 17 0． 82
5 0． 257 2 11． 733 5 12． 04 23． 74 99． 72
6 0． 253 3 11． 555 5 12． 04 23． 65 100． 45
槲皮苷 1 0． 251 8 0． 273 6 0． 28 0． 554 100． 14
2 0． 254 2 0． 269 5 0． 28 0． 549 99． 82
3 0． 250 6 0． 265 6 0． 28 0． 546 100． 14
4 0． 255 9 0． 271 3 0． 28 0． 551 99． 89 99． 82 0． 38
5 0． 257 2 0． 272 6 0． 28 0． 552 99． 79
6 0． 253 3 0． 268 5 0． 28 0． 546 99． 11
2． 10 供试品含量测定
分别取猴耳环消炎胶囊 10批，按“2． 2”项下方法
制备供试品溶液，按“2． 4”项下方法测定，分别计算样
品中没食子酸、槲皮苷的质量分数，结果见表 3。
表 3 10批猴耳环消炎胶囊没食子酸、槲皮苷质量分数的测定
Table 3 Determination of gallic acid and quercetin in 10
batches of Houerhuan anti-inflammatory capsules(n =3)
批
号
没食子酸
w /(mg·粒 － 1)RSD /%
槲皮苷
w /(mg·粒 － 1)RSD /%
20100701 8． 90 0． 62 0． 213 0． 54
20101001 8． 77 0． 69 0． 209 0． 60
20101002 9． 10 0． 52 0． 219 0． 57
20101003 8． 94 0． 79 0． 205 0． 61
20110901 9． 18 0． 66 0． 230 0． 74
20110902 10． 00 1． 2 0． 253 0． 85
20111001 11． 41 0． 68 0． 286 0． 60
20111002 10． 95 0． 24 0． 254 0． 67
20111003 9． 93 1． 26 0． 348 0． 68
20111004 11． 73 0． 44 0． 433 0． 50
3 讨论
分别选用乙腈-水(体积比 20∶ 80)、甲醇-水(体
积比 20∶ 80)、乙腈-不同体积分数 H3PO4 系统、乙
腈-磷酸盐缓冲液系统为流动相比较分离效果。结
果表明，以乙腈为流动相 A，0． 2% H3PO4 为流动相
B梯度洗脱时，供试品溶液中没食子酸峰和槲皮苷
峰达到基线分离，峰形对称，保留时间适中。
分别用相同体积的甲醇、乙腈-0． 2% H3PO4(体
积比 25∶ 75)、甲醇-乙腈-水(体积比 50 ∶ 14 ∶ 50)、乙
腈-磷酸盐缓冲液超声提取供试品，按上述色谱条件
分别测定供试品溶液中没食子酸、槲皮苷质量分数。
结果表明:用乙腈-0． 2%H3PO4(体积比 25∶ 75)作为
提取溶剂时，没食子酸质量分数最高，而槲皮苷质量
分数与其他 3 种方法比较差别不大，图谱中没食子
酸峰、槲皮苷峰的峰形、分离度好，因此选用乙腈-0．
2%H3PO4(体积比 25∶ 75)作为提取溶剂。
参考文献:
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(责任编辑:刘晓涵)
204 广东药学院学报 第 29 卷