全 文 ：★标准研讨★
青叶胆药材及饮片中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量测定＊
肖琳 ,贾娜 ,何姣 ,孙文基＊＊
(西北大学陕西省生物医药重点实验室 ,西安 710069)
摘要　目的:建立反相高效液相色谱法测定青叶胆药材及饮片中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量。方法:采用 DiamonsilC
18
色
谱柱(250 mm×4.6mm, 5 μm), 以甲醇 -水(23∶77)为流动相 ,流速 lmL· min-1 ,检测波长 242nm。结果:獐牙菜苦苷和龙胆
苦苷 2种成分均达到基线分离 ,线性范围分别为 30 ～ 300 μg· mL-1(r=0.9997)和 77.9 ～ 779 μg· mL-1(r=0.9999);药材中
2种成分的平均回收率为 103.3%(RSD=1.0%)和 97.1%(RSD=1.7%), 饮片中 2种成分的平均回收率为 98.5%(RSD=
1.9%)及 97.6%(RSD=1.5%)。结论:采用 RP-HPLC法同时测定青叶胆中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量 , 该方法简便 、快
速 、准确 ,为 2010年版中国药典一部增订青叶胆含量测定项做了研究。
关键词:青叶胆;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;反相高效液相色谱;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)05-0876-04
Contentdeterminationofswertiamarinandgentiopicroside
inSwertiamileensisT.N.HoetW.L.Shihanditscutcrudedrug＊
XIAOLin, JIANa, HEJiao, SUNWen-ji＊＊
(BiologyandMedicineKeyLaboratoryofShaanxiProvince, NorthwestUniversity, Xian710069, China)
Abstract Objective:Toestablishaquantitativemethodforsimultaneousdeterminationofswertiamarinandgenti-
opicrosideinSwertiamilensisanditscutcrudedrugbyRP-HPLC.Method:Thetwoconstituentswerebase-iso-
latedonthecolumnofDiamonsilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm), elutedwithmethanol-water(23∶77)ataflow
rateof1.0 mL·min-1.Thedetectionwavelengthwas242nm.Results:Twoconstituentswerebase-isolated, and
thelinearrangesofswertiamarinandgentiopicrosidewere30-300μg· mL-1(r=0.9997)and77.9-779 μg·
mL-1(r=0.9999);Theaveragerecoveries(n=6)ofthetwocomponentsinSwertiamileensiswere103.3%(RSD
=1.0%)and97.1%(RSD=1.7%), andtheaveragerecoveries(n=6)ofthetwocomponentsincutcrudedrug
were98.5%(RSD=1.9%)and97.6%(RSD=1.5%), respectively.Conclusions:TheapplicationofRP-HPLC
methodcansimultaneouslydeterminethecontentofswertiamarinandgentiopicrosideinSwertiamileensis.Themeth-
odisconvenient, rapidandreliable.ItcanoferreferencesforthequalitycontrolofSwertiamileensisT.N.Hoet
W.L.Shih.
Keywords:SwertiamileensisT.N.HoetW.L.Shih;swertiamarin;gentiopicroside;RP-HPLC;contentdetermination
青叶胆别名弥勒獐牙菜 、金鱼胆 、走胆药 ,为龙
胆科獐牙菜属植物青叶胆 SwertiamilensisT.N.Ho
etW.L.Shih的干燥全草 。主要分布于云南 、四
川 、贵州 、广东 、广西 、湖南 、福建等地 。全草入药 ,用
于黄疸 、尿赤 、热湿 、涩痛等症[ 1 ～ 4] 。
獐牙菜苦苷及龙胆苦苷是青叶胆中环烯醚萜苷
类的代表成分 ,具有解痉 、镇静的功效[ 5] 。中国药典
中青叶胆缺少含量测定项 ,药材内在质量难以评定 ,
本文建立了 RP-HPLC方法同时测定二者的含量 ,为
增加 2010版药典中青叶胆含量测定项进行了探讨。
—876— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(5)
＊
＊＊
中国药典 2010年版研究项目:国家药典中发 [ 2008] 99号
通讯作者　Tel:(029)88304569;E-mail:cxbml@nwu.edu.cn
1　仪器与试药
岛津 LC-VP系列高效液相色谱仪 ,配置:手动
进样器 、在线脱气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温箱 、
DAD检测器 ,岛津色谱工作站 ,色谱柱为 Diamonsil
C18柱(250mm×4.6 mm, 5 μm)。
对照品獐牙菜苦苷(批号 785-9001)、龙胆苦苷
(批号 770-9202)购自中国药品生物制品检定所。
青叶胆药材及饮片购自安徽省亳州市华申药业
有限公司 、云南千草源药业有限公司及云南省食品
药品检验所 ,经西北大学生命科学学院王亚洲教授
鉴定为龙胆科獐牙菜属植物青叶胆(Swertiamileen-
sisT.N.HoetW.L.Shih)。
所用甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有
限公司),水为高纯水(自制)。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1 　对照品混合溶液　精密称取对照品龙胆苦
苷和獐牙菜苦苷适量 ,加流动相配制成每 1 mL含龙
胆苦苷 0.779mg、獐牙菜苦苷 0.300 mg的混合溶液。
2.1.2　供试品溶液　取本品粉末 (过 60目筛)约
0.5g,精密称定 ,置于具塞的三角瓶中 ,精密加入甲
醇 20 mL,称定重量 , 超声 (500 W, 40 kHz)提取
0.5h,放置至室温 , 加甲醇至原重量 , 摇匀 , 放置 。
精密吸取上清液 10 mL, 蒸干 , 用流动相溶解 ,置
5 mL量瓶中 ,加流动相至刻度 ,摇匀 ,滤过 , 0.45μm
滤膜滤过 ,取滤液即得 。
2.2　色谱条件　色谱柱为 DiamonsilC18柱(250mm
×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -水(23∶77);流
速:1.0 mL· min-1;检测波长为 242 nm;柱温为
35 ℃;进样量为 20μL。在以上色谱条件下 ,獐牙菜
苦苷和龙胆苦苷能够与其他成分达到基线分离 ,二者
的分离度分别为 2及 2.3;理论塔板数以獐牙菜苦苷
峰计算为 3140,龙胆苦苷峰计算为 3518。见图 1。
2.3　方法学考察
2.3.1　线性关系考察　精密量取对照品混合溶液
(含龙胆苦苷 779 μg· mL-1 ,獐牙菜苦苷 300 μg·
mL-1)0.1, 0.4, 0.5, 0.6, 0.8, 1.0 mL,分别置于
1 mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀。取上述
溶液各 20μL,照上述色谱条件 ,进样测定 ,记录峰
面积 ,以峰面积积分值为纵坐标 ,对照品的浓度(μg
· mL-1)为横坐标 ,进行回归分析 ,得獐牙菜苦苷及
龙胆苦苷线性回归方程分别为:
Y=3.093×104X-7.135×104　　r=0.9998
Y=2.701×104X-1.944×105　　r=0.9999
图 1　混合对照品(A)、青叶胆 3号药材(B)、青叶胆 3号饮片(C)
色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofmixedreferencesubstances(A), medical
materialofNo.3(B)andcutcrudedrugofNo.3(C)
1.獐牙菜苦苷(swertiamarin)　2.龙胆苦苷(gentiopicroside)
线性范围分别为 30 ～ 300 μg· mL-1和 77.9 ～ 779
μg· mL-1。
2.3.2　精密度试验　取 “ 2.1.1”项下对照品混合
溶液 ,连续进样测定 6次 。结果獐牙菜苦苷 、龙胆苦
苷峰面积的 RSD(n=6)分别为 1.0%和 0.76% 。
2.3.3　稳定性试验　精密称取 3号药材及 3号饮
片粉末(过 60目筛),照 “ 2.1.2”项所述方法制备供
试品溶液 。分别于 0 , 5, 9, 12, 24, 48 h进样测定。
结果青叶胆药材中獐牙菜苦苷 、龙胆苦苷峰面积的
RSD(n=6)分别为 1.4%和 0.84%,饮片中獐牙菜
苦苷 、龙胆苦苷峰面积的 RSD(n=6)分别为 1.4%
和 1.3%。表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2.3.4　重复性试验　精密称取 6号药材及 6号饮
片粉末(过 60目筛)0.5 g各 6份 ,按 “2.1.2”项下
方法制备供试品溶液。药材中獐牙菜苦苷 、龙胆苦
苷含量平均值(n=6)分别为 0.117%及 0.389%;
其 RSD分别为 2.7%和 1.3%。饮片中獐牙菜苦
苷 、龙胆苦苷含量平均值(n=6)分别为 0.101%及
0.382%;其 RSD分别为 1.2%和 1.3%。
2.3.5　加样回收率试验 　精密称取已测知含量
(獐牙菜苦苷 0.117%,龙胆苦苷 0.389%)的 6号药
材粉末(过 60目筛)0.25 g共 6份 ,向其中分别添
加对照品獐牙菜苦苷 0.30mg和龙胆苦苷 0.97mg。
按 “ 2.1.2”项下方法制备溶液 ,在 “2.2”项色谱条件
下进样测定 ,测得上述 2种成分平均回收率(n=6)分
别为 103.3%和 97.1%, RSD分别为 1.0%和 1.7%。
—877—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(5)
精密称取已测知含量(獐牙菜苦苷 0.101%,龙
胆苦苷 0.382%)的 6号饮片粉末 (过 60目筛 )
0.25g共 6份 ,向其中分别添加对照品獐牙菜苦苷
0.25mg和龙胆苦苷 0.96mg。按 “2.1.2”项下方法
制备溶液 ,在 “2.2”项色谱条件下进样测定 ,测得上
述 2种成分平均回收率 (n=6)分别为 98.5%和
97.6%, RSD分别为 1.9%和 1.5%。
2.4　药材及饮片的测定
2.4.1　药材的测定　按 “2.1.2”项下方法制备 1 ～
10号药材的供试品溶液。由于 11 ～ 14号药材中獐
牙菜苦苷含量较大 ,龙胆苦苷含量甚微 ,故将供试品
溶液浓度稀释 40倍 ,具体方法为:取 11 ～ 14号药材
按 “2.1.2”项下方法操作 ,制得超声后的上清液 ,精
密吸取 0.5 mL,置 10mL量瓶中 ,加流动相至刻度 ,
摇匀 ,滤过 ,即得。将制得的各供试品溶液在上述色
谱条件下进样 20 μL,以外标两点法分别计算样品
中 2种成分的含量 ,结果见表 1。
表 1　药材中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量测定结果(%, n=2)
Tab1 Determinationresultsofmedicalmaterial
供样单位
(sources)
产地
(placeofproduction)
样品编号
(sampleNo.)
獐牙菜苦苷
(swertiamarin)
龙胆苦苷
(gentiopicroside)
华申药业有限公司 (ChinaShanghai
PharmaceuticalIndustryLimitedCompa-
ny)
安徽(Anhui) 1 0.091 0.349
贵州(Guizhou) 2 0.106 0.296
福建(Fujian) 3 0.123 0.373
四川(Sichuan) 4 0.109 0.382
浙江(Zhejiang) 5 0.091 0.326
山东(Shandong) 6 0.110 0.397
广东(Guangdong) 7 0.111 0.348
湖南(Hunan) 8 0.102 0.326
广西(Guangxi) 9 0.106 0.327
云南(Yunnan) 10 0.112 0.388
云南千草源药业有限公司(Yunnan
ThousandGrassSourcePharmaceutical
IndustryLimitedCompany)
云南(Yunnan) 11 13.137 —
云南(Yunnan) 12 11.635 —
云南(Yunnan) 13 6.112 —
云南省食品药品检验所(YunnanInsti-
tuteforFoodandDrugControl)
云南(Yunnan) 14 5.155 —
2.4.2　饮片的测定 按 “2.1.2”项下方法制备 1 ～
8号饮片的供试品溶液 。由于 9号及 10号饮片中
獐牙菜苦苷含量较大 ,龙胆苦苷含量甚微 ,故将供试
品溶液浓度稀释 40倍 ,具体方法为:取 9号及 10号
饮片按 “2.1.2”项下方法操作 ,制得超声后的上清
液 ,精密吸取 0.5mL,置 10 mL量瓶中 ,加流动相至
刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得。将制得的各供试品溶液在
上述色谱条件下进样 20 μL,以外标两点法分别计
算样品 2种成分的含量 ,结果见表 2。
3　讨论
3.1　检测波长的考察 本实验采用紫外可见分光
光度仪对獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的甲醇溶液扫描 ,
獐牙菜苦苷的最大吸收波长为 236 nm,龙胆苦苷的
最大吸收波长为 270 nm和 254 nm。考虑到同时测
定二者 , 用二极管阵列检测器 ,试用了 236, 240,
242, 243, 245 , 254, 270nm等一系列波长检测 ,结果
表明 242nm较为合适 ,既适用于测定獐牙菜苦苷 ,
也适用于测定龙胆苦苷 。故确定 242 nm作为本实
验的检测波长 。
3.2　流动相的选择 本实验考察了甲醇与水不同
比例(20∶80;23∶77;25∶75)条件下的样品中獐牙菜
苦苷和龙胆苦苷与其他成分的分离情况 ,在 23∶77
的比例条件下 ,獐牙菜苦苷和龙胆苦苷峰形较窄 ,出
峰时间较为适宜 ,能够与样品中的其他成分分开 ,而
且实验操作简单 、方便。故确定甲醇 -水(23∶77)
作为本实验的流动相。
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表 2　饮片中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量测定结果(%, n=2)
Tab2　Determinationresultsofcutcrudedrug
供样单位(sources) 产地(placeofproduction)
样品编号
(sampleNo.)
獐牙菜苦苷
(swertiamarin)
龙胆苦苷
(gentiopicroside)
华申药业有限公司 (ChinaShanghai
PharmaceuticalIndustryLimitedCompa-
ny)
安徽(Anhui) 1 0.082 0.401
贵州(Guizhou) 2 0.136 0.378
福建(Fujian) 3 0.110 0.415
四川(Sichuan) 4 0.117 0.435
浙江(Zhejiang) 5 0.115 0.415
山东(Shandong) 6 0.100 0.389
广东(Guangdong) 7 0.135 0.455
云南(Yunnan) 8 0.113 0.393
云南千草源药业有限公司(Yunnan
ThousandGrassSourcePharmaceutical
IndustryLimitedCompany)
云南(Yunnan) 9 11.841 —
云南(Yunnan) 10 5.013 —
3.3　样品提取方法的研究 样品提取时常采用的
方法有回流提取法 、超声提取法 ,对于这 2种方法对
中药材成分是否产生影响 ,尚未见文献报道 ,但超声
提取法方法简单 ,所需时间较短 ,且易于操作 ,故采
用超声提取法[ 3] 。此外 ,本实验依次考察了不同浓
度的甲醇和乙醇分别超声提取 10, 20 , 30, 40, 60,
90 min对獐牙菜苦苷和龙胆苦苷 2种成分含量的影
响 。结果表明采用 100%甲醇较其他溶剂效率更
高 ,且提取 30 min时 2种成分基本提取完全。
3.4　结果分析
3.4.1　含量差异的分析 本文测定了 14批青叶胆
药材及 10批青叶胆饮片中獐牙菜苦苷与龙胆苦苷
的含量 。由表 1及表 2的测定结果可知 ,不同产地
的青叶胆药材及饮片中 2种成分的含量差异明显 。
部分药材及饮片中龙胆苦苷含量甚微 ,低于检测限 ,
并未检出。由此可见 ,药材及饮片的含量差异与其
产地及生长环境等因素密切相关。
3.4.2 含量限度的确立 综合上述测定结果考
虑 ,以干燥品计算 ,药材及饮片含量限度的确立均按
獐牙菜苦苷加龙胆苦苷含量之和不低于 0.3%,獐
牙菜苦苷含量不低于 0.1%为宜。以上数据可为增
加 2010年版中国药典中青叶胆含量限度提供参考
依据。
3.5　小结 采用高效液相色谱法测定青叶胆中獐
牙菜苦苷和龙胆苦苷含量 ,经过精密度 、回收率试验
等系统方法学的考察 ,均符合要求 ,该方法灵敏 、快
速 、准确 ,作为新增中国药典中青叶胆含量测定项较
为合适。
致谢:云南省食品药品检验所中药室明全忠主任为本
实验提供部分样品 ,特此致谢。
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(本文于 2008年 9月 1日收到)
—879—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(5)