全 文 ：Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第17卷 第6期
Vol.17 No. 6
2011年 6月
June.2011
HPLC法测定地锦草灌肠液中没食子酸的含量
佘永红1，周 顺2
（1.湘西自治州药品检验所，湖南 吉首 416000；2.湘西自治州民族中医院，湖南 吉首 416000）
[摘要] 目的：建立地锦草灌肠液中没食子酸的含量测定。方法：采用HPLC法，色谱柱为BDS Hypersil C18（250 mm×4.6
mm，5μm）；流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（10∶90）；流速为0.8 mL·min-1；检测波长为266 nm；柱温为室温，进样量为10 μL。结
果：没食子酸在0.07116-0.49812 μg范围内呈良好的线形关系（r=0.9998），平均回收率为100.7%，RSD%为1.1%（n=6）。结论：该
方法简便，准确，重现性好，可用于地锦草灌肠液的质量控制。
[关键词] 地锦草灌肠液；HPLC法；没食子酸；含量测定
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2011）06-0093-02
Determination of grass enema Verbena gallic acid in by HPLC
She YongHong1，Zhou Shun2
(1.Xiangxi Drug Inspection Jishou，Hunan 416000；
2.Xiangxi National Traditional Chinese Medicine Hospital, Jishou，Hunan，416000)
[Abstract] Objective：To establish a creeper grass enema Determination of gallic acid ． Methods：HPLC，column was BDS
Hypersil C18（25 mm×4.6 mm，5 μm）, mobile phase of methanol-0.05% phosphoric acid water(10:90), flow rate of 0.8 mL·min-1,
the detection wavelength was 266 nm, column temperature was room temperature, the injection volume was 10 μL．Results：Gal－
lic acid in the range of 0.07116-0.49812 μg showed a good linear relationship (r=0．9998)，the average recovery was100.7%，
RSD% was 1.1% (n=6)．Conclusion：The method is simple, accurate, reproducible，and can be used for Euphorbia humifusa
enema quality control．
[Key words] Creeper grass enema；HPLC；Gallic acid；Content determination
地锦草灌肠液为湘西自治州民族中医院自制的医院制
剂，处方由地锦草、苦参、地榆、三棵针等6味中药组成。临床
上用于慢性结肠炎的治疗。方中君药地锦草清热解毒、凉血
止血、利胆退黄。用于痢疾、泄泻、咯血、尿血、便血、崩漏、疮
疖痈肿，湿热黄疸[1]。地锦草含有黄酮、鞣质等，其中已知的有
效成分为没食子酸和槲皮素等[2]。地榆为方中臣药，具有凉血
止血，解毒敛疮的功能，用于便血、痔血、血痢、崩漏、水火烫
伤、痈肿疮毒[1]。地榆主要有效成分为鞣质[3]，鞣质中含有游离
的没食子酸和并没食子酸[4]。经研究，没食子酸具有抗菌抗病
毒及抗肿瘤的作用 [5]。为了有效的控制药品质量，笔者采用
HPLC法测定制剂中活性有效成分没食子酸的含量。现报告
如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10ATvp 液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测
器，10 μL定样环，WDL-95色谱工作站，AB135-S电子天平，
UV-2550紫外-可见分光度计。
1.2 试药 没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批
号：110831-200803，供含量测定用，按C7H6O5为90.1%计，使用
前无需处理）。甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试药均为
分析纯。
1.3 样品 地锦草灌肠液（湘西州民族中医院提供，批号：
20101101、20101105、20101116）；阴性对照药材自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，
5μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（10∶90）；流速0.8 mL·min-1；
检测波长：266 nm；柱温：室温；进样量：10 μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品17.79mg，置
50mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度（0.3558 mg·mL-1），
摇匀，作为对照品浓溶液。精密吸取对照品浓溶液10 mL，至
50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，得到浓度为0.07116 mg·mL-1
的对照品储备液。精密吸取对照品浓溶液1 mL，至20 mL量瓶
中，加水稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含17.79 μg的对照品
溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品2 mL，置50 mL量瓶
中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备 取除地锦草、地榆外的其他处
方量饮片，按制备工艺方法制备成缺地锦草、地榆饮片阴性
样品，按上述供试品溶液制备项下的方法制成阴性样品溶
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2011.06.040
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June.2011Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
A-对照品 B-供试品 C-阴性对照品
图1 地锦草灌肠液没食子酸HPLC色谱图
液。
2.5 系统适应性试验 按上述色谱条件测定，峰与其他峰分
离度大于1.5，理论板数均在12000以上。供试品色谱中，在与对
照品色谱峰相应的位置上检出色谱峰，阴性样品在与对照品色
谱峰相应的位置上无色谱峰，说明阴性样品无干扰。（见图1）
2.6 线形关系考察 分别精密吸取浓度为0.07116 mg·mL-1
没食子酸对照品储备液1、2、3、4、5、7 mL，至10 mL量瓶中，加
流动相稀释至刻度，制成 0.007116、0.014232、0.021348、
0.028464、0.035580、0.049812 mg·mL-1的溶液，进样量10 μL，
按上述色谱条件注入液相色谱仪中，以峰面积Y对进样量X做
线形回归，回归方程为Y=21418.571+2954729.784X，r=0.9998。
结果表明：没食子酸在0.07116-0.49812 μg范围内呈良好的
线形关系。
2.7 精密度实验 取同一浓度没食子酸对照品溶液，连续进
样6次，峰面积的RSD%为0.34%。
2.8 重复性实验 取同一批号样品6份（批号：20101101），分
别按样品测定法测定。测定含量分别为0.4064、0.4096、0.4086、
0.4069、0.4109、0.4112 mg·mL-1，平均含量为0.4089 mg·mL-1，
RSD%为0.50%。
2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、1、2、4、8、12 h，
共进样6次，峰面积积分值RSD%=1.2%，表明供试品溶液在12 h
内基本稳定。
2.10 加样回收率实验 分别精密吸取供试品溶液（0.4089
mg·mL-1）1 mL至50 mL量瓶中，精密加入对照品溶液（0.3558
mg·mL-1）1 mL，按供试品溶液的方法制备，即得。以上述色谱
条件测定，结果没食子酸平均回收率为100.7%，RSD%为1.1%
（n=6）。（见表1）
表1 加样回收率试验
序号 取样量 样品含量 加入对照 测得量 回收率 平均回 RSD
(mL) (mg) 品量(mg) (mg) (%) 收率(%) (%)
1 1 0.4089 0.3558 0.7641 99.8
2 1 0.4089 0.3558 0.7690 101.2
3 1 0.4089 0.3558 0.7653 100.2
4 1 0.4089 0.3558 0.7743 102.7 100.7 1.1
5 1 0.4089 0.3558 0.7643 99.9
6 1 0.4089 0.3558 0.7658 100.3
2.11 样品测定 分别精密吸取3批供试品溶液各10 μL，注
入液相色谱仪，测定，以外标法计算含量。（见表2）
表2 样品的含量测定结果
批号 1 2 3 4 5 x±s(mg) RSD(%)
20101101 0.4064 0.4096 0.4086 0.4069 0.4109 0.4085±0.002 0.46
20101105 0.3865 0.3884 0.3976 0.4003 0.3991 0.3944±0.006 1.7
20101116 0.3624 0.3621 0.3671 0.3630 0.3681 0.3645±0.003 0.78
3 讨 论
3.1 检测波长的选择 取没食子酸对照品适量，加水制成一
定浓度的水溶液，以水为空白，按紫外分光光度法在220 nm-
300 nm波长范围内扫描，最大波长为266 nm，故选择266 nm
作为测定波长。
3.2 流动相的选择 比较甲醇-0.05%磷酸溶液（10∶90）、甲
醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）及甲醇-0.5%磷酸溶液（10∶90），检测
时色谱峰峰形都很好，选择含较低浓度的0.05%磷酸溶液。比
较甲醇-0.05%磷酸溶液（5∶95）、甲醇-0.05%磷酸溶液（8∶92）及
甲醇-0.05%磷酸溶液（10∶90），由于C18链在水相环境中不易保
持伸展状态，C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化[7]，检测
过程中发现前两种组分比列的流动相检测时间长了色谱系统
不够稳定，故选择甲醇-0.05%磷酸溶液（10∶90）为流动相。
3.3 溶剂的选择 比较甲醇、50%甲醇、水，以甲醇作为溶剂
检测时，色谱峰峰形不好，以50%甲醇、水为溶剂检测时，色谱
峰峰形都很好，考虑水为溶剂经济环保，故选择水作为溶剂。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技
出版社，2010:117-118，附录36
[2] 朱英.地锦草的研究进展[J].现代中药研究与实践，2003,17
(5):62
[3] 江苏新医学院．中华大辞典[M]．上册．上海：上海科学技术
出版社，1986：807
[4] 邓虎占,董泽宏,佘靖．中药现代研究与应用[M]．第二卷．北
京：学苑出版社,1997:1775-1776
[5] 国家医药管理局中草药情报中心站．植物药有效成分手册
[M]．北京:人民卫生出版社,1986：479
（收稿日期：2011-03-10 编辑：李海洋）
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