全 文 ：HPLC法测定壮药铁包金中大黄素、大黄酚的
含量
徐煜纯1，谢明容1，刘少烽1，董雷2，严寒静3，高晓霞1
(1．广东药学院 药科学院，广东 广州 510006;2． 北京汇诚瑞祥医药技术有限公司，北京
101111;3．广东药学院 中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定壮药铁包金中大黄素、大黄酚的含量。方法 采用 Diamonsil C18柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-0． 4%(体积分数)H3PO4(体积比 75∶ 25) ，流速为 1． 0
mL /min，柱温为 28 ℃，检测波长为 254 nm。结果 铁包金中大黄素和大黄酚分别在 1． 4 ～ 14 μg /mL(r =
0. 999 6)和 6 ～ 60 μg /mL(r = 0． 999 0)范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为 99． 2%、95． 8%，
ＲSD值分别为 2． 0%、2． 3%。结论 首次对铁包金药材中蒽醌类成分进行了含量测定，所建立的方法分
离度高、方法学验证符合要求，可用于同时测定壮药铁包金中大黄素和大黄酚的质量分数。
关键词:铁包金;HPLC法;大黄素;大黄酚;含量测定
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2014． 02． 011
文章编号:1006-8783(2014)02-0169-04
Determination of emodin and chrysophanol in Zhuang medicine Berchemia lineata by
HPLC
XU Yuchun1，XIE Mingrong1，LIU Shaofeng1，DONG Lei2，YAN Hanjing3，GAO Xiaoxia1
(1． School of Pharmaceutical Sciences，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China;
2． Beijing Novelpharm Consulting Company Limited，Beijing 101111，China;3． School of Traditional
Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determinations of emodin and
chrysophanol in Berchemia lineata． Methods Diamonsil C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)was used as
stationary phase． Mobile phase was methanol-0． 4% phosphoric acid (75∶ 25)with the flow rate of 1． 0 mL /
min． The column temperature was 28 ℃． The detection wavelength was 254 nm． Ｒesults The linearity was
good in the range of 1． 4 －14 μg /mL of emodin(r =0． 999 6)and in the range of 6-60 μg /mL(r =0. 999 0)
of chrysophanol． The average recovery of emodin and chrysophanol was 99. 2% with ＲSD 2． 0% and
95. 8% with ＲSD 2. 3% (n = 6) ，respectively． Conclusion The contents of emodin and chrysophanol in
Zhuang medicine B． lineata were measured for the first time． The established method can be used for the
determination of emodin and chrysophanol in B． lineata simultaneously．
Key words:Berchemia lineata;HPLC;emodin;chrysophanol;assay
收稿日期:2014-01-08
作者简介:徐煜纯(1992—) ，女，药学(创新实验班)2010 级本科生，Email:1163691587@ qq． com;通信作者:高晓霞(1972—) ，
女，博士，副教授，从事中药质量控制研究，Email:gaoxxia91@ 163． com。
网络出版时间:2014-03-28 16:44 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． Ｒ． 20140328． 1644． 007． html
铁包金为广西壮族自治区和西南少数民族地区
常用的民族药［1］，具有止血止痛、化痰镇咳、散瘀消
滞、祛风湿、消肿毒等功效，用于肿瘤、黄疸型肝炎、
肺结核咯血、消化道出血、风湿骨痛、跌打损伤等症;
外用于外伤出血、烫伤、毒蛇咬伤等［2-5］。《中药大
辞典》收载的铁包金为细叶勾儿茶 Berchemia lineata
(L．)DC．的茎藤或根［3］;《中华本草》中对于铁包
金的定义为鼠李科植物铁包金(细叶勾儿茶)及光
枝勾儿茶 B． polyphylla Wall． ex Lawson 的茎藤或
根［6］;《广西中药材标准(1990)》则将铁包金药用种
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Apr． 2014，30(2)
只定为老鼠耳(细叶勾儿茶)的干燥根［2］。目前广
东市售铁包金药材除了来自该植物以外，同属植物
多花勾儿茶 B． floribunda(Wall．)Brongn． 的根和茎
也做铁包金使用;藤红丽等［7］调查发现广西地区多
采用同属植物的根、茎一起入药。勾儿茶属植物茎
发达，根部深埋地下不易采集，市场上出现了以茎部
替代根部成为主要药用部位的现象。且细叶勾儿茶
自然资源日渐减少，以多花勾儿茶代替细叶勾儿茶
的现象越来越普遍。
铁包金中主要含有黄酮类、苯酚类、蒽醌类、萜
类、木脂素类等成分［1］，其中蒽醌类成分中的大黄
素和大黄酚等具有清除氧自由基的作用，且对 D2
半乳糖胺诱导的 WB-F344 大鼠肝表皮细胞毒性有
保护作用，是铁包金发挥抗肿瘤、黄疸型肝炎、肺结
核咯血等治疗作用的有效成分之一［8］。本文采用
HPLC 法首次测定铁包金中大黄素、大黄酚的质量
分数，并初步探讨细叶勾儿茶及其混用品多花勾儿
茶的茎、根蒽醌类成分的质量分数及其差别，为有效
控制铁包金的质量、更好地开发铁包金的药用价值
提供参考依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
Shimadzu SCL-10AVP 高效液相色谱仪;AB204-
N 电子分析天平(Mettler Toledo) ;KQ-500DE 型超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药
大黄酚对照品(批号:110796-201017)、大黄素
对照品(批号:110796-201017)购自中国食品药品检
定研究院。甲醇为色谱纯(德国 Merck 公司) ，其余
试剂均为国产分析纯。
1． 3 样品采集
铁包金药材由广东药学院严寒静副教授鉴定
为鼠李科勾儿茶属植物细叶勾儿茶 B． lineata 和多
花勾儿茶 B． floribunda 的干燥根或茎，具体信息见
表 1。
表 1 细叶勾儿茶和多花勾儿茶根、茎来源
Table 1 Origins of the roots and stems of B． lineata and B． floribunda
样品编号 样品 采集地 采集时间 样品编号 样品 采集地 采集时间
1 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 9 月 9 多花勾儿茶茎 广东肇庆 2011 年 12 月
2 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 9 月 10 多花勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 9 月
3 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 9 月 11 多花勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 9 月
4 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 11 月 12 多花勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月
5 细叶勾儿茶茎 广东番禺 2011 年 11 月 13 多花勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月
6 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月 14 多花勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月
7 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月 15 多花勾儿茶根 广东番禺 2011 年 1 月
8 细叶勾儿茶根 广东番禺 2011 年 9 月 16 多花勾儿茶根 广东番禺 2011 年 1 月
17 多花勾儿茶根 广东肇庆 2011 年 1 月
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5
μm);流动相为甲醇-0． 4%(体积分数)H3PO4 水溶
液(体积比 75 ∶ 25) ;流速:1． 0 mL /min;检测波长:
254 nm;进样量:20 μL;柱温:28 ℃;分析时间为 45
min，大黄素与大黄酚的理论塔板数均不低于 3 000，
与相邻组分的分离度均大于 1． 5。结果见图 1。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 供试品溶液的制备 取铁包金粉末(过 4 号
筛)约 1． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
甲醇 50 mL，称定质量，加热回流 1 h，取出，放冷，再
称定质量。用甲醇补足减失的质量，摇匀、滤过，置
具塞锥形瓶中，水浴蒸干，精密加 8% (体积分数，
下同)HCl溶液 25 mL，超声处理(功率 200 W，频率
40 kHz)5 min，加三氯甲烷 20 mL，水浴中加热回流 1
h，取出，立即冷却。置分液漏斗中，用少量三氯甲烷
洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，
酸液再用三氯甲烷振摇提取 3 次，每次 15 mL，合并
三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解。转
移至 5 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用 0． 45
μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2． 2． 2 混合对照品溶液的制备 分别精密称取大
黄素和大黄酚对照品适量，用甲醇配制成大黄素、大
黄酚质量浓度分别为 0． 14、0． 48 mg /mL 的对照品
储备液。分别精密量取大黄素和大黄酚对照品储备
液适量，用甲醇制成每 1 mL中含大黄素 0． 028 mg、
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大黄酚 0． 12 mg的混合对照品溶液。
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1．大黄素;2．大黄酚。
图 1 空白溶剂 (A)、对照品溶液(B)与 1 号铁包金供试品
溶液(C)的 HPLC色谱图
Figure 1 HPLC chromatograms of blank solvent (A) ，reference
substances (B)and B． lineata (sample 1，C)
2． 3 线性关系的考察
分别精密量取混合对照品溶液 0． 5、1． 0、2． 0、
4. 0、5． 0 mL，分别置于 10 mL量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，得到系列质量浓度的混合对照品溶液。按
“2. 1”项下色谱条件测定，以对照品峰面积(A)对质
量浓度(ρ)进行线性回归，得到回归方程及线性范
围。大黄素的回归方程为 A = 5． 4 × 107ρ-2． 460 7 ×
104(r = 0． 999 6) ，大黄素在 1． 4 ～ 14 μg /mL 范围内
线性关系良好;大黄酚的回归方程为 A =5． 0 ×107ρ +
4． 198 2 ×104(r = 0． 999 0) ，大黄酚在 6 ～ 60 μg /mL
范围内线性关系良好。
2． 4 精密度试验
分别精密吸取“2． 2． 2”项下大黄素和大黄酚对
照品储备液适量，加甲醇制成适宜质量浓度的混合
对照品溶液(大黄素 5． 6 μg /mL、大黄酚 24 μg /mL) ，
按“2． 1”项下色谱条件连续进样 5 次，大黄素及大
黄酚峰面积 ＲSD 分别为 2． 1%和 2． 0%(n = 5) ，表
明仪器的精密度良好。
2． 5 重复性试验
取同一批(1 号)铁包金样品，按“2． 2． 1”项下
方法平行制备 6 份供试品溶液，按“2． 1”项下色谱
条件测定，记录峰面积。结果大黄素和大黄酚的平
均质量分数分别为 0． 035 1、0． 151 9 mg /g，ＲSD 分
别为 2. 3%和 2． 4%，表明该方法重复性良好。
2． 6 稳定性试验
取铁包金粉末(1 号) ，按“2． 2． 1”项下方法制
备供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、12、24、48 h 进
样，记录峰面积。计算大黄素、大黄酚的质量分数，
其 ＲSD值分别为 1． 9%和 1． 6%，表明供试品溶液在
48 h内稳定性良好。
2． 7 加样回收率试验
取已知质量分数铁包金样品(1 号)6 份，每份约
0． 75 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入混合
对照品溶液(大黄素 5． 6 μg /mL、大黄酚 24 μg /mL)5．
00 mL，按“2． 2． 1”项下方法制备供试品溶液，按“2．
1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表 2。
2． 8 样品测定
取各批号铁包金样品，按“2． 2． 1”项下方法制备供
试品溶液。按“2． 1”项下色谱条件测定，计算各样品中
大黄素、大黄酚与总蒽醌的质量分数，结果见表 3。
表 2 铁包金中大黄素、大黄酚加样回收率试验结果
Table 2 Ｒecovery test results of emodin and chrysophanol in B． lineata(n = 6)
化合物 取样量 /g 样品中的量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
大黄素 0． 790 0 0． 027 7 0． 028 0 0． 054 8 96． 8 99． 2 2． 0
0． 783 0 0． 027 4 0． 028 0 0． 054 5 96． 8
0． 778 0 0． 027 3 0． 028 0 0． 055 2 99． 6
0． 763 1 0． 026 8 0． 028 0 0． 055 0 100． 7
0． 787 9 0． 027 7 0． 028 0 0． 056 0 101． 1
0． 788 1 0． 027 7 0． 028 0 0． 055 7 100． 0
大黄酚 0． 790 0 0． 120 0 0． 120 0 0． 235 9 96． 6 95． 8 2． 3
0． 783 0 0． 118 9 0． 120 0 0． 229 2 91． 9
0． 778 0 0． 118 2 0． 120 0 0． 232 4 95． 2
0． 763 1 0． 115 9 0． 120 0 0． 233 8 98． 2
0． 787 9 0． 119 7 0． 120 0 0． 236 4 97． 2
0． 788 1 0． 119 7 0． 120 0 0． 234 4 95． 6
171第 2 期 徐煜纯，等． HPLC法测定壮药铁包金中大黄素、大黄酚的含量
表 3 铁包金药材中大黄素、大黄酚与总蒽醌的质量分数
Table 3 Determination results of emodin and chrysophanol in B． lineata w /(mg·g －1)
样品编号 大黄素 大黄酚 总蒽醌 珋x ± s
细叶勾儿茶茎 1 0． 035 1 0． 151 9 0． 187 0 0． 150 0 ± 0． 023 6*
2 0． 026 4 0． 121 1 0． 147 5
3 0． 028 3 0． 093 0 0． 121 3
4 0． 031 4 0． 113 3 0． 144 7
5 0． 078 0 0． 071 8 0． 149 7
细叶勾儿茶根 6 0． 085 0 0． 069 5 0． 154 5 0． 096 2 ± 0． 050 6*
7 0． 035 6 0． 034 0 0． 069 6
8 0． 037 7 0． 031 7 0． 064 7
多花勾儿茶茎 9 0． 024 5 0． 134 5 0． 159 1 0． 117 2 ± 0． 036 8
10 0． 000 0 0． 090 3 0． 090 3
11 0． 048 7 0． 053 5 0． 102 2
多花勾儿茶根 12 0． 057 0 0． 049 6 0． 106 7 0． 091 6 ± 0． 020 9
13 0． 042 9 0． 039 7 0． 082 6
14 0． 054 0 0． 038 9 0． 092 9
15 0． 024 4 0． 029 8 0． 054 2
16 0． 058 8 0． 051 5 0． 110 3
17 0． 049 0 0． 053 7 0． 102 6
注:* 表示组均值间差异有统计学意义(P ＜ 0． 05)。
3 讨论
分别考察了甲醇-HCl(体积比 4∶ 1)超声 40 min、
甲醇-HCl(体积比 4∶ 1)回流 1 h、甲醇加热回流 1 h
再用三氯甲烷萃取等提取方法提取蒽醌类成分的提
取效率。结果表明，采用甲醇加热回流 1 h 再用三氯
甲烷萃取的方法提取效率最高。还分别考察了甲醇-
0． 1%(体积分数)H3PO4(体积比 80∶ 20)、甲醇-0. 4%
(体积分数)H3PO4(体积比 80∶ 20)、甲醇-0. 4%(体积
分数)H3PO4(体积比 75∶ 25)等流动相系统的分离效
果。结果表明，采用甲醇-0． 4%(体积分数)H3PO4
(体积比 75∶ 25)作为流动相能使大黄素、大黄酚与
杂质峰有效分离，且峰形较好、出峰时间较短，因此
选择甲醇-0. 4%(体积分数)H3PO4(体积比 75∶ 25)
作为流动相。
本试验所选的铁包金茎、根中蒽醌类成分质量
分数经组间均值方差分析表明，多花勾儿茶的茎、根
中蒽醌类成分质量分数差异无统计学意义;细叶勾
儿茶茎、根中蒽醌类成分的质量分数差异有统计学
意义(P ＜ 0． 05) ，在茎中的质量分数高于根，约为根
相应值的 1． 6 倍，且根中蒽醌类成分质量分数波动
较大，故认为细叶勾儿茶茎、根混用入药时需考虑适
当调整用量。
分别比较细叶勾儿茶和多花勾儿茶茎中蒽醌类
成分，以及二者根中蒽醌类成分的平均质量分数。
结果显示，二者茎中蒽醌类成分的质量分数差异无
统计学意义，根中蒽醌类成分质量分数差异也无统
计学意义。被测细叶勾儿茶和多花勾儿茶茎中总蒽
醌质量分数均超过 0． 09 mg /g，根则均不低于 0． 05
mg /g。细叶勾儿茶和多花勾儿茶均为铁包金民间
习惯用品，随着细叶勾儿茶药材资源的日渐减少，多
花勾儿茶作为铁包金药用资源的开发和利用是下一
步工作关注的重点。
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