全 文 ：余甘子提取物对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用研究
张志毕1，张媛 1，于浩飞 2，胡炜彦 2，张兰春 3，杨晖 1,*,张荣平 1,2,*
（1.昆明医科大学生物医学工程研究中心，云南昆明 650500；
2.昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南昆明 650500；
3.昆明医科大学实验动物学部，云南昆明，650500）
摘 要：研究余甘子提取物（extractum phyllanthus emblica，EPE）对小鼠急性酒精肝损伤的预防保护
作用和机制。方法：60 只雄性小鼠随机分为空白组、模型组、药物对照组(美他多辛胶囊-欣立得，
200mg/kg·d)和 EPE 高、中、低剂量组（400、160、800 mg/kg·d），灌胃给药 30d，末次给药后 1h 灌
胃 56%乙醇造急性酒精肝损伤模型。12h 后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油
三酯（TG）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白介素 6（IL-6）、白介素 10（IL-10）浓度，检测肝脏丙二
醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、乙醇脱氢酶（ADH）含量，
实时荧光定量 PCR（real time PCR）检测肝脏脂肪酸合成酶（FAS）、脂肪分化相关蛋白（ADRP）、
细胞色素 P450 2E1（CYP2E1）、过氧化酶体增殖激活 α 受体（PPARα）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3
（Caspase3）mRNA 的表达，HE 染色观察肝脏组织病理变化。结果表明：EPE 能显著降低小鼠血清
ALT、AST、TG 浓度，减轻肝脏病理损伤；EPE 显著提高肝脏乙醇代谢酶 ADH、CAT 活性，下调
CYP2E1 mRNA 表达水平，缩短小鼠醒酒时间；EPE 显著下调脂肪酸合成酶 FAS 和转运酶 ADRP 基
因表达，抑制脂肪酸合成和向肝脏转运；EPE 显著提高肝脏抗氧化酶 SOD、GSH-Px 活性，降低 MDA
浓度，发挥抗氧化活性保护肝脏损伤；EPE 显著降低炎性因子 TNF-α 和 IL-6 浓度，减轻肝脏炎症损
伤，但对 IL-10 浓度没有显著影响；EPE 显著下调 Casepase3 基因表达，降低肝脏细胞凋亡水平；EPE
显著上调 PPARα 基因表达来减轻肝脏氧化和炎症损伤。结论：EPE 通过乙醇代谢酶活性调节、脂代
谢调控、抗氧化损伤、抗炎和抗细胞凋亡来保护小鼠急性酒精肝损伤，具有开发为解酒护肝保健食品
的前景。
关键词：余甘子，急性酒精肝，氧化损伤，炎症，脂代谢

Protection and mechanism of extractum phyllanthus emblica on acute alcohol-
induced liver injury in mice
ZHANG Zhi-bi1, ZHANG Yuan1, YU Hao-fei2, HUWei-yan2, ZHANG Lan-chun3,
YANG Hui1,*, ZHANG Rong-ping1,2,*
(1.Biomedical Engineering Research Center, Kunming Medical University, Kunming 650500, China；
2. School of Pharmaceutical Science & Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products, Kunming
Medical University, Kunming 650500, China；
3. Department of Laboratory Animal, Kunming Medical University, Kunming 650500, China)

Absrtact：To study the preventive protection effects and mechanisms of extractum phyllanthus emblica (EPE) on
acute alcoholic liver injury in mice. 60 ICR male mice were randomly divided into 6 groups, including blank


作者简介：张志毕（1986-），男，硕士，助理实验师，研究方向：天然药物药理，E-mail:zhang_zhibi@163.com。
*通讯作者：张荣平，男，博士，教授，研究方向：天然药物化学与药理学，E-mail: zhrp@163.com。
杨晖，女，硕士，讲师，研究方向：药理学，E-mail:358900939@qq.com。
基金项目：云南省高校协同创新中心-南药研究协同中心项目( NY2014002)。
网络出版时间：2016-12-06 14:30:54
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1759.TS.20161206.1430.002.html
group, model group, medicine contrast group (Metadoxine Capsules, 200mg/kg·d), EPE group (80、160、400
mg/kg·d). Medication groups were given with EPE or Metadoxine Capsules respectively by intragastric
administration for 30 days. Then, acute alcoholic liver injury model was established by intragastric administration
of 56% alcohol (13mg/kg) to the medication and model groups 1h later after the last administration. 12h later, the
activities of serum ALT, AST, TG, TNF-α, LI-6, IL-10, the content of hepatic MDA, SOD, GSH-Px, ADH, the
mRNA levels of FAS, ADRP, CYP2E1, PPARα and Caspase3 in liver were measured. HE staining was performed
for observing pathological changes of the liver tissues. The results show that: EPE can significantly reduce the
level of serum ALT, AST, TG and the liver pathological damage; EPE can significantly reduce the sober time by
improving the activities of hepatic alcohol metabolism enzyme ADH, CAT, meanwhile EPE reduce CYP2E1
mRNA expression; EPE significantly suppress the synthesis and transport of fatty acid by inhibiting the expression
of FAS and ADRP; EPE significantly increases the activities of SOD and GSH-Px, lower MDA concentration to
protect liver injury by antioxidant activity; EPE significantly reduces the content of inflammatory factor TNF-α
and IL-6 to relieve liver inflammatory lesions, but EPE has no significant effects on the IL-10 content; EPE
significantly reduce the level of liver cell apoptosis by down regulating the expression of Caspase3; EPE
significantly relieve liver oxidative damage and inflammatory lesions by up regulating the expression of
PPARα. Conclusion: EPE by ethanol metabolic enzyme activity regulation, lipid metabolic control,
resistance to oxidation damage, anti-inflammatory and anti cell apoptosis can protect acute alcoholic liver
injury in mice. EPE has the prospect of development to avoid hangover and be liver protection health food.
Key words: Phyllanthus emblica; acute alcoholic liver; oxidative damage; inflammation; lipid metabolism
中图分类号：R285.5 文献标志吗：A

酒精性肝病（alcoholic liver disease, ALD）是由于长期大量饮酒所致的肝脏损伤性疾病，
我国近年来酒精性肝病发病率逐年上升，是导致肝病的第二大因素[1-3]。研究表明长期过量
饮酒会引起肝脏、肠胃、心血管、内分泌、中枢神经系统等人体重要器官损伤，其中酒精代
谢诱发的氧化应激、炎症等是酒精性肝病发病的主要原因[4]
余甘子（Phyllanthusemblica L.），又名滇橄榄、庵摩勒、油甘子等，系大戟科叶下珠属
落叶小乔木的果实[5]，产于我国南方各省和东南亚、南亚等地[6]。余甘子中富含超氧化物歧
化酶[7]、维 C、多酚类物质及多糖等活性物质[8-9]，除了具有强烈的抗氧化活性[10-11]外，还具
有抗炎症[12]、抗流感[13]、抗高血压、抗肿瘤、护肝等功效[14]，在滇西民间，有用余甘子泡
酒的传统，认为其有解酒护肝的功效。基于前人的研究基础，本研究用小鼠急性酒精肝损伤
模型研究余甘子对急性酒精肝损伤的保护作用，并从乙醇代谢、脂代谢、氧化应激、炎症、
细胞凋亡几个方面来探讨其作用机制，为余甘子解酒护肝的机制研究提供一定的实验基础。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
余甘子精粉（主要成分为多酚，含量 40%），西安维特生物科技有限公司生产，生产
流程：余甘子原料水提→浓缩→浸膏→喷雾干燥→粉碎→包装。美他多辛胶囊-欣立得（批
号：141201），浙江震元制药有限公司。丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号：20151209）、
天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号:20151210）、甘油三脂（TG）试剂盒（批号：
20151209）、丙二醛（MDA）试剂盒（批号：20151201）、过氧化物歧化酶（SOD）试剂
盒（批号：20151205）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒（批号：20151130）、乙
醇脱氢酶（ADH）试剂盒（批号：20151215）、过氧化氢（CAT）试剂盒（批号：20160913）；
以上试剂均购自南京建成生物工程研究所；Mouse TNF-α 试剂盒（批号：228260134）、Mouse
IL-6 试剂盒（批号：220241234）、Mouse IL-10 试剂盒（批号：220362143）杭州联科生物
技术股份有限公司；AxyPrep 总 RNA 制备试剂盒，（批号：12113KD1） 美国 Axygen 公司；
RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit，（批号：00310953） 美国 Thermo Scientific 公
司；TAKARA 荧光定量试剂盒，（批号：AK8603） 宝生物工程有限公司。
ICR 小鼠，雄性，昆明医科大学实验动物学部提供，生产许可证号：SCXK（滇）：
2015-0004。
Synergy2 多功能酶标仪 美国 BIOTEK；Centrifuge5804R 冷冻离心机 德国 Eppendorf；
CHB-100 恒温金属浴 杭州博日科技有限公司；ND-1000 核酸蛋白检测仪 美国 BDT；显
微镜、切片机、EG1160 包埋机 德国 Leica；QuantStudioTM 6 Flex 实时荧光定量 PCR 仪 美
国 Thermo Fisher。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组及给药、造模、取样 成年 ICR 小鼠 60 只，体质量（20±2）g，饲养条件：
室温（20±2）℃，相对湿度（60%~70%）。适应饲养 1 周后按体质量随机分为 6 组，每组 10
只，分别为：空白组、模型组、药物组（欣立得，200mg/kg·d）、EPE 各剂量组（EPE，80、
160、400mg/kg·d）。EPE 和欣立得溶于 0.5%羧甲基纤维素钠，每天按剂量灌胃 1 次，共给
药 30d，空白组和模型组每天灌胃等剂量溶剂。末次给药后 1h，按参考文献[15]，除空白组
外按 13mL/kg 一次性灌胃 56%乙醇，禁食不禁水饲养，12h 后眼球取血，脱臼处死小鼠后
取肝脏-80℃保存。
1.2.2 小鼠醉酒和醒酒时间记录 醉酒指标：翻正反射消失，小鼠背部向下保持 30s 以上；
醒酒指标：翻正反射恢复，小鼠活动自如，灵活。醉酒时间=翻正反射消失时间-给酒时间；
醒酒时间：翻正反射恢复时间-翻正反射消失时间[16]。
1.2.3 病理学组织观察 取肝右叶，4%甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片，常规 HE
染色，显微镜 40 倍物镜观察肝脏组织病理改变。
1.2.4 血清 ALT、AST、TG、TNF-α、IL-6、IL-10 含量检测 血样室温放置 20min 后 3500r/min
4℃离心 10min，取血清，按试剂盒操作说明检测 ALT、AST、TG、TNF-α、IL-6、IL-10 含
量。
1.2.5 肝脏 MDA、SOD、GSH-Px、ADH、CAT 含量测定 取小鼠肝脏左叶约 0.10 g 加入生
理盐水制成 10%肝组织匀浆，3500r/min 4℃离心，取上清，按照试剂盒操作说明检测 MDA、
SOD、GSH-Px、ADH、CAT 含量。
1.2.6 Real time PCR 检测肝脏 FAS、ADRP、CYP2E1、PPARα、Caspase3 基因表达 每组
随机选 4 只小鼠，取小鼠左叶肝脏约 30mg，根据 RNA 提取试剂盒操作说明提取 RNA，检
测 RNA 浓度和纯度，通过逆转录试剂盒逆转录合成 cDNA，-80℃保存备用。根据 NCBI 数
据库相关基因 CDs 序列设计引物，并进行 Blast 检索确定引物的特异性，引物序列如表 1 所
示。Real time PCR 检测相关基因表达，反应条件：（1）95℃预变性 30s；（2）95 5s℃ ，
60 30s ℃ ，40 个循环，反应体系 20ul。以 β-actin 为内参基因，采用 2-△△Ct 法[17]计算基因
表达的相对变化。
表 1 目的基因的引物序列
Table1 Sequence of primer
基因名称 Forward 引物序列（5’- 3’） Reverse 引物序列（5’- 3’）
β-actin Forward：CGTTGACATCCGTAAAGACCTC Reverse：TAGGAGCCAGGGCAGTAATCT
FAS Forward：GACTCGGCTACTGACACGAC Reverse：CGAGTTGAGCTGGGTTAGGG
ADRP Forward：GTGTGTGAGATGGCCGAGAA Reverse：AACAATCTCGGACGTTGGCT
CYP2E1 Forward：CTTGCTTGTCTGGATCGCCA Reverse：GGGGCAGGTTCCAACTTCTA
PPARα Forward：GGGTACCACTACGGAGTTCACG Reverse：CAGACAGGCACTTGTGAAAACG
Caspase3 Forward：CAGCCAACCTCAGAGAGACA Reverse：ACAGGCCCATTTGTCCCATA

1.2.7 数据分析 采用 Graph Pad Prism 5 软件进行数据统计分析，结果用x ± s 表示，显著
性检验采用单因素方差分析，图片处理采用 PhotoshopCS4 软件。

2 结果与分析
2.1 EPE 对小鼠急性酒精肝损伤保护作用
由表 2 和图 1B 可知，与空白组相比，模型组小鼠血清中 ALT、AST、TG 含量均极显
著升高（P＜0.01），肝脏细胞肿大，细胞界限模糊，包浆成空泡状，表明肝组织脂滴较多，
肝细胞完整性被破坏，存在严重脂肪变性，表明小鼠急性酒精肝模型建立成功。
与模型组相比，欣立得对急性酒精肝损伤起良好的保护作用，极显著降低血清中 ALT、
AST、TG 含量（P＜0.01）；EPE 高、中、低剂量组对急性酒精肝损伤也具有一定的预防作
用，能显著降低血清中 ALT、AST、TG 浓度（P＜0.01，P＜0.05），各剂量组对 ALT 和 TG
的影响呈剂量关系，对 AST 影响无显著差异。
病理切片显示，空白组（图 1A）小鼠肝脏细胞形态正常完整，肝组织结构清晰，肝细
胞索排列整齐，肝细胞内无脂肪变性。欣立得组（图 1C）和 EPE 高、中、低剂量组（图 1D、
图 1E、图 1F）肝细胞肿胀程度较模型组减轻，组织结构清晰，肝脏细胞完整，胞浆内空泡
减少，脂肪变性程度得到缓解，EPE 高剂量组护肝效果较中、低剂量组更明显。结果表明
EPE 对肝脏脂肪变性具有改善作用。
表 2 EPE 对小鼠血清 ALT、AST、TG 含量的影响（x ± s，n = 10）
Table2 Effects of EPE on levels of ALT， AST， TG in serum（x ± s，n = 10）
分组 剂量（mg/kg·d） ALT（U/L） AST（U/L） TG（mmol/L）
空白组 - 28.75±2.66 29.30±9.02 1.40±0.05
模型组 - 50.97±12.38** 71.09±9.54** 2.63±0.12**
欣立得 200 32.45±9.03## 41.80±12.14**## 1.56±0.06*##
EPE 高 400 36.55±11.04*## 64.73±22.94**# 1.84±0.12*##
EPE 中 160 38.48±9.64**## 61.28±19.69**# 1.76±0.14*##
EPE 低 80 42.34±13.03**## 62.68±16.17**# 1.67±0.02*##
与空白组比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01（下同）

图 1 EPE 对急性酒精肝损伤小鼠肝脏组织病理学影响（HE，×400）
Fig. 1 EPE improves acute alcohol- induced liver tissue lesions（HE，×400）
注： A.空白组；B.模型组；C. 欣立得；D. EPE-高；E. EPE-中；F. EPE-低

2.2 EPE 对小鼠乙醇代谢的影响
由表 3 可知，各组小鼠醉酒时间差异无统计学意义（P＞0.05），结果表明余甘子并不能
调节对酒精的吸收和酒精麻痹神经中枢过程。与模型组比较，EPE 高、中、低剂量组能显著
缩短醒酒时间（P＜0.05），但无剂量关系；欣立得组能极显著缩短小鼠醒酒时间（P＜0.01）。
乙醇进入体内后由 ADH、CAT 和 CYP2E1 三套系统代谢。与空白组相比，模型组小鼠摄入
乙醇后 ADH 浓度极显著增加（P＜0.01），表明乙醇能对 ADH 的表达起正向调节作用。与
模型组相比，欣立得能极显著增加 ADH 浓度（P＜0.01），EPE 各剂量组能显著增加 ADH
浓度（P＜0.01、P＜0.05），且呈剂量关系。乙醇浓度过高时，体内需要借助 CAT 辅助乙醇
代谢，结果表明，与空白组相比，模型组 CAT 活性极显著下降（P＜0.01）。乙醇底物浓度
增加，辅助代谢酶 CAT 浓度应该升高，但是 CAT 也是体内重要的清除过氧化氢的酶，乙醇
代谢时会产生大量的过氧化氢过，对肝脏组织进行 CAT 活性检测时，由于清除过氧化氢对
CAT 的消耗，所以用试剂盒检测时表现为 CAT 活性下降，该结果与文献报道一致[18]。与模
型组相比，EPE 各剂量组能显著提高 CAT 活性（P＜0.01、P＜0.05），呈剂量关系，欣立得
对 CAT 活性无显著影响。CYP2E1 也是乙醇代谢的重要基因，但其代谢通路会产生严重的
氧化损伤，由图 2 可知，与空白组相比，模型组 CYP2E1 表达极显著增加（P＜0.01），表明
乙醇的摄入激活了 CYP2E1 的表达，这与前人的研究结果一致[14]。与模型组比较，欣立得
能显著降低 CYP2E1 的表达（P＜0.05），EPE 剂量组都能极显著降低 CYP2E1 的表达（P＜
0.01），EPE 各剂量组之间无差异，表明 EPE 不会通过上调 CYP2E1 表达来提高乙醇代谢速
率，反而下调其表达水平，减轻由其介导的乙醇代谢毒性。
表 3 EPE 对小鼠醉酒和醒酒时间、肝脏 ADH 和 CAT 活性的影响（x ± s，n = 10）
Table3 Effects of EPE on drunk time, sober time and levels of hepatic ADH, CAT in mice（x ± s，n = 10）
分组 剂量
（mg/kg·d）
ADH
（U/mg·prot）
CAT
（U/mg·prot）
醉酒时间
（min）
醒酒时间
（min）
空白组 - 3.32±0.11 287±46.37 - -
模型组 - 7.83±0.82** 173.24±36.57** 39.2±8.7 389.8±16.84
欣立得 200 10.67±1.57**## 182.34±34.25** 38.33±6.32 313.13±18.12##
EPE-高 400 9.99±1.93**## 234.33±62.31**## 41.56±7.22 328.44±18.34#
EPE-中 160 8.86±0.68**# 206.37±35.64**## 42.35±5.36 351.97±12.38#
EPE-低 80 8.74±0.38**# 199.32±36.87**# 41.11±6.61 349.22±25.26#

图 2 EPE 对 CYP2E1 基因 mRNA 表达的影响（n=4）
Fig.2 Effect of EPE on the expression of CYP2E1 mRNA (n=4)
2.3 EPE 对肝脏中脂肪代谢相关基因 mRNA 表达的影响
FAS 是脂肪酸合成的关键酶，ADRP 介导血浆中游离脂肪酸向肝细胞内转移[19-20]，二
者过表达时能加速脂肪酸的合成和刺激肝脏细胞吸收脂肪酸并合成 TG，导致脂肪肝的发生。
由图 2 可知，与空白组相比，模型组小鼠肝脏中 FAS 和 ADRP 基因表达都极显著增加（P
＜0.01），与模型组相比，EPE 高剂量能显著降低 FAS 和 ADRP 基因的表达（P＜0.05、P＜
0.01），EPE 中剂量能显著降低 ADRP 基因表达（P＜0.05），欣立得对 FAS 和 ADRP 的表达
没有显著影响（P＞0.05）。结果可知，EPE 通过降低脂肪酸合成酶 FAS（剂量）和转移酶
ADRP（高、中剂量）的表达，减轻肝脏细胞中脂肪酸浓度，从而降低肝脏 TG 的含量，减
轻急性酒精肝损伤。

图 3 EPE 对肝脏 FAS 和 ADRP 基因 mRNA 表达的影响（n=4）
Fig.3 Effect of EPE on the expression of hepatic FAS and ADRP mRNA (n=4)

2.4 EPE 对肝脏氧化应激保护作用
MDA 是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物，其含量可以间接反应自由基
的产生情况和机体过氧化程度[21]。有表 4 可知，与空白组比较，模型组小鼠肝脏组织中 MDA
含量升高，表明小鼠体内过氧化程度较高；SOD 和 GSH-Px 含量极显著降低（P＜0.01），表
明乙醇导致小鼠肝脏组织存在严重的氧化损伤，消耗了氧化损伤保护酶 SOD 和 GSH-Px，
细胞抵御氧化损伤能力下降。与模型组比较，欣立得组 MDA 极显著降低（P＜0.01），SOD
和 GSH-Px 显著升高（P＜0.05、（P＜0.01））；EPE 高、中、低剂量组 MDA 浓度极显著降低
（P＜0.01），SOD 和 GSH-Px 极显著升高（P＜0.01），各剂量组无剂量关系。结果表明，EPE
通过抗氧化损伤保护小鼠急性酒精肝损伤，降低了肝脏氧化应激水平。
表 4 EPE 对小鼠肝脏 SOD、GSH-Px 和 MDA 含量的影响（x ± s，n = 10）
Table4 Effects of EPE on levels of hepatic SOD， GSH-Px and MDA（x ± s，n = 10）
分组 剂量（mg/kg·d） MDA（nmol/g·prot） SOD（U/mg·prot） GSH-Px（U/mg·prot）
空白组 - 20.83±10.06 144.71±22.04 203.35±14.11
模型组 - 45.17±10.07** 93.47±8.84** 135.44±25.27**
欣立得 200 26.39±3.13## 100.58±30.19**# 192.16±29.76##
EPE-高 400 32.41±3.38*## 108.92±16.47**## 174.56±11.57**##
EPE-中 160 30.25±5.53*## 106.34±23.68**## 169.33±35.21**##
EPE-低 80 26.99±3.97## 113.96±18.04**## 171.84±39.95**##

2.5 EPE 抗炎护肝作用
酒精刺激肝脏 kupffer 细胞，激活 NF-κB 信号通路，NF-κB 激活后刺激致炎因子 TNF-α
大量表达，导致炎症发生。kupffer 细胞功能受损，血液中内毒素含量上升，刺激单核细胞
和血管内皮细胞过量分泌 IL-6，引起肝细胞变性、坏死和纤维增生等。IL-10 是一种与 Th2
免疫应答有关密切的细胞因子，也是一种重要的免疫抑制性因子，可抑制 Th2 细胞增殖及
Th1 细胞介导的细胞免疫应答[22]。由表 5 可知，与空白组相比，模型组小鼠血清致炎因子
TNF-α 和 IL-6 浓度极显著升高（P＜0.01），而抗炎因子 IL-10 浓度极显著下降，表明小鼠体
内存在着炎症损伤。与模型组相比，欣立得能显著降低致炎因子 TNF-α 和 IL-6（P＜0.05，
P＜0.01），EPE 高、低剂量组能显著降低 TNF-α 浓度（P＜0.05，P＜0.01），EPE 各剂量组
能显著降低 IL-6 浓度（P＜0.01，P＜0.05），但无剂量关系，表明小鼠服用欣立得和 EPE 能
通过降低致炎因子 TNF-α 和 IL-6 的浓度，降低炎症损伤。欣立得和 EPE 对抗炎因子 IL-10
的浓度无显著影响（P＞0.05），表明 EPE 和欣立得缓解抗炎作用并不是通过提高抗炎因子
IL-10 来调控的，可能是通过其它因素来调节，如氧化应激，乙醇细胞毒性等。
表 5 EPE 对小鼠血清 TNF-α、IL-6、IL-10 含量的影响（x± s，n = 10）
Table5 Effects of EPE on levels of TNF-α、IL-6、IL-10 in serum（x± s，n = 10）
分组 剂量（mg/kg·d） TNF-α（pg/ml） IL-6（pg/ml） IL-10（pg/ml）
空白组 - 34.02±4.11 43.89±6.94 174.65±19.75
模型组 - 88.87±8.56** 99.91±10.65** 89.34±14.43**
欣立得 200 75.44±10.37**# 78.32±8.88**## 87.53±14.54**
EPE-高 400 64.35±6.70**## 80.52±8.44**## 95.34±12.83**
EPE-中 160 80.54±10.24** 86.54±12.62**# 97.18±11.82**
EPE-低 80 78.31±8.57**# 84.90±15.51**# 93.50±12.90**

2.6 EPE 抗细胞凋亡作用
酒精对肝细胞的毒性作用会诱发细胞凋亡，Caspase3 是细胞凋亡通路中重要的蛋白酶，
Caspase3 的激活是细胞遭受各种损伤后凋亡发生的最终共同通路[23]。由图 4 可知，与空白
组相比，模型组小鼠肝脏中 Caspase3 基因 mRNA 表达显著增加（P＜0.05）。与模型组相比，
欣立得能显著下调 Caspase3 基因表达（P＜0.05），EPE 高剂量能显著降低 Caspase3 基因的
表达（P＜0.05），降低肝脏细胞凋亡水平，EPE 中剂量和低剂量对 Caspase3 表达无显著影
响（P＞0.05）。

图 4 EPE 对 Caspase3 基因 mRNA 表达的影响（n =4）
Fig.4 Effect of EPE on the expression of Caspase3 mRNA (n =4)

2.7 EPE 对 PPARα基因 mRNA 表达的影响
乙醇会影响 PPARα，而 PPARα 被抑制参与 ALD 的形成[24]。由图 5 可知，与空白组相
比，模型组 PPARα 表达显著降低（P＜0.05），与文献报道一致[24]。与模型组相比，EPE 高
剂量组能显著上调 PPARα 表达（P＜0.05），而欣立得和 EPE 中、低剂量组对 PPARα 的表达
无显著影响（（P＞0.05）。

图 5 EPE 对肝脏 PPARα 基因 mRNA 表达的影响（n =4）
Fig.5 Effect of EPE on the expression of hepatic PPARα mRNA (n =4)

3 讨论
人体摄入的酒精约 90%都是在肝脏内分解代谢，酒精在肝脏内被乙醇脱氢酶（ADH）、
细胞色素 P4502E1（CYP2E1）和过氧化氢酶（CAT）三套代谢系统氧化为乙醛，然后在线
粒体中通过乙醛脱氢酶将乙醛催化为乙酸，乙酸以乙酰 CoA 进入三羧酸循环代谢，分解为
H2O 和 CO2[25]，酒精代谢酶检测对评价机体对酒精代谢功能具有重要的意义。当人体长期
或大量饮酒时，酒精代谢过程中产生的乙醛影响三羧酸循环的正常进行，使脂肪酸 β 氧化受
阻，体内脂肪酸来源增加，脂肪酸向肝脏转运积累，最终导致肝脏脂肪性病变[19]。ALD 的
发病机制比较复杂，目前广泛接受的是“二次打击学说”，该学说认为 ALD 形成的起重要作
用的因素有脂质过氧化、氧化应激和多种炎症细胞因子的释放等[26]。氧化应激诱导细胞线
粒体功能受损，膜通透性增高，使线粒体细胞色素 C 释放进入包浆，激活 Caspase 凋亡信号
通路，最终诱导细胞凋亡[27]。在肝脏细胞氧化应激和炎症发生过程中，PPARα 发挥着重要
的作用，PPARα 是一种磷酸化蛋白，能够调节脂肪细胞的分化，增强机体对胰岛素的敏感
性，抑制炎症因子的生成以及炎症的形成，参与调节脂肪代谢相关基因的表达，其低表达会
加剧炎症和氧化应激的发生，而乙醇摄入和 CYP2E1 激活会抑制 PPARα 的表达[24,28]。
本研究结果显示，EPE 能降低急性酒精肝损伤小鼠血清转氨酶 ALT、AST 和 TG 浓度，
减轻肝脏脂肪变性程度，对急性酒精肝损伤具有很好的保护作用。结合 ALD 的发病机制和
EPE 前期的研究基础，对 EPE 保护急性酒精肝损伤机制研究发现，首先，EPE 通过提高肝
脏乙醇代谢酶 ADH、CAT 活性，加速乙醇在小鼠体内的分解，缩短小鼠醒酒时间，提高乙
醇分解速率来减少酒精对肝脏的毒性作用时间可能是EPE对ALD的最初的保护机制；其次，
EPE 通过下调脂肪酸合成酶基因 FAS 和转运基因 ADRP，使脂肪酸合成和向肝脏转移的速
率降低，这可能是 EPE 降低肝脏脂肪变性的机制之一；第三，氧化应激损伤是 ALD 发生的
主原因之一，EPE 通过提高肝脏细胞抗氧化酶 SOD 和 GSH-Px 活性，降低急性酒精肝损伤
小鼠肝脏氧化应激水平，抗氧化作用可能是 EPE 保护肝脏的主要功效；第四，EPE 通过减
少致炎细胞因子 TNF-α 和 IL-6 的释放，减轻了肝脏炎症损伤，进一步研究发现，EPE 对氧
化应激和炎症的调控作用与 PPARα 基因有关，EPE 通过上调 PPARα 基因的表达，降低肝脏
氧化应激水平和抑制炎症因子的释放；最后，EPE 高剂量组能下调 Caspase3 基因的表达，
降低肝脏组织的凋亡水平，保护肝脏细胞功能完整。总的来说，EPE 通过抗氧化、抗炎和抗
凋亡作用保护了肝脏细胞，肝脏细胞功能保持完整，有利于肝脏对乙醇及其代谢的有毒物质
的分解，降低细胞毒性。
4 结论
本研究结果表明，EPE 能通过提高乙醇代谢酶活性，加速乙醇代谢，并通过脂代谢调控、
抗氧化、抗炎症、抗细胞凋亡和调控 PPARα 基因表达几方面，减轻小鼠急性摄入过量酒精
导致的肝损伤，发挥解酒和护肝的功效，具有开发为解酒护肝保健食品的潜能，但本实验所
用 EPE 为粗提物，其解酒护肝的有效成分和作用机制还需要更进一步的研究。

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