全 文 :中图分类号:R114 文献标识码:A 文章编号:1002-3127(2009)06-0464-03 ·实验研究·
守宫木干粉对 90 d喂养雄性大鼠睾丸的病理影响
王凤岩 ,熊习昆 ,杨国光 ,胡帅尔 ,周轶琳 ,黄建康 ,赵敏 ,谭剑斌 ,陈瑞仪
(广东省疾病预防控制中心 ,广东 广州 510300)
关键词:守宫木;睾丸;大鼠
基金项目:广东省科技计划项目(2006B20501009)
作者简介:王凤岩 ,副主任技师 ,研究方向:毒理学。
守宫木(sauroupus androgynus L.Merr),别名天绿
香 、树仔菜 、树菜 、越南菜和泰国枸杞等 ,是一种多年生
常绿植物 ,其味道鲜美 ,口感佳 ,在东南亚与我国南方
等地广泛食用 。1994年以来台湾妇女将其作为减肥
蔬菜而有规律地食用 ,却发现有人因此患慢性呼吸困
难 、严重的肺功能障碍[ 1-2] 。但有关守宫木的毒性研究
并不多见 ,本研究用守宫木干粉喂饲雄性 SD大鼠 90
d ,观察长期喂养守宫木干粉对雄性大鼠主要脏器的病
理影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 守宫木干粉的制备:海南产守宫木嫩芽 ,每
1 000 g去除老化的端部约 300 g ,余下的 700 g 在干燥
箱内烘干 、粉碎 ,去除无法粉碎的粗纤维 ,可得干粉约
100 g ,出粉率约为 14.3%。实际加工的市购品约 200
千克 ,以此计算 ,折合成鲜样应*7倍 。按大鼠每 100
g 体重每日摄入 10 g 饲料的量折算制成含 2%、4%和
8%守宫木干粉的饲料 。
1.1.2 动物:南方医科大学实验动物中心提供的 SPF
级SD种健康大白鼠 ,动物生产许可证号:SCXK(粤)
2006-0015 ,质量合格证编号:No 0027577 ,体重 60 ~ 90
g ,颗粒饲料亦由南方医科大学实验动物中心提供;动
物实验室为 SPF 级 ,实验动物使用许可证号:SYXK
(粤)2003-0011。室温(22±2)℃,湿度 60%~ 80%。
1.2 方法 80只雄性大鼠在实验室条件下适应 3 d
后 ,随机分成受试物低 、中 、高 3个剂量组和阴性对照
组 ,剂量分别为 2.0 、4.0和 8.0 g kg ,每组 20只 ,分笼
饲养 ,样品按大鼠每 100 g 体重每日摄入 10 g 饲料的
量折算制成含 2.0%、4.0%和 8.0%的守宫木干粉饲
料 ,分别给低 、中 、高剂量组摄食 ,阴性对照组给予普通
颗粒饲料 ,连续 90 d。每鼠保证有充足饮水和饲料供
应 ,自由饮食。实验结束后 ,对各组大鼠进行大体病理
学检查 ,取主要脏器肝 、脾 、肾和睾丸等器官分别称重 ,
同时取肺 、肝 、肾 、脾 、胃 、小肠和睾丸经体积分数为
10%的甲醛固定后进行常规苏木素-伊红(HE)染色的
病理组织学检查 。
1.3 统计学方法 实验数据采用 SPSS 11.5软件包进
行方差分析与卡方检验。
2 结果
2.1 一般情况 由图1可见 ,整个试验期间各组动物
体重均保持增长 ,但给予守宫木干粉各剂量组的体重
明显低于对照组 ,从第 1周开始中 、高剂量组体重与对
照组比 ,差异具有统计学意义(P <0.05),表明每日给
予4 g kg以上的守宫木干粉可减轻雄性大鼠的体重 。
图 1 守宫木干粉对 90 d喂养雄性 SD大鼠
平均体重的影响
2.2 雄性大鼠睾丸的大体检查结果 连续给予守宫
木干粉90 d ,低 、中剂量组大鼠大体检查未见明显病理
改变;雄性高剂量组 4 例(4 9)动物双侧睾丸发育不
良 、体积较小 ,约为正常睾丸的 1 2 ,发育不良率为
44.44%,重量明显减轻 ,与对照组比 ,差异具有统计学
意义(P <0.05),连续给予含 8%守宫木粉90 d可影响
雄性大鼠的睾丸发育 。
2.3 睾丸重及睾体比结果 给予守宫木干粉 90 d ,高
剂量组睾丸的重量比对照组减轻 ,差异具有统计学意
·464· 毒理学杂志 2009年 12月第 23卷第 6期 J Toxicol December 2009 Vol.23 No.6
DOI :10.16421/j.cnki.1002-3127.2009.06.010
义(P<0.05 ,表 1),但脏体比却无统计学意义。
表 1 守宫木干粉 90 d喂养试验对雄性大鼠
双侧睾丸重及睾体比( x±s)
组别 动物数(只)
睾丸重
(g)
睾体比
(%)
对照组 10 3.85±0.79 0.70±0.12
低剂量组 10 4.05±0.45 0.81±0.06
中剂量组 10 3.68±0.41 0.83±0.13
高剂量组 9 2.08±0.40* 0.66±0.18
注:与对照组比较 , *P<0.05。
2.4 守宫木干粉对 90 d 喂养大鼠睾丸组织病理学检
查结果 经病理组织学检查 ,雄性低 、中剂量组的大鼠
睾丸亦未见明显异常 ,雄性高剂量组有 3只动物睾丸
曲细精管中生精上皮发育不良 、另有 3只动物的睾丸
约80%曲细精管的生精上皮发育不良 ,生精小管腔内
各级生精细胞减少 ,未见各级生精细胞有序排列 ,有的
曲细精管内的生精上皮完全消失 ,有的管腔中可见异
常的多核细胞 ,个别动物睾丸间质充满淡粉色均染物 ,
似胶状物 ,其周边见有空泡 ,见图 2 ~ 4。
个别生精小管内还可见生精细胞 ,
大部分曲细精管内生精细胞减少或消失。
图 2 高剂量组睾丸曲细精管(HE ×200)
3 讨论
守宫木是原产于东南亚的灌木植物 ,一般是将叶
子加热后食用 ,未见肺损害的报道 。1994年台湾将其
作为减肥食品引进 ,榨汁后服用出现了肺损害的病例 ,
经病理诊断为闭塞性细支气管炎;1996年日本将其作
成粉末状或片剂保健食品销售 ,共报道了 8 例与守宫
木相关的闭塞性细支气管炎[ 3] 。
有关守宫木试验动物毒性研究的报道极少见 ,
2005年郭巨先等[ 4] 报道了守宫木的毒理学研究情况 ,
曲细精管内生精细胞减少或消失 ,
睾丸间质内充满淡粉色均染物 ,似胶状物。
图 3 高剂量组睾丸曲细精管(HE ×200)
仅见残余生精细胞 ,管腔内可见多核巨细胞。
图 4 高剂量组睾丸曲细精管(HE ×200)
其剂量设计为 2.5 、5.0和 10.0 g kg ,掺入饲料中喂养
SD大鼠 30 d ,病理组织学检查结果显示 ,从低剂量组
开始引起睾丸病变 ,曲细精管明显水肿 ,曲细精管上皮
细胞异常分裂 ,管腔中出现大量异常的多倍体细胞 ,报
道结果基本与本文的睾丸损害是一致的 。Yu等[ 5] 从
守宫木中提取 GGK 、EtOAc 和 n-BuOH 3种物质 ,分别
给予雄性Wistar大鼠28 d ,GGK明显降低大鼠的体重 ,
但未见肺 、肝和肾脏器的病理损害;n-BuOH 组观察到
阻塞性细支气管炎和组织性肺炎的改变 ,但各组均未
报道对睾丸的病理影响。本研究结果显示 ,曲细精管
中各级生精细胞减少 ,甚至消失 ,有的管腔中出现多核
巨细胞 ,睾丸间质变宽 ,充满了淡粉色均染似胶状物 ,
在均染物的周边还见有小的空泡。
大鼠生后 55 d 左右为性成熟期 , 之前为青春
期[ 6-7] ,6周龄时大鼠的精子开始发育形成[ 8] 。青春前
期与青春期时哺乳动物生殖发育的重要时期 ,对外源
性物质的作用非常敏感 。本试验选择离乳大鼠 ,约 4
·465·毒理学杂志 2009年 12月第 23卷第 6期 J Toxicol December 2009 Vol.23 No.6
周龄 ,此时大鼠处于青春前期 ,连续喂饲守宫木干粉
90 d至大鼠成年 。在掺入 8.0 g kg 守宫木干粉的喂饲
组 ,有 4例(4 9)动物大体观察双侧睾丸体积较小 ,约
为正常睾丸的 1 2 ,重量明显减轻 ,病理组织学检查除
了见到各级生精细胞减少 ,甚至有序排列消失 ,还发现
曲细精管管腔中见异常的多核细胞 ,它们形成原因有
待进一步研究证实。以上结果表明守宫木干粉可能对
大鼠睾丸的发育有影响 ,具体的影响机制尚有待进一
步的研究证实。本试验结果还提示我们 ,食品资源的
开发固然注重营养价值 ,但首要的前体是保证食用安
全性 ,作为食品 ,未经毒理学安全性评价 ,推广并长期
规律食用可能存在健康危害。
参考文献
[ 1 ] Lin TJ , Lu CC , Chen KW , et al.Outbreak of obstructive
ventilabtory impaiment associated with consumption of sauropus
androgynus vegetable[ J] .J Toxicol Clin Toxicol , 1996 , 34(1):
1-8.
[ 2 ] Chang YL , Yao YT , Wang NS , et al.Segmental necrosis of
small bronchi after prolonged intakes of sauropus androgynus in
Taiwan[ J] .AM J Respir Crit Care Med , 1998 , 157(2):594-
598.
[ 3 ] 东元一晃 ,史春虹.保健食品(补品)引起的药物性肺损
害[ J] .日本医学介绍 , 2007 , 28(3):123-124.
[ 4 ] 郭巨先 ,杨暹 ,郭兰良.华南野生蔬菜守宫木的毒理学研
究[ J] .华南农业大学学报 , 2005 , 26(4):10-14.
[ 5 ] Yu SF , Shun CT , Chen TM , et al.3-O-β-D-Glucosyl-(1 ※
6)-β-D-Glucosyl-kaempferol isolated from Sauropus androgenus
reduces body weight gain in Wistar rats[ J] .Biol Pharm Bull ,
2006 , 29(12):2510-2513.
[ 6 ] 李和程 ,陈琦 , 王子明 ,等.青春期前己烯雌酚暴露对 SD
大鼠睾丸发育及功能的影响[ J] .中华男科学杂志 , 2008 ,
14(2):142-148.
[ 7 ] 邱云良 ,吴德生 , 曾祥贵 ,等.壬基酚对性成熟期F-1 子代
雄性 SD大鼠生殖发育的影响[ J] .四川大学学报(医学
版), 2005 , 36(3):382-385.
[ 8 ] 王捷.毒性病理学[ M] .沈阳:辽宁科技出版社 , 2004:118-
128.
(收稿日期:2009-02-01)
中图分类号:Q946.81+9 文献标识码:A 文章编号:1002-3127(2009)06-0466-03 ·实验研究·
熊果酸对小鼠肝细胞损伤的保护作用
卢静 ,郭文秀 ,关爽 ,张劭康 ,钱文辉 ,黄焕杰 ,杨春薇
(吉林大学军需科技学院食品质量与安全系 ,吉林 长春 130062)
关键词:熊果酸;肝细胞;保护
作者简介:卢静 ,博士 ,研究方向:细胞技术在食品毒理学中的应用。
熊果酸(Ursolic acid ,UA),又名乌索酸 、乌苏酸 ,相
对分子质量为 456 u ,分子式为 C30H48O3 ,是存在于多
种天然植物中的一种五环三萜类化合物 。据不完全统
计 ,UA 以游离形式或与糖结合形式分布于大约 27个
科 46个属 62种植物 ,尤其在陆英 、山楂 、白花蛇舌草
和夏枯草等中含量丰富[ 1] 。近年来 ,国内外大量的研
究表明熊果酸具有抗炎 、抗菌 、抗肿瘤多种重要的生物
学效应。
在护肝作用方面 , Saravanan R等[ 2] 以乙醇对大鼠
肝细胞的损伤为模型 , 探索出熊果酸的保肝作用。
Martin-Aragon S等[ 3] 又发现熊果酸对四氯化碳造成的
大鼠肝损伤具有抑制作用 ,但是目前关于熊果酸对小
鼠肝细胞的保护作用方面研究较少 ,鉴于环磷酰胺是
通过损伤线粒体对细胞产生毒性作用;氯霉素是通过
细胞色素 P-450单加氧酶 ,对肝细胞造成损伤;因此本
实验分别用环磷酰胺 、氯霉素和四氯化碳建立肝细胞
损伤模型 ,采用原代小鼠肝细胞培养技术 ,配合 MTT
比色法 ,通过观察肝细胞的活性 ,探讨不同浓度的熊果
酸对环磷酰胺 、氯霉素和四氯化碳引起的肝细胞损伤
是否具有保护作用。
1 材料与方法
1.1 动物及试剂 SPF 级小鼠 ,雄性 ,体重(26.7±
0.3)g ,购自吉林大学动物试验中心 ,合格证号 SGK-
·466· 毒理学杂志 2009年 12月第 23卷第 6期 J Toxicol December 2009 Vol.23 No.6