全 文 ：China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 15 中国药房 2010年第21卷第15期
海南血桐（Macaranga hemsleyana）为大戟科 Euphorbia-
ceae血桐属Macaranga thou植物 [1]。该属植物普遍具有药用
价值，东南亚地区的当地居民用于外敷治疗刀伤擦伤、溃疡肿
痛和疖子等；在我国海南岛除东北部外其他地区均有分布，民
间主要用于治疗咳嗽、哮喘等疾病。对该属植物的化学成分
及生物活性的研究备受各国学者关注。根据报道，从该属植
物发现多种具有药用价值的化合物和活性先导物[2，3]。
本文主要报道利用抑菌活性跟踪寻找海南血酮叶子中有
效的抑菌活性部位，再利用硅胶柱色谱法对有效部位进行分
离纯化得到有效抑菌活性的化学成分，经现代波谱法结合理
化性质鉴定其优势抑菌活性化学成分为没食子酸乙酯。没食
子酸乙酯是有效的抑菌活性成分，可以用于油脂抑氧化剂、食
品添加剂，还可以用于某些药品的合成中间体[2，3]。本试验利
用反相-高效液相色谱（RP- HPLC）法测定海南血桐叶子中没
食子酸乙酯的含量，建立了测定海南血桐叶子中没食子酸乙
酯含量的方法，采用此方法测定海南血桐叶子中没食子酸乙
酯含量为 9.099 5 mg·g- 1。抑菌活性试验结果表明，没食子酸
乙酯对细菌有明显的抑制活性，而对霉菌则没有表现出活性。
1 仪器与试药
XT4型显微熔点测定仪（温度计未校正，北京科仪电子仪
器厂）；Bruker AV- 400型核磁共振（NMR）仪（瑞士Bruker 公
司）；TU- 1901型双光束紫外-可见分光光度（UV）计（北京普
析通用仪器有限公司）；Nicolet Nexus 670 FT- IR型红外光谱
（IR）仪（美国Thermo公司）；N1001型旋转蒸发仪（日本EYE-
LA公司）；薄层色谱（TLC）板与柱色谱硅胶（青岛海洋化工
厂）；高效液相色谱（HPLC）系统，包括UV230+紫外检测器、
P230p高压恒流泵（双泵）、EC2000色谱工作站（大连依利特公
司）；CTO- 10AS VP型柱温箱（日本岛津公司）；BT124S型电子
天平（德国赛多利斯股份有限公司）；Human Bio Nex Pow-
er1000型超纯水仪器（北京普析通用仪器有限责任公司）。
样品采集于海南霸王岭地区，由海南师范大学生命科学
学院钟琼芯副教授鉴定为真品，标本贮藏于海南省热带药用
植物化学重点实验室；没食子酸乙酯标准品（含量：99％，上海
君创生物科技有限公司）。
2 分离纯化及结构鉴定
2.1 试验方法
将海南血桐药材自然晾干，取叶子 3.5 kg粉碎后得到粉
末，用3×10 L乙醇（85％）加热回流3 h，浓缩得乙醇粗浸膏；再
将乙醇粗浸膏分散于 800 mL水中，依次用石油醚（3×2 L）、乙
酸乙酯（3×2 L）和正丁醇（3×2 L）萃取，得到石油醚提取浸膏
150 g、乙酸乙酯提取浸膏282 g、正丁醇提取浸膏210 g。经抑
Δ海南省自然科学基金项目（808144）
＊讲师，硕士。研究方向：天然产物化学。电话：0898-
65889422。E- mail：wtsmount@126.com
# 通讯作者：教授，博士后。研究方向：天然产物化学。电话：
0898- 65889422。E- mail：chgying123@163.com
海南血桐叶子中抑菌活性物质的提取分离与含量测定Δ
王天山 1＊，黄 璐 1，赵守永 1，陈 忠 2，陈光英 1 #（1.海南省热带药用植物化学重点实验室/海南师范大学化学与
化工学院，海口市 571158；2.海南师范大学生命科学院，海口市 571158）
中图分类号 R284；R282.7 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）15- 1392- 03
摘 要 目的：研究海南血桐叶子中具有抑菌活性的化学成分，并利用反相高效液相色谱（RP- HPLC）法对其进行含量测定。方
法：采用硅胶柱色谱技术对海南血桐叶子中具有明显抑菌活性的乙酸乙酯提取浸膏进行分离纯化，得到抑菌活性化合物，利用现
代波谱法结合理化性质对其进行结构鉴定，同时利用RP- HPLC法测定其在叶子中的含量。结果：分离得到的抑菌活性化合物经
鉴定为没食子酸乙酯，其在海南血桐叶子中的含量为9.099 5 mg·g- 1。结论：本方法简便、准确，可用于海南血桐叶子的质量控制。
关键词 海南血桐；反相高效液相色谱法；含量测定；没食子酸乙酯；抑菌活性
Isolation and Content Determination of Antimicrobial Constituent of the Leaves of Macaranga hemsleyana
from Hainan
WANG Tian-shan，HUANG Lu，ZHAO Shou-yong，CHEN Guang-ying（Hainan Provincial Key Lab of Tropical
Pharmaceutical Herb Chemistry，College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，
Haikou 571158，China）
CHEN Zhong（College of Life Science，Hainan Normal University，Haikou 571158，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To research the chemical constituents with antimicrobial activity from the leaves of Macaranga hems-
leyana and determine the content of chemical constituents by RP- HPLC. METHODS：The antimicrobial compound was obtained
by silica chromatography from the leaves of M. hemsleyana and the chemical structures of this compound were identified by
modern spectroscopy as well as physiochemical analysis. Meanwhile the content of compound was determined by RP- HPLC.
RESULTS：This compound was identified as ethyl gallate and its content was 9.099 5 mg·g- 1.CONCLUSION：The method is
simple，convenient and accurate for the quality control of M. hemsleyana from Hainan.
KEY WORDS Macaranga hemsleyana；RP- HPLC；Content determination；Ethyl gallate；Antimicrobial activity
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中国药房 2010年第21卷第15期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 15
菌活性筛选后，反复常压硅胶柱色谱从乙酸乙酯提取浸膏中
分离得到抑菌活性化合物0.4 g。
2.2 结构鉴定
化合物为无色针状晶体（石油醚/丙酮），熔点：151.5～
152.5℃，用TLC法检测喷浓H2SO4显紫红色。UV：λmax＝299
nm（logε＝2.705，0.11 mg·mL- 1，CH3OH）。IR（KBr）：3 451与
3 296 cm- 1（羟基），1 706与1 315 cm- 1（酯基），2 976与1 409 cm- 1
（乙基），2 935与1 385 cm- 1（甲基），3 050、1 650、1 620、1 536与
1 470（苯环）；1H- NMR（400 MHz，CDCl3）δH（ppm）：1.23（3H，
t，J＝7.6Hz，H- 9），4.16（2H，q，J＝7.6 Hz，H- 8），6.95（2H，s，
H- 2 和 H- 6）；13C- NMR（100 MHz，CDCl3）δ C（ppm）：14.6
（C- 9），61.7（C- 8），168.6（C- 7），110.0（C- 2和 C- 6），146.4
（C- 3和C- 5）121.8（C- 1），139.7（C- 4）。该结果与文献[4]报道
的波谱数据一致，鉴定为没食子酸乙酯。
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：5C18- AR-Ⅱ（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙
腈 ∶水（2％乙酸）＝（5 ∶ 95～10 ∶ 90，10 min）；流速：1 mL·min- 1；
柱温：30℃；检测波长：299 nm；进样量：20 μL。色谱见图1。
3.2 提取方法
将 2 g海南血桐叶子置于 250 mL碘量瓶中，加入 50 mL
70％的乙醇溶液，在室温下振荡提取48 h，提取液用等体积石
油醚和乙酸乙酯分别萃取3次，再将水溶液浓缩后用甲醇定容
于50 mL容量瓶中。
3.3 标准品溶液的制备
精密称取 0.004 0 g没食子酸乙酯标准品，甲醇溶解后定
容于 10 mL容量瓶，制成浓度为 0.4 mg·mL- 1的母液；吸取 5
mL 0.4 mg·mL- 1的母液于 10 mL容量瓶定容，制成 0.2 mg·
mL- 1的溶液；吸取5 mL 0.2 mg·mL- 1的溶液于10 mL容量瓶定
容，制成0.1 mg·mL- 1的溶液；吸取5 mL 0.1 mg·mL- 1的溶液于
10 mL容量瓶定容，制成0.05 mg·mL- 1的溶液；吸取5 mL 0.05
mg·mL- 1的溶液于 10 mL容量瓶定容，制成 0.025 mg·mL- 1的
溶液。
3.4 标准曲线的制备
采用5倍定量环进样法，将以上对半稀释标准品溶液近上
述RP- HPLC条件测定，获得的标准品溶液进样量（X）与对应
峰面积积分值（Y）制备标准曲线。由标准曲线得出回归方程
为Y＝29 167 925X－154.6（r＝0.999 9）。
3.5 精密度试验
吸取0.4 mg·mL- 1的标准品溶液适量，以5倍定量环进样20 μ
L，连续平行进样6次。结果，平均峰面积积分值为11 484.89，
RSD＝0.83％，表明仪器精密度良好。
3.6 稳定性试验
称取 2.013 1 g海南血桐叶子，利用以上优化的提取方法
得到待测样品，用甲醇定容于 50 mL容量瓶，5倍定量环进样
20 μL进行RP- HPLC分析。其稳定性考察时间为0、1、3、5、
8、12 h，共进样 6次。结果，平均峰面积积分值为 10 519.55，
RSD＝0.61％，表明样品在考察时间内没食子酸乙酯稳定性良
好。
3.7 重现性试验
分别称取 2 g海南血桐叶子 6份，利用以上优化的提取
方法得到待测样品，用甲醇定容于 50 mL容量瓶，5倍定量环
进样 20 μL进行RP- HPLC分析。结果，平均峰面积积分值为
10 517.49，RSD＝0.40％，表明方法重现性良好。
3.8 含量测定
分别精确称取2.007 3、2.010 2、2.004 7 g海南血桐叶子，
利用以上优化的提取方法得到待测样品，分别用甲醇定容于
50 mL容量瓶，5倍定量环进样 20 μL进行HPLC分析，每一批
样品平行测定 5次后取平均值。结果，平均峰面积积分值为
10 499.18，根据回归方程计算出叶子中没食子酸乙酯的含量
为9.099 5 mg·g- 1。
4 抑菌活性研究
没食子酸乙酯是一种有效的抑菌活性成分，对金黄色葡
萄球菌、白葡萄球菌和变形杆菌具有较强的抑制作用[2，3]。本
文根据抑菌活性筛选，从海南血桐叶子乙酸乙酯提取浸膏中
分离得到抑菌活性成分亦为没食子酸乙酯，并测定其对细菌
和霉菌的最小抑制浓度。微生物抑制活性试验结果表明，没
食子酸乙酯对细菌有明显的抑制活性，其对大肠杆菌、枯草杆
菌和金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度分别为 0.075、0.075、0.1
mg·mL- 1；而对毛霉、黑曲霉等霉菌则没有抑制活性。
5 讨论
5.1 检测波长的选择
精密称取0.001 0 g标准品，甲醇溶解，定容于50 mL容量
瓶，制成含量为 0.02 mg·mL- 1的待测溶液，进行 200～900 nm
全波长扫描，测得最大吸收波长为299 nm。因此，选择299 nm
作为RP- HPLC检测波长。
5.2 流动相的优化
根据文献报道，分离栾树枝叶中没食子酸乙酯的
RP- HPLC条件为甲醇 ∶水（0.05 mol·L- 1乙酸）＝（10 ∶ 90～30 ∶
70，15 min），流速 1 mL·min- 1[5]；分离 16种槭属植物叶中没食
子酸甲酯的HPLC条件为乙腈 ∶水（2.5％乙酸）＝10 ∶ 90，流速
1 mL·min- 1[6]。本试验对以上 2种分离条件进行优化，得到分
离海南血桐叶子中没食子酸乙酯的最佳色谱条件为乙腈 ∶水
（2％乙酸）＝（5 ∶ 95～10 ∶ 90，10 min），流速为 1 mL·min- 1，柱
温30℃。
5.3 提取方法的优化
试验比较了超声提取法、回流提取法、振荡提取法和冷浸
提取法 4种方法对同量样品中没食子酸乙酯的提取率。结果
表明，振荡法提取出来的没食子酸乙酯明显高于其他 3种方
法，因此选择振荡提取法。
5.4 提取溶液的优化
根据文献[5，6]报道，提取中药材中没食子酸及其衍生物选
用的最佳溶剂为乙醇溶液。因此，对海南血桐中没食子酸乙
酯选择不同浓度的乙醇溶液进行提取，并对其进行优化。分
别设定乙醇浓度为0、10％、30％、50％、70％、90％和100％，利
用最佳振荡提取法室温振荡提取 48 h，再对各自样品进行
0 5 10 15 20 25 30 35 min 0 5 10 15 20 25 30 35 min
1
1
A B
图1 高效液相色谱图
A.对照品；B.供试品
Fig 1 HPLC chromatograms
A. reference substance；B. test sample；1.ethyl gallate
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China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 15 中国药房 2010年第21卷第15期
RP- HPLC分析，选择峰面积最高者作为最佳提取溶液。结果
表明，利用70％乙醇溶液提取所得的没食子酸含量最高。
综上分析，提取分离海南血桐叶子中没食子酸乙酯的条
件是在室温下振荡提取48 h，所得提取浸液分别用石油醚和乙
酸乙酯萃取后定容于 50 mL容量瓶中。其HPLC色谱条件为
乙腈 ∶水（2％乙酸）＝（5 ∶ 95～10 ∶ 90，10 min），流速为 1 mL·
min- 1，柱温为30℃。
参考文献
[ 1 ] 中国科学院华南植物研究所编.广东植物志（第五卷）
[M].广州：广东科技出版社，2003：83.
[ 2 ] Martin AS，Erdal B，Ngeh JT，et al.Antifungal clerodane
diterpenes from Macaranga monandra（L）Muell. et Arg.
（Euphorbiaceae）[J]. J Agric Food Chem，2003，51（26）：
7 606.
[ 3 ] 马广恩，申雅维，鲁学照，等.栾树抗菌有效成分的研究
[J].中草药，1998，29（2）：84.
[ 4 ] 于志斌，杨广义，吴 霞，等.救心草的化学成分研究[J].
天然产物研究与开发，2007，19（1）：67.
[ 5 ] 申雅维，马广恩.栾树枝叶中没食子酸及甲酯、乙酯提取
方法及含量测定[J].中草药，1998，29（3）：165.
[ 6 ] 高春春，赵文华，宋学英，等.16种槭属植物叶中没食子
酸甲酯的含量[J].中药材，2006，29（12）：1 281.
（收稿日期：2009- 05- 01 修回日期：2009- 06- 12）
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白花蛇舌草中黄酮类抗肿瘤活性成分的HPLC分析Δ
邵振中 1，2＊，贾晓斌 1，2 #，辛 然 1，金晓勇 1，陈 彦 1（1.江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室/国家
中医药管理局名医名方适宜剂型重点研究室，南京市 210028；2.江苏大学药学院，镇江市 212013）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）15- 1394- 03
摘 要 目的：建立一种同时测定白花蛇舌草中黄酮类抗肿瘤活性成分槲皮素和山柰酚含量的方法。方法：采用高效液相色谱
（HPLC）法，色谱柱为Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇（A）- 0.5％冰醋酸（梯度洗脱），检测波长为 350 nm。结
果：槲皮素、山柰酚的进样量分别在0.006 2～0.244 0 μg（r＝0.999 8）、0.007 8～0.310 6 μg（r＝0.999 9）范围内与各自峰面积积分值
呈良好线性关系；平均回收率分别为101.84％（RSD＝1.79％，n＝6）和99.04％（RSD＝2.90％，n＝6）。结论：本方法简便、准确、重
复性好，可用于白花蛇舌草药材的质量控制。
关键词 白花蛇舌草；槲皮素；山柰酚；高效液相色谱法；含量测定
Determination of Anticancer Activity Components of Flavonoids from Hedyotis diffusa by HPLC
SHAO Zhen-zhong，JIA Xiao-bin，XIN Ran，JIN Xiao-yong，CHEN Yan（Key Laboratory of New Drug Deliv-
ery System of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，Key
Laboratory of Scientific Preparation for Clinical Effective Prescription，State Administration of Traditional Chi-
nese Medicine，Nanjing 210028，China）
SHAO Zhen-zhong，JIA Xiao-bin（College of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the simultaneous determination of anticancer activity components of
flavonoids from Hedyotis diffusa， i.e. quercetin，kaempferol. METHODS：HPLC was applied to determine the contents and
performed on Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column. Mobile phase consisted of methanol（A）- 0.5％ glacial acetic acid，
（gradient elution）. The detection wavelength was aet at 350 nm. RESULTS：The linear range of quercetin was 0.006 2～0.244 0 μg
（r＝0.999 8）and that of kaempferol 0.007 8～0.310 6 μg（r＝0.999 9）. The average recovery of quercetin was 101.84％（RSD＝
1.79％，n＝6） and that of kaempferol 99.04％（RSD＝2.90％，n＝6）. CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and
reproducible for the quality control of H. diffusa.
KEY WORDS Hedyotis dippusa；Quercetin；kaempferol；HPLC；Content determination
Δ江苏省自然科学基金项目（BK2006155）；江苏省中医药领军人
才项目（2006）
＊硕士研究生。研究方向：中药物质基础及ADME研究。电话：
025- 85637809。E- mail：shaozhenzhong@tom.com
＃通讯作者：研究员。研究方向：中药新型给药系统与生物药剂
学。电话：025- 85637809。E- mail：jxiaobin2005@hotmail.com
白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草的全草，原植物广
泛分布于亚热带地区，在我国广西、广东、江西、浙江、江苏、安
徽等地均有生长。药理研究表明其具有抗菌、增强免疫功能、
抗肿瘤、抗衰老等作用[1]，近年来因被广泛用于各种肿瘤的预
防和治疗而受到越来越多的重视。白花蛇舌草所含化学成分
主要有三萜类、黄酮类、香豆素类，以及甾醇、蒽醌、环烯醚萜
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