全 文 ：第二十卷第二册
2010年 4月
口 腔 护 理 用 品 工 业
ORALCAREINDUSTRY
　
53　
·检测分析 ·
HPLC法测定牙膏中九里香酮的含量
黄光伟　韦宝韩　黄晓燕　卢凯玲
(柳州两面针股份有限公司 545001)
摘　要:目的:建立 HPLC测定牙膏中九里香酮(5, 7, 3 , 4 -四甲氧基黄酮)含量
的方法。方法:色谱柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(Analytical4.6 ×250mm5-
Microm);流动相:A为 0.3%磷酸 , B为乙腈;梯度洗脱;流速为 1.0mL/min;柱温为
40℃;检测波长为 335nm。结果:九里香酮浓度在 0.216 ～ 2.16μg/ml范围内与峰面积
呈良好的线性关系(r=0.99996), 平均回收率为 97.18%。结论:该方法的稳定性 、重
现性和准确性良好 , 可作为牙膏的质量控制方法。
关键词:HPLC法　牙膏　九里香酮
　　九里香为芸香科植物九里香(Murrayaexotical
L.)和千里香(MurayapaniculataL.jack)的干燥叶
和带叶嫩枝 [ 1] 。现代药理研究证明 ,九里香具有抗
菌 、消炎 、解痉 、局麻及增强免疫等功能 [ 2 -3] ,其叶中
含有黄酮 、香豆素 、挥发油及生物碱等多种化学成
分 ,其中酮类化合物为主要功效成效 [ 4-8] 。
九里香提取物是两面针中药牙膏的功效成分之
一 ,按照国家发改委发布的功效型牙膏国家标准的
要求 ,牙膏中的活性成分需定性或定量检测。因此 ,
为了有效控制牙膏产品的质量 ,本实验采用 HPLC
法 ,以九里香提取物中的主要活性成分九里香酮为
指标 ,测定牙膏中九里香酮的含量 ,通过准确定量测
定牙膏中该成分的含量 ,为两面针中药牙膏建立相
应的质量控制方法提供可靠依据。
已有文献报道九里香酮含量的测定[ 2] ,它测定
的是药品 ,样品中的九里香酮含量比较高 ,该方法用
甲醇 -水作为流动相 ,且采用了等度洗脱方法 。对
于牙膏样品 , 由于九里香提取物的添加量相对比较
建设的必要工作 ,是指导临床实践和建立临床诊疗
规范的基础。综合分析国际指南制定的方法和程
序 ,结合中医药特色 ,制定指导中医临床诊疗指南的
技术操作规范 ,为中医临床各科诊疗指南的制定起
到示范作用 ,有利于制定高水平的中医临床诊疗标
准及其更大范围的认可和应用 。
5.2　制定中医临床实践指南技术操作有待规范
中医药标准制定的重要性逐渐受到国家和广大
中医药学者的重视 ,近年来国家中医药管理局和中
华中医药学会设置了多项标准化项目 ,中华中医药
学会二级分会分别承担了诊疗指南制定项目 ,如内
科分会承担制定了《中医内科常见病诊疗指南》 ,糖
尿病分会承担制定了 《糖尿病中医防治指南 》,艾滋
病分会承担制定了《艾滋病中医防治指南 》,形成的
指南作为行业规范发布。然而 ,由于中医药临床实
践指南的制定尚处于起步阶段 ,指南的制定缺少规
范的技术操作 ,不同课题承担单位在指南制定的过
程中 ,采用的程序 、步骤 、方法不甚统一 ,形成指南的
质量 、被认可度 、可推广性差异较大 ,制定指南技术
操作的不规范已经成为影响指南质量 、认可 、推广的
重要因素之一 。
5.3　综合国际标准制定的程序 ,结合中医药自
身特色 ,制定诊疗标准技术操作规范(SOP),是形成
国家标准 、国际标准的必由之路
中医药是为数不多的几个具有自主知识产权的
民族产业之一 ,在制定国际标准时 ,具有很大的主动
权 ,因此 ,中医药国际标准的制定应该本着 “我主人
随”的原则。然而 ,国际指南的制定具有一定的规
则和规范 ,中医药要想走向国际 ,和国际接轨 ,必须
制定符合国际标准制定规则的临床实践指南 。中医
学由于其特殊性 ,现有的国际指南制定的程序和方
法并不完全适用于中医学临床实践指南的制定。中
医药标准如果要得到全世界的认可 ,首先应该了解
国际标准制定的规则 ,只有在全面了解国际指南制
定程序后 ,才能以此为基础 ,考虑中医药的特殊性 ,
制定符合中医药特色的诊疗标准技术操作规范 ,指
导中医诊疗标准的制定 ,最终形成具有国际影响力
的中医临床实践指南 ,发挥中医药的特色优势。
　　
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黄光伟 , 等:HPLC法测定牙膏中九里香酮的含量
　　　
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小 ,而且牙膏是一种由十几种原料组成的混合物 ,其
中包含有表面活性剂和香精等多种有机成分 ,它们
对分析干扰很大 。为了达到理想的分离效果 ,作者
采用 0.3%磷酸 -乙腈作为流动相 ,并以梯度洗脱
的方法进行分析 。
　　1　仪器和试药
Agilent1200高效液相色谱仪系统(G1379BDe-
gasser, G1311AQuatPump, G1315BDAD);
ANDHM-200电子天平;
As3120超声清洗仪;
LG10-2.4A离心机;RE52-98旋转蒸发器;
九里香酮对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号:11552-200602);
牙膏(规格:120克 /支 ,柳州两面针股份有限公
司生产);
乙腈为色谱纯;
甲醇为色谱纯;
磷酸为分析纯;
超纯去离子水。
　　2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C18
(Analytical4.6×250mm5-Micron);
流动相:A为 0.3%磷酸 , B为乙腈;
梯度洗脱:0min10%B, 0※15min内 10※100%
B, 15※25min内 100%B;
流速:10mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:335nm;
进样量:20μL。
色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取九里香酮对照品 0.0108克 ,置 100mL
容量瓶中 ,加入适量甲醇 ,振荡溶解 ,再加甲醇至刻
度 ,摇匀 ,备用。
2.3　供试品溶液的制备
准确称取 5克牙膏样品于具塞锥形瓶中 ,加
30ml甲醇 ,使样品充分分散 ,超声波提取 30min,离
心沉淀 ,取上清液于 100mL圆底烧瓶中 , 50℃水浴
减压回收甲醇 ,浓缩提取液至 2 ～ 3mL,转移至 10mL
容量瓶 ,并以甲醇稀释至刻度 , 用 0.45μm滤膜过
滤 ,滤液为供试品溶液。
图 1　对照品 A和供试品 B的液相色谱图(1:九里香酮)
2.4　工作曲线的制备
精密量取 2.2九里香酮对照品储备液 1.0mL
于 10mL容量瓶中 ,以甲醇稀释至刻度 、摇匀 ,然后
精密吸取此溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0mL分
别置于 10mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 、摇匀 ,依
前述色谱条件进行测定 。以峰面积(Y)对浓度(X)
进行线性回归 ,得回归方程:
Y=79239002.6X+0.6552265
r=0.99996
结果表明 ,九里香酮浓度在 0.216 ～ 2.16μg/ml
与峰面良好的线性关系 。
2.5　精密度试验
取牙膏样品制备的供试品溶液 ,依前述色谱条
件连续进样 6次 ,测定九里香酮含量 ,其平均值为
1.78μg/g, RSD为 0.36%,结果见表 1。
表 1 精密度试验结果
编号 九里香酮含量(μg/g)
1 1.77
2 1.78
3 1.77
4 1.78
5 1.79
6 1.78
平均值 1.78
RSD 0.36%
2.6　稳定性试验
取牙膏样品制备的供试品溶液 ,依前述的色谱
条件在 0、0.5、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、24h分别进样
检测九里香酮含量 。结果显示 ,供试品溶液 4小时
内测定结果稳定 , 4小时后略有下降 。平均值为
1.76μg/g, RSD为 1.61%,结果见表 2。
　　　
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黄光伟 , 等:HPLC法测定牙膏中九里香酮的含量
　　
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表 2 稳定性试验结果
时间(h) 九里香酮含量(μg/g)
0 1.78
0.5 1.78
1 1.78
2 1.78
4 1.77
6 1.73
8 1.72
24 1.71
平均值 1.76
RSD 1.61%
2.7　重现性试验
取同一支牙膏平行称取样品 6份 ,依照 2.3分
别制备供试品溶液 ,进样测定。计算得牙膏样品中
九里香酮的平均含量为 1.66μg/g, RSD为 0.57%,
表明分析方法重现性良好 。结果见表 3。
表 3 重现性试验结果
编号 九里香酮含量(μg/g)
1 1.66
2 1.66
3 1.65
4 1.65
5 1.68
6 1.66
平均值 1.66
RSD 0.57%
2.8　回收率试验
精密称取已知含量的牙膏 6份行样 ,分别精密
加入不同量的九里香酮对照品 ,搅匀 ,依照 2.3制成
供试品溶液 ,按上述方法进行测定 ,并计算加样回收
率 ,结果平均回为 97.18%,表明本方法准确可靠 。
结果见表 4。
表 4 回收率试验结果
编号 九里香酮含量(μg)
加九里香
酮(μg)
测得九里
香酮(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
1 8.54 3.24 11.77 99.53
2 8.56 3.24 11.80 100.18
3 8.60 5.40 13.82 96.79
4 8.57 5.40 13.63 93.68
5 8.56 8.64 16.83 95.74
6 8.65 8.64 17.05 97.19
97.18
2.9　样品的测定
取牙膏样品 6批 ,按 2.3方法制备供试品溶液
测定 ,每批测量三次 ,计算牙膏中九里香酮含量 ,结
果见表 5。
表 5 牙膏中九里香酮的测定结果
编号 九里香酮含量(μg/g) RSD(%)
1 1.77 0.31
2 1.67 0.33
3 1.71 0.35
4 1.70 0.28
5 1.68 0.33
6 1.75 0.29
　　3　讨论
3.1　最佳洗脱条件
通过以甲醇 、乙腈分别和水 、0.3%磷酸作不同
比例等度洗脱和不同时间的梯度洗脱试验 ,得出前
述最佳洗脱条件。在此条件下 ,理论踏板数按九里
香酮峰计算大于 33000,分离度大于 2.3。具有良好
的分离效果。
3.2　检测波长的选择
查看供试品以及九里香酮对照品的三维图谱 ,
在 210、242、266、335nm处九里香酮均有吸收 。本
实验选择受供试品中杂峰干扰最小的 335nm作为
检测波长 。
3.3　稳定试验
试验结果表明 ,供试品溶液中的九里香酮含量
4小时内具有较好的稳定性 , 4小时后略有下降 ,最
好在 4小时内检测完毕。
3.4　本法的优点
本法测定两面针中药牙膏中九里香酮含量 ,结
果准确可靠 ,且处理方法简便 ,流动相组成简单 ,可
用于牙膏的质量控制。
参考文献
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(收稿日期:2009年 10月 28日)