全 文 ：广 东 化 工 2016年 第 8期
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乌榄主要致病菌的分离纯化鉴定

郭艳峰
(中山火炬职业技术学院 生物医药系，广东 中山 528436)


[摘 要]乌榄榄果皮薄，易失水易遭病菌侵染，导致腐烂变质。对乌榄致病菌进行分离纯化，明确乌榄致病菌，开发针对性的抑菌剂，对于
降低乌榄的腐烂率有极大的帮助。通过对 PDA上菌落形态和菌落镜检平板培养的菌体形态特征的观察，鉴定出导致乌榄腐败的主要致病菌为毛
霉属的不明毛霉。
[关键词]乌榄；致病菌；毛霉属
[中图分类号]S379.2 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2016)08-0074-01

Separation and Purification of Pathogenic Fungi on Canarium pimela


Guo Yanfeng
(Department of Biomedicine, Zhongshan Torch Polytechnic, Zhongshan 528436, China)


Abstract: The fruit skin of Canarium pimela is thin and easily infected by germs infect. Separate and puridicate the pathogenic fungi of C. pimela which is easy
to decayed. The colonial morphology on PDA medium was observated, at the same time, the morphology of colonial fungal hyphae was observed under optical
microscope. The results indicated that the main pathogenic fungi of C. pimela was Mucor mambiguus.
Keywords: Canarium pimela；pathogenic fungi；Mucor

乌榄(Canarium pimela Leenh.)，俗称黑榄，又名木威子，是
橄榄科(Burseraceae)常绿大乔木，主产于我国广东、广西、海南、
云南，广东资源丰富，广泛分布于增城、中山、佛山、粤西等地
[1]。乌榄果为岭南果品之一，果实营养丰富，具有很高的营养价
值、药用价值和经济价值。其维生素 C的含量很高，几乎是柚子
维 C 含量的 2倍，番石榴的 1倍，苹果的 16倍。乌榄果是民间
常用无毒药物之一，具有止血、利水、解毒之功效。主治内伤吐
血，咳嗽痰血，水肿，乳痈，外伤出血。近年来发现乌榄果水煎
提取物具有降血压[2]和高效去除自由基，延缓衰老的作用[3]。除此
之外，果肉可作菜肴、可榨油，榄仁可用作点心的配料、榨油，
榄核可用于雕刻各艺术品、炼制活性炭等[4]。然而乌榄榄果皮薄，
易失水易遭病菌侵染，导致腐烂变质，采后直接露置于空气中 7
天后烂果率达 25 %。贮藏难限制了乌榄的进一步开发及深加工，
烂果、贮藏期短成为限制乌榄经济效益的瓶颈。明确乌榄致病菌，
开发针对性的抑菌剂，对于降低乌榄的腐烂率有极大的帮助。本
研究以期对乌榄致病菌进行分离纯化，并根据致病菌的形态特征
对其进行鉴别。
1 材料与方法
1.1 乌榄(Canarium pimela Leenh.)
购于广州市增城区，选取大小均一，表面无机械撞伤，无病
虫害，成熟度基本一致的乌榄果。
1.2 方法
1.2.1 病原菌分离
选择自然发病的果实，在病健交接处，取 5 mm×5 mm的小
方块，置 70 %的乙醇浸泡 1 min，再放入 2 %的次氯酸钠溶液中
消毒 3 min后，用无菌水清洗 3~5次，无菌水清洗后在超净工作
台上分别接种于细菌培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)和真菌培养基
(马铃薯蔗糖斜面培养基)，同时以未接种的培养基作空白对照，
倒置培养于 28 ℃恒温培养箱培养 12 h后进行纯化。
1.2.2 病原菌菌种的纯化
待菌丝长出，挑取于培养皿中划线分离。在单菌落处挑取菌
丝进行再次分离转接培养，得到比较纯净的菌种。将纯化好的菌
种转至斜面培养，待其长好后，放入 4 ℃冰箱保存，每 2月转接
一次。
1.2.3 菌种鉴定
初鉴定：观察致病菌在平板上的菌落特征(菌落大小、颜色、
质地、边缘等)。显微镜下观察致病菌的个体特征，进行初步鉴定。
病原菌形态学分类鉴定：选取表面无伤干净的榄果清水洗净后，
用酒精、2 %的次氯酸钠溶液处理，再用灭菌水淋洗干净。将纯化
后的菌种用移植针移植在榄果上，将接种后的榄果保存在 28 ℃
2~3 d，接种的菌种在榄果上进行生长，观察感病材料外观发病症
状及用棉兰染色液染色后观察病原菌显微形态，参照真菌形态学
鉴定手册等方法进一步鉴定分离所得致病菌的种类。
2 结果与分析
未被病菌感染的乌榄基部呈深红色(图 1 左)，由于树枝的脱
离，留下的切口很容易被霉菌感染(图 1 右)。结果显示，乌榄的
致病菌主要是真菌。经 PDA平板的真菌纯化 3次后，将纯化后的
菌再接种到好果上，3~4 d后好果表面开始长白色菌，一周后整个
果全被厚厚的菌包裹，该现象及菌的生长特性与发病果的菌形态
一致。



图 1 乌榄果的基部(左，正常果基部；右，感染果基部)
Fig.1 The fruit base of Canarium pimela (the left picture: the
normal fruit base; the right picture: the infected fruit)

通过对 PDA上菌落形态观察发现(表 1)：在 28 ℃培养 12 h
后，菌落质地疏松，菌丝绒毛状，菌丛柔软，菌丛高 1~2 mm，
白色；平板培养 24 h后，菌落表现半球形分生孢子层，菌落边缘
完整，初为白色的，后转变为灰褐色。菌落镜检平板培养基上白
色，在显微镜下对真菌进行观察(表 1)，结果显示菌丝无假根，菌
丝不分枝，分生孢子梗无色，不成束，繁密成层。孢子囊长宽比
2∶1。参照真菌形态学鉴定手册对致病霉菌进行鉴定，判断乌榄
的主要致病菌为毛霉属易脆毛霉组的不明毛霉(Mucor mambiguus
Vuillemin)。
(下转第 73页)
[收稿日期] 2016-03-08
[基金项目] 中山市科技计划项目(2013A3FC0352)
[作者简介] 郭艳峰(1984-)，女，博士，主要研究方向为植物功能食品开发。
2016年 第 8期 广 东 化 工
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(c)窑气带入热差值△Q3：每吨纯碱窑气带入热 Q3 取 21230
KJ/t。
△Q3=(40.96-35.26)×21230=121011 KJ
(d)碳化塔内反应热差值△Q4：
△Q4=(40.96-35.26)×1734247=9885208 KJ
△Q 入=△Q1+△Q2+△Q3+△Q4=15805476 KJ
②碳化塔带出总热量差值：
(a)出碱液带出热量差值△Q5：(密度：1127，当量：5.8 m3/t，
比热容 3.264 kJ/kg℃)
△Q5=(40.96×32-35.26×30.2) ×5.8×1127×3.264=5245750 KJ
(b)其它带出热量差值△Q6：
△Q6=(40.96-35.26)×351996=2006377 KJ
△Q 出=△Q5+△Q6=7252127 KJ
(c)清洗前后同时期总换热差值：
△Q=△Q 入-△Q 出=15805476-7252127=8553349 KJ
通过表 1及碳化塔热量衡算可以看出：
①对于碳化塔而言，作业的塔数目、换热面积一样，清洗后
比清洗前同时期单位小时多移走热量 8553349 KJ，清洗后循环水
温比清洗前低 1.3 ℃，在环境温度一致的情况下，碳化塔水箱换
热效果和循环水池换热效果比清洗前好。
②清洗后的氨盐水量比清洗前大，氨盐水温度较清洗前同期
低 0.4℃，表明吸收系统换热效果比清洗前同期好。
(3)化学清洗过程金属材质的腐蚀速度，见表 2。

表 2 化学清洗过程金属材质的腐蚀速度
Tab.2 Metal materials speed in chemical cleaning process
试片编号 试片材质 清洗前重/g 清洗后重/g 失重/g 腐蚀速度/(g·(m2·h)-1) 标准值
2621 碳钢 12.6277 12.4734 0.1543 0.215 ＜6
2622 12.7182 12.5793 0.1389
3942 黄铜 12.5665 12.5466 0.0199 0.029 ＜2 3945 12.4181 12.3983 0.0198
3634 紫铜 14.2812 14.2701 0.0111 0.016
517 不锈钢 12.7721 12.7721 0 0 ＜2
519 12.7755 12.7755 0
注：(1)清洗时间 341.5小时，监测试片面积 20 cm2；(2)监测挂片靠近加药口处，计算结果比实际腐蚀速度偏高。

表 2的结果表明：化学清洗过程中碳钢、铜、不锈钢的腐蚀
速度分别为 0.215 g/m2·h、0.029 g/m2·h、0 g/m2·h，远低于 HG/T
2387-92《工业设备化学清洗质量标准》要求。
3 结论
本次不停机循环冷却水系统清洗，能有效清除冷凝管内的污
垢沉积，提高碳化塔水箱换热效果，降低氨盐水温度，改善换热
器的传热效率，从而保证了设备的安全、稳定运行，为保证循环
冷却水日常维护的效果，提供了有利条件，达到了预期的目的。

参考文献
[1]周本省主编．工业水处理技术(第二版)[M]．化学工业出版社，2007：
168-169．
[2]周本省．工业冷却水系统中金属的腐蚀与防护[M]．化学工业出版社，
1993：207．
[3]李本高，朱泽华，李永存．工业水处理技术(第六册)[M]．中国石化出
版社，2002：255．

(本文文献格式：蔡启浩，谢谦，文明通．不停车化学清洗在纯碱
循环冷却水系统中的应用[J]．广东化工，2016，43(8)：72-73)





(上接第 74页)
表 1 乌榄致病真菌形态特征及鉴定结果
Tab.1 Pathogenic fungi morphological characteristics and the appraisal result in Canarium pimela
PDA上菌落形态 显微镜观察结果 结论
在 28 ℃培养 12 h后，菌落质地疏松，菌丝绒毛状，菌丛柔软，
菌丛高 1~2 mm，白色；平板培养 24 h后，菌落表现半球形分生
孢子层，菌落边缘完整，初为白色的，后转变为灰褐色。
菌落镜检平板培养基上白色，菌丝无假
根，菌丝不分枝，分生孢子梗无色，不
成束，繁密成层。孢子囊长宽比 2:1。
根据以上特征，判定该病原物为
毛霉属易脆毛霉组的不明毛霉
(Mucor mambiguus Vuillemin)。

3 结论
通过对乌榄致病菌的分离纯化，结果显示乌榄腐烂主要是真
菌感染引起，经过对 PDA培养基上菌落形态及显微镜下真菌特征
观察，发现该菌的形态特征与毛霉属易脆毛霉组的不明毛霉的形
态特征一致。发病初期，果实基本有白色的菌丝，随后菌丝会向
果体蔓延。在明确了乌榄主要的致病菌的基础上，开发针对性的
抑菌剂，对于降低乌榄的腐烂率有极大的帮助。

参考文献
[1]张坤泉，郭铭坚，肖茂瑕，等．浅谈乌榄药用的研究进展[J]．中国实用
医药，2008，20：183-184．
[2]董艳芬，梁燕玲，罗艳，等．乌榄果降压作用的实验研究[J]．医学理论
与实践，2006，8：880-882．
[3]张树球，农嵩，李朝敢，等．乌榄等对氧自由基清除率的影响[J]．中国
老年学杂志，2001，3：237-238．
[4]钟桂红，丁冬纯，周燕芳．乌榄果及其种子营养成分分析[J]．江西化工，
2008，3：81-82．

(本文文献格式：郭艳峰．乌榄主要致病菌的分离纯化鉴定[J]．广
东化工，2016，43(8)：74)