全 文 ：高效液相色谱法测定飞扬草中槲皮苷的含量
马春婷 ,伍思强
(肇庆市药品检验所 ,广东 肇庆 526040)
摘要:目的 探讨飞扬草中槲皮苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法 , Dikma-C18(250 mm×4.6 mm, 5μm)柱 ,流动相为乙腈
-0.1%磷酸溶液(25∶75), 检测波长为 256 nm, 流速为 1.0 ml/min。结果 槲皮苷进样量在 5.04 ～ 75.6 μg/ml范围内呈良好的线性
关系 , r=0.9997;平均回收率 103.0%,相对标准偏差值(RSD)=1.2%(n=6)。结论 该方法快速简便 ,稳定可靠 , 专属性强。
关键词:飞扬草;槲皮苷;高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　　　　　文献标志码:A　　　　　　　文章编号:1673-4610(2009)10-0026-02
作者简介:马春婷 ,主管药师 , Tel:0758-2282083, E-mail:machunting@gdda.gov.cn
ContentDeterminationofQuercitrininHerbaEuphrbiaeHirtaebyHPLC
MAChun-ting, WUSi-qiang
(ZhaoqingInstituteforDrugControl, Zhaoqing, Guangdong526040, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofthecontentofQuercitrininHerbaEuphrbiaeHirtae
byHPLC.MethodsDikamC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)wasused, theacetonitrile-0.1% phosphoricacid
(25∶75), thedeterminationwavelengthwasat256nm, andtheflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrailitycurves
showedgoodlinearityintherangeof5.04 ～ 75.6μg/ml(r=0.9997), andtheaveragerecoverywas103.0%, RSD=1.
2% (n=6).ConclusionThemethodissimple, accurate, reproducible, andspecificity.
Keywords:HerbaEuphrbiaeHirtae;Quercitrin;HPLC
　　飞扬草为大戟科植物飞扬草的带根全草。飞扬草
味淡 ,微涩 ,无臭 [ 1] 。有清热解毒 ,利湿止痒 ,通乳的作
用 [ 1, 2] 。为广东民间常用中草药 ,多作凉茶原料。飞扬
草收载于 1977版 《中国药典 》一部 ,质量标准只有性
状 ,无专属性鉴别 ,其质量标准难于控制本品质量 。据
文献报道飞扬草主要含黄鼠李苷 、槲皮苷等黄酮类和
蒲公英醇等三萜类成分[ 3, 4] ,本研究选择黄酮类成分进
行定量研究 ,采用高效液相色谱(HPLC)法测定飞扬草
中槲皮苷的含量 ,用以控制飞扬草的质量 。
1　仪器与试药
Agilent1200系列液相色谱仪(自动进样分析);槲
皮苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号为 111538
-200403,含量测定用)。乙腈(Fisher色谱纯),水(重
蒸水)其他试剂均为分析纯 。飞扬草为我所收集 8批
市场流通商品。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 Dikma-C18(250 mm×4.6mm, 5μm);流
动相为乙腈 -0.1%磷酸溶液(25∶75);检测波长为 256
nm;流速为 1.0 ml/min;进样量为 10 μl[ 5] 。理论塔板
数按槲皮苷峰计算应不低于 3000。对照品与供试品
HPLC色谱图见图 1、2。
图 1　槲皮苷对照品 HPLC色谱图
2.2　对照品溶液制备
取槲皮苷对照品适量 ,精密称定 ,加乙醇溶解稀释 ,
制成每 1ml含槲皮苷 25μg的溶液 ,作为对照品溶液。
2.3　供试品溶液制备
取本品粉末 1 g,精密称定 ,至具塞三角瓶中 ,精密
加入乙醇 25 ml,称定重量 ,超声处理 30 min,放冷 ,加
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PharmacyToday· 2009 10 Vol.19No.10·
乙醇补足减失的重量 ,用微孔滤膜(孔径 0.45 μm)滤
过取续滤液即得 。
图 2　飞扬草供试品 HPLC色谱图
2.4　线性关系考察
取经五氧化二磷减压干燥 24 h的槲皮苷对照品适
量 ,精密称定 ,加乙醇制成每 1ml含 126 μg的溶液;精
密吸取 1, 2, 5 , 10 , 15 ml,分别加乙醇稀释至 25 ml,按
上述色谱条件测定峰面积 ,以进样浓度(μg/ml)对峰面
积(Y)进行线性回归 ,求得回归方程:Y=2594.3597X+
21.155243, r=0.99972。槲皮苷在 5.04 ～ 75.6 μg/ml范
围内呈良好的线性关系。
2.5　仪器精密度
取同一供试品溶液 ,重复进样 6次 ,测定槲皮苷的峰
面积 ,结果 RSD=0.5% (n=6),表明仪器精密度良好 。
2.6　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,间隔一定时间测定 1次(0, 2,
5, 8, 24 h)结果 RSD=1.7% (n=5),表明供试品溶液
在 24h内基本稳定 。
2.7　重复性试验
取同一飞扬草药材样品(编号 2)6份 ,按 2.3供试
品溶液制备项下方法制备供试品溶液 ,依法测定 ,结果
槲皮苷平均含量为 0.10%, RSD=1.2%(n=6),表明
方法重现性好。
2.8　加样回收率试验
精密吸取浓度为 0.531 mg/ml的槲皮苷对照品 ,
置具塞三角瓶中 , 水浴蒸干 , 备用;取已知含量
(0.10%)的飞扬草药材(编号 2)约 0.5 g,精密称定 ,
按 2.3供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液 ,依
法测定并计算回收率 , 结果平均回收率为 103.0%,
RSD=1.0%(n=6),见表 1。
2.9　样品含量测定
取 8批飞扬草药材(经鉴定),按 2.3供试品溶液
的制备项下所述方法 ,制备供试品溶液 ,分别精密吸取
供试品溶液与对照品溶液各 10 μl,进样 ,记录色谱图 ,
测定峰面积 ,计算 ,结果见表 2。
表 1　加样回收率试验结果
取样量
(g)
样品含
量 (mg)
加入量
(mg)
测得总
量 (mg)
回收率
(%)
平均回
收率 (%)
RSD
(%)
0.5181 0.5181 0.5310 1.0613 102.29
103.0 1.0
0.5295 0.5295 0.5310 1.0830 104.24
0.5163 0.5163 0.5310 1.0553 101.50
0.5107 0.5107 0.5310 1.0590 103.26
0.5012 0.5012 0.5310 1.0458 102.55
0.5417 0.5417 0.5310 1.0933 103.87
表 2　样品测定结果
样品
编号 产地 来源
槲皮苷
含量(%)
1 广西 河南聚仁中药饮片有限公司 0.144
2 广西 广东致信中药饮片有限公司 0.100
3 广西 广东致信中药饮片有限公司 0.090
4 广东 /清远 肇庆邦健医药有限公司　　 0.054
5 广西 广西中药材市场　　　　　 0.107
6 广东 肇庆邦健医药有限公司 　 0.179
7 / 广东和翔制药有限公司 　 0.084
8 / 肇庆仁济医药有限公司 　 0.083
3　讨论
3.1　检测波长的选择
取每 1ml含槲皮苷 25 μg的对照品溶液 ,用 UV-
1601紫外分光光度计(岛津)在 200 ～ 400 nm波长处扫
描 ,槲皮苷在 256nm波长处有最大吸收 ,故选择 256 nm
为测定波长[ 5] 。
3.2　不同提取溶剂的考察
取飞扬草 3批(编号为 1、2、3),用甲醇作溶剂 ,按
2.3供试品溶液的制备项下方法制备供试品溶液 ,依法
测定 ,结果测得槲皮苷含量分别为 0.151%、0.104%、
0.095%。与以乙醇为提取溶剂时无显著差异 。
3.3　溶剂用量考察
取同一飞扬草药材样品(编号 2)3份 ,分别加入乙
醇 50 ml,按 2.3供试品溶液制备项下方法制备供试品溶
液 ,依法测定 ,结果槲皮苷平均含量为 0.107%、0.103%、
0.105%。与以 25ml乙醇为提取溶剂无显著差异。
3.4　以其有效成分槲皮苷含量为指标 ,通过对多批市
场流通飞扬草测定 ,了解飞扬草的内在质量情况 ,发现
不同批次飞扬草的槲皮苷含量相差较大 ,其原因是产
地差异或加工炮制不同 ,需进一步探讨 。
3.5　进样浓度太大时(100 μg/ml),槲皮苷峰会出现
前延现象 ,柱效降低 。
(下转第 37页)
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· 2009年 10月第 19卷第 10期 · 今日药学
3　讨论
在 3年分离的 1185株葡萄球菌细菌中均未检出万
古霉素不敏感株 ,其中 MRSA142株 , 3年检出率分别为
56.5%、52.4%、 51.1%,低于同地区的部分医院 ,而
MRCNS847株 , 3 年检出率分别为 100%、 94.8%、
88.7%,两者均呈下降的趋势(P<0.05),但依然远高
于国内其他医院 [ 1, 2] 。在 MRSA与 MSSA、MRCNS与
MSCNS对比中 ,除对万古霉素和呋喃妥恩的耐药性无
明显差别外 ,其余多种药物前者的耐药率明显高于后
者(P<0.05),说明耐甲氧西林的葡萄球菌可能存在较
高的多重耐药性 ,这与国内部分学者的发现一致 [ 3] ,为
此对 MRS、MSS的检测对知道临床用药有重要的意义。
纵观 3年 , MRSA和 MSSA对于环丙沙星 、诺氟沙
星 、左旋氧氟沙星等喹诺酮类以及头孢噻吩 、头孢唑啉
等头孢菌素类的敏感率均有一定程度的下降 (P<
0.05),而对青霉素 G等 β -内酰胺类以及阿莫西林 /克
拉维酸的敏感率有一定的上升(P<0.05),这可能与近
两年中山三院喹诺酮及头孢菌属类抗生素大量广泛应
用 ,而除头孢菌素类外 ,其他 β-内酰胺类应用相对较少
有一定的关系。而对于 MRCNS以及 MSCNS的 3年的
敏感率除诺氟沙星等少数药物外 ,其余药物均基本处
于同一水平 。另外在与张永标等于 2002 ～ 2003年对
中山三院临床分离菌耐药性分析中发现[ 2] , 在经历
2005年的高峰后 , 2007年葡萄球菌属细菌的耐药性基
本回到 2002 ～ 2003年的水平 ,这可能与近两年人们对
抗生素应用的重视有一定关系。
同时必须指出 ,由于目前 MRS的检出率以及葡萄
球菌属细菌的耐药性依然较高 ,为此 ,对人们的使用抗
生素教育应进一步加强 ,这将对进一步降低细菌的耐
药性或防止细菌的耐药性的升高有重要的意义。
参考文献
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院细菌耐药性监测.中国感染与化疗杂志 , 2007, 7(4):
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现代预防医学 , 2007, 34(6):1154-1155.
4张永标 , 张扣兴 , 赵锋 , 等.2002-2003年我院临床分离菌
的分布与耐药性分析.中国抗感染化疗杂志 , 2005, 5(1):
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(收稿日期:2008-12-10)
(上接第 27页)
参考文献
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1977.67.
2中国医学科学院药物研究所.中药志(第四册).北京:人民
卫生出版社 , 1961.171-175.
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人民卫生出版社 , 1975.71.
5俞建平 , 张文婷 , 祝明.高效液相色谱法测定鱼腥草中槲皮
苷的含量.医药导报 , 2008, 27(3):331.
(收稿日期:2009-04-07)
粤鄂湘医院药学学术交流会在武汉召开
为了提高医院药学管理水平 ,加强学术交流和信息交汇 ,提高服务质量 , 9月 25日下午 ,在湖北武汉召开了粤鄂湘
医院药学学术交流会;来自三地医院药学学术界同仁 40多人 ,共聚一堂 ,听取了三个专题学术报告 ,并就医院药学的热
点问题进行了交流和讨论。
三个报告分别为:广东医院药学发展现状及未来(中山大学附属第一医院药学部陈孝主任),药物经济学在新医改
中的应用(湖南中南大学湘雅二医院药剂科彭六保主任),超微粉碎技术在制剂中的应用(湖北武汉同济医院药剂科杜
光主任)。
会议学术气氛浓厚 ,讨论热烈 ,与会代表深感受益菲浅;并希望三地药学会今后多组织一些省际之间的区域性交流
活动。武汉市药学会陈冠荣理事长到会致辞 ,诺华公司协助会议。
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· 2009年 10月第 19卷第 10期 · 今日药学