全 文 ：第 39卷第 5期
2009年 10月 　　　　　　　　　　 　　　 日 用 化学 工 业ChinaSurfactantDetergent＆Cosmetics　　　　　　 　　　　　Vol.39 No.5Oct.2009
收稿日期:2009-01-20;修回日期:2009-05-19
基金项目:广西 “新世纪十百千人才工程 ”专项资金资助项目(2004228)
作者简介:黄光伟(1966-),男(汉),广西北流人 ,高级工程师 ,学士 ,电话:(0772)2068070, E-mail:huanggw@lmz.com.cn。
高效液相色谱法测定牙膏中九里香酮的量
黄光伟 ,韦宝韩 ,黄晓燕 ,卢凯玲
(柳州两面针股份有限公司 , 广西　柳州　545001)
摘要:建立了用高效液相色谱(HPLC)法测定牙膏中九里香酮(5, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮)质量分数的方法。较佳色谱
条件为:采用 AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(Analytical4.6mm×250 mm5-Micron)色谱柱;流动相 A为质量分数
0.3%磷酸 , B为乙腈;梯度洗脱;流速为 1.0mL/min;柱温为 40℃;检测波长为 335nm。结果表明 , 九里香酮质量浓度在
0.216 μg/mL～ 2.16 μg/mL时 ,质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 96),平均回收率为 97.18%。
关键词:牙膏;HPLC法;九里香酮
中图分类号:TQ658.4+1;O657.7+2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-1803(2009)05-0365-03
Determinationof5, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavonein
toothpastebyHPLC
HUANGGuang-wei, WEIBao-han, HUANGXiao-yan, LUKai-ling
(LiuzhouLiangmianzhenCo., Ltd., Liuzhou, Guangxi　545001, China)
Abstract:A HPLCmethodfordeterminingmassconcentrationof5, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavonein
toothpastewasestablished.Suitableconditionswereidentified.TheextractwasanalyzedonanAgilent
ZORBAXEclipseXDB-C18 column(Analytical4.6 mm×250 mm5-Micron).MobilephaseAismass
fraction0.3% phosphoricacidandmobilephaseB isacetonitrile.Flow rateofgradientelutionis
1.0 mL/min.Columntemperatureis40℃.Detectionwavelengthisλ=335 nm.Theresultsshowedthatmass
concentrationof5, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavonewithinrangesof0.216 μg/mL～ 2.16μg/mLdisplaysgood
linearityvs.thepeakarea(r=0.999 96)andaveragerecoveryachieves97.18%.
Keywords:toothpaste;HPLC;5, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavone
　　九里香为芸香科植物九里香 (Murrayaexotical
L.)和千里香(MurayapaniculataL.jack)的干燥叶和
带叶嫩枝 [ 1] 。现代药理研究证明 ,九里香具有抗菌 、
消炎 、解痉 、局麻及增强免疫等功能[ 2, 3] ,其叶中含有
黄酮 、香豆素 、挥发油及生物碱等多种化学成分 ,其中
酮类化合物为主要功效成分 [ 4 -8] 。九里香提取物是两
面针中药牙膏的功效成分之一 ,按照国家发改委去年
发布的功效型牙膏国家标准的要求 ,牙膏中的活性成
分需定性或定量检测。已有文献 [ 2]报道九里香酮质
量分数的测定 ,实验用甲醇 -水作流动相 ,且采用等度
洗脱法 ,但测定试样为药品 ,九里香酮质量分数比较
高。对于牙膏样品 ,由于九里香提取物的添加量相对
较少 ,而且牙膏是由十几种原料组成的混合物 ,其中包
含有表面活性剂和香精等多种有机成分 ,对分析干扰
很大 。实验采用 HPLC法 ,以九里香提取物中的主要
活性成分九里香酮为指标 ,测定牙膏中九里香酮的质
量分数 ,为达到理想的分离效果 ,作者采用质量分数
0.3%磷酸 -乙腈作为流动相 ,并以梯度洗脱的方法进
行分析 ,通过准确定量牙膏中该成分的质量分数 ,为两
面针中药牙膏建立相应的质量控制方法提供依据 。
1　实验部分
1.1　仪器和试剂
Agilent1200高效液相色谱仪系统(配有色谱工作
站和 DAD检测器),美国 Agilent公司;ANDHM-200
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DOI :10.13218/j.cnki.csdc.2009.05.015
分析与检测 　　　　　　　　　　　　日　用　化　学　工　业　　　　　　　　　　　　　　　　第 39卷　
电子天平 , 日本 AND公司;As3120 超声清洗仪 ,
Automatic科学仪器公司;LG10-2.4A离心机 ,北京医
用离心机厂;RE52-98旋转蒸发器 ,上海亚荣生化仪
器厂 。
九里香酮对照品 ,质量分数≥98%,中国药品生物
制品检定所;牙膏 , 120 g/支 ,柳州两面针股份有限公
司生产;乙腈 ,色谱纯 ,国药集团化学试剂有限公司;甲
醇 ,色谱纯 , Fisher公司;磷酸 ,分析纯 ,广州化学试剂
厂;超纯水 ,电阻率 18MΨ·cm。
1.2　实验方法
1.2.1　色谱条件
色谱柱:AgilentZORBAX EclipseXDB-C18
(Analytical4.6 mm×250 mm5-Micron);流动相:A
(质量分数 0.3%磷酸)+B(乙腈);梯度洗脱:0 min为
质量分数 10%B, 0 ～ 15 min为质量分数 10% ～ 100%
B, 15 min～ 25 min内为质量分数 100%B;流速
1.0 mL/min;柱温 40 ℃;检测波长 335 nm;进样量
20 μL。
1.2.2　溶液的制备
对照品溶液的制备:精密称取九里香酮对照品
0.010 8g,置于 100 mL容量瓶中 ,加入适量甲醇 ,振荡
溶解 ,再加甲醇至刻度 ,摇匀 ,备用 。
供试品溶液的制备:准确称取 5.00g牙膏样品于
具塞锥形瓶中 ,加 30 mL甲醇 ,使样品充分分散 ,超声
波提取 30 min,离心沉淀 ,取上清液于 100mL圆底烧
瓶中 , 50 ℃水浴减压回收甲醇 ,浓缩提取液至 2 mL～
3mL,转移至 10 mL容量瓶 ,并以甲醇稀释至刻度 ,用
0.45 μm滤膜过滤 ,滤液为供试品溶液 。
2　结果与讨论
2.1　色谱条件的选择
三维谱图显示九里香酮在 210 nm, 242 nm,
264 nm和 335 nm波长处均有吸收 ,结合 DAD等吸收
图优化色谱图后 ,实验选择受流动相紫外吸收干扰小
的 335 nm作为检测波长。
牙膏中的化学成分比较复杂 ,特别是其中的表面
活性剂和香精对分析干忧较大。为了使样品中的九里
香酮得到较好的分离效果 ,实验选用梯度洗脱方法进
行分析。柱温可以选择室温 ,但为了避免测定因环境 、
季节变化所造成的影响 ,选择柱温为 40 ℃。
采用 1.2.1色谱条件 ,分析对照品和供试品的溶
液 ,结果见图 1。
图 1　对照品和供试品的液相色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsofreferencesolutionandsample
solution
2.2　工作曲线
精密量取 1.2.2中配制的九里香酮对照品储备液
1.0 mL于 10mL容量瓶中 ,以甲醇稀释至刻度 、摇匀 ,
然后精密吸取此溶液 0.2 mL, 0.4 mL, 0.6 mL,
0.8 mL, 1.0mL, 2.0mL分别置于 10mL容量瓶中 ,用
甲醇稀释至刻度 、摇匀 ,依前述色谱条件进行测定 。以
峰面积(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归 ,得回归方
程:A=79 239 002.6ρ+0.655 226 5, r=0.999 96。结果
表明 ,九里香酮质量浓度在 0.216μg/mL～ 2.16μg/mL
与峰面积呈良好线性关系。
2.3　精密度试验
取牙膏样品制备的供试品溶液 ,依前述色谱条件
连续进样 6次 , 测定九里香酮质量分数 ,平均值为
1.78 μg/g, RSD为 0.36%。结果见表 1。
表 1　精密度试验结果
Tab.1　Precisiontestresults
w(九里香酮)/μg· g-1
1 2 3 4 5 6
平均值 RSD/%
1.77 1.78 1.77 1.78 1.79 1.78 1.78 0.36
·366·
　第 5期　　　　　　 　　　黄光伟等:高效液相色谱法测定牙膏中九里香酮的量　　　　　　　　 　　分析与检测
2.4　稳定性试验
取牙膏样品制备的供试品溶液 ,依前述的色谱条
件在溶液存放时间为 0, 0.5 h, 1.5 h, 2.0 h, 4.0 h,
6.0 h, 8.0 h, 24.0 h分别进样检测九里香酮质量分
数 ,结果显示 ,供试品溶液 4h内测定结果稳定 , 4 h后
略有下降 。平均值为 1.76 μg/g, RSD为 1.61%。结
果见表 2。
表 2　稳定性试验结果
Tab.2　Stabilitytestresults
w(九里香酮)/μg· g-1
0 0.5h 1.5 h 2.0h 4.0h 6.0h 8.0h24.0h
平均
值
RSD
/%
1.78 1.78 1.78 1.78 1.77 1.73 1.72 1.71 1.76 1.61
2.5　重复性试验
取同一支牙膏平行称取样品 6份 ,依照 1.2.2分
别制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算得牙膏样品中九里
香酮的平均质量分数为 1.66 μg/g, RSD为 0.57%,表
明分析方法重现性良好 。结果见表 3。
表 3　重现性试验结果
Tab.3　Reproducibilitytestresults
w(九里香酮)/μg· g-1
1 2 3 4 5 6
平均值 RSD/%
1.66 1.66 1.65 1.65 1.68 1.66 1.66 0.57
2.6　回收率试验
精密称取已知质量分数的牙膏 6份平行样 ,分别
精密加入不同量的九里香酮对照品 ,搅匀 ,依照 1.2.2
制成供试品溶液 ,按上述方法进行测定 ,并计算加样回
收率 。结果列于表 4,平均回收率 97.18%,表明方法
准确可靠 。
表 4　回收率试验结果
Tab.4　Recoverytestresults
编号 本底值/μg
加标量
/μg
测定结果
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
1 8.54 3.24 11.77 99.53
2 8.56 3.24 11.80 100.18
3 8.60 5.40 13.82 96.79
4 8.57 5.40 13.63 93.68
5 8.56 8.64 16.83 95.74
6 8.65 8.64 17.05 97.19 97.18
2.7　样品的测定
取牙膏样品 6批 ,制备供试品溶液进行测定 ,每批
测量 3次 ,计算牙膏中九里香酮的质量分数 ,结果列于
表 5。
表 5　牙膏中九里香酮的测定结果
Tab.5　Resultsofdeterminationofcontentof5, 7, 3′, 4′-tetrame-
thoxyflavoneintoothpaste(n=3)
编　号 w(九里香酮)/μg· g-1 RSD/%
1 1.77 0.31
2 1.67 0.33
3 1.71 0.35
4 1.70 0.28
5 1.68 0.33
6 1.75 0.29
3　结论
建立了用高效液相色谱法测定牙膏中九里香酮质
量分数的方法 。实验证明该方法的分离效果好 ,九里
香酮质量浓度在 0.216 μg/mL～ 2.16 μg/mL与峰面
积呈良好的线性关系(r=0.999 96),样品加标回收率
在 93.68% ～ 100.18%。用该法测定两面针中药牙膏
中九里香酮的质量分数 ,结果准确可靠 ,重现性好 ,而
且处理方法简便 ,流动相组成简单 ,可用于牙膏的质量
控制 。
参考文献:
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