全 文 ：黄、三七采用乙醇提取，有利于活性成分获得的同时降
低总固形物的出膏率，适合软胶囊内容物药物含量相
对比例小的特点，可以保证服用药物的治疗剂量。
3. 2 影响本方提取率的因素有很多，但结合药材主要
成分的特点，我们选择了用醇提取，并以加醇倍数、提
取次数提取时间和醇浓度这 4 个较为关键的因素作为
考察条件，每个因素 3 个水平，采用 L9(3
4)正交表安
排实验，制备样品溶液进行测定。
3. 3 正交试验考察优化提取工艺过程中，采用了多指
标的综合评价方法，这种分析方法既保证了数据指标
的全面性，又可根据各指标不同的影响程度进行权重
的分配，保证分析采样指标全面的同时，对于关键影响
因素又给予了相应的侧重，使分析结果为科学和客观，
保证提取工艺路线的优化合理，可信。
3. 4 由于进样量为 10μL，温度为 25℃时峰形不好，
所以将进样量改为 20μL，温度提高到 30℃，峰形得到
较好的改善。
参考文献:
［1］ 罗晓健，周书余，王丹蕾，等 . 均匀设计优化三七总皂苷提取工艺
［J］. 沈阳药科大学学报，2002，19(2) :122 － 124.
［2］ 何静雯，罗干明 . 正交试验法优选三七提取工艺［J］. 中成药，
2005，27(8) :964 － 966.
北豆根药材中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱
的定量分析
李广生1，李慧勇1，张清波1，2，仲昭庆1，王栋2，戴忠3，林林1
(1．黑龙江省食品药品检验检测所，黑龙江 哈尔滨 150001;
2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;3．中国药品生物制品检定所，北京 100050)
摘 要:目的:建立北豆根药材中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的定量分析方法。方法:采用高效液相色谱
法测定北豆根药材中蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的含量并制定含量限度要求。以十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂;乙腈 － 0． 05%三乙胺溶液(45∶ 55)为流动相;检测波长为 284nm。结果:北豆根药材中蝙蝠
葛碱和蝙蝠葛苏林碱线性范围分别为 0． 07 ～ 0． 7μg(r = 0. 9999) ，0． 0595 ～ 0. 595μg(r = 0． 9999) ;平均
回收率(n = 6)分别为 101． 3%(RSD = 1． 4%) ，102． 2%(RSD = 1． 2%) ;北豆根药材中蝙蝠葛碱和蝙蝠
葛苏林碱的总量应不低于 0． 60%。结论:本方法操作简便，结果准确，提高了北豆根药材的质量控制标
准，为其临床用药的安全性和有效性提供了质量保证。
关键词:北豆根;蝙蝠葛碱;蝙蝠葛苏林碱;定量分析
中图分类号:R286． 0 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2010)06 － 0065 － 03
基金项目:《中国药典》2010 版起草(YZ － 064)
作者简介:李广生(1982 －) ，男，药师，主要研究方向:中药质量分析与
控制。
通讯作者:张清波(1963 －) ，男，主任药师，教授，主要研究方向:中药质
量分析与控制。
收稿日期:2010 － 01 － 25
修回日期:2010 － 02 － 15
北豆根药材为防己科植物蝙蝠葛(Menispermum
dauricum DC．)的干燥根茎。为《中国药典》收载品种，
具有清热解毒，祛风止痛之功效，主要用于咽喉肿痛，
肠炎痢疾，风湿痹痛。根据 2010 年版《中国药典》的
要求对其增加了含量测定项，具体情况如下。
1 试药与仪器
岛津 LC －2010A 高效液相色谱仪(日本，岛津公
司) ，岛津 LC － 2010CHT 紫外可见检测器，LCsolution
工作站，CP225D型电子天平(北京赛多利斯仪器系统
有限公司) ，BRANSON B3500S － DTH 型超声波清洗
器。
对照品蝙蝠葛碱与蝙蝠葛苏林碱均为自制［1］，
经1H NMR和13C NMR 鉴定结构，HPLC 检验其纯度，
面积归一化法计算各对照品的含量均在 98%以上，符
合对照品纯度要求;乙腈为色谱纯;水为自制纯化水;
三乙胺、甲醇均为为分析纯。
北豆根药材 4 批，经黑龙江省药品检验所何丽老
师鉴定 3 批为北豆根药材，即防己科植物蝙蝠葛
(Menispermum dauricum DC．)的干燥根茎，另 1 批被
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鉴定为伪品。
2 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈 －
0. 05%三乙胺溶液(45 ∶ 55)为流动相;检测波长为
284nm。
3 溶液的制备
3． 1 对照品溶液 分别称取对照品蝙蝠葛碱 14mg，
蝙蝠葛苏林碱 11． 9mg，置同一 100mL 量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，再精密量取 25mL置 100mL量瓶中加甲
醇至刻度，摇匀，每 1mL 中含蝙蝠葛碱 0． 035mg，含蝙
蝠葛苏林碱 0． 02975mg(临用新制，避光保存)。
3． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约
0． 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率 140W，频率
42kHz)30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减
失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得(避光操作)。
4 线性关系考察
精密吸取“3． 1”项下的对照品溶液 2μL、5μL、
10μL、15μL、20μL注入液相色谱仪测定峰面积，以进
样量为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得蝙
蝠葛碱回归方程:Y = 836959． 93X + 6541． 59，r =
0. 9999，表明蝙蝠葛碱在进样量 0． 07 ～ 0． 7μg 之间有
良好线性关系;得蝙蝠葛苏林碱回归方程:Y =
815238. 53X +6577，r = 0． 9999，表明蝙蝠葛苏林碱在
进样量 0． 0595 ～ 0． 595μg之间有良好线性关系。
5 方法学考察
5． 1 精密度试验 精密吸取“3． 1”项下的对照品溶
液 10μL，重复进样 5 次测定峰面积，结果蝙蝠葛碱与
蝙蝠葛苏林碱峰面积的 RSD分别为 1． 3%、0． 8%。表
明仪器性能良好。
5． 2 重复性试验 取同一产地(安国)样品 6 份，分
别按“3． 2”项下的方法制备供试品溶液，分别进样
10μL测定，记录各成分色谱峰的峰面积，计算含量，样
品含量测定法测定，结果蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱含
量的平均值(n = 6)分别为 0． 437%、0． 31%;RSD分别
为 1． 1%、1． 6%，表明本方法重复性良好。
5． 3 稳定性试验 取同一样品的供试品溶液，分别在
0、2、3、4、6、8、12、16、20、24h 各进样 10μL测定各成分
色谱峰的峰面积，计算蝙蝠葛碱与蝙蝠葛苏林碱的峰
面积 RSD 分别为 0． 9%、0． 6%。表明供试品溶液在
24h内稳定性良好。
5． 4 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品
(安国)6 份，各约 0． 1g，精密加入 25mL含蝙蝠葛苏林
碱浓度为 0. 014875mg · mL －1、蝙蝠葛碱浓度为
0. 0175mg·mL －1的溶液，按“3． 2”项下的方法制备所
需溶液，精密吸取 10μL进行 HPLC分析，记录峰面积，
计算含量。结果蝙蝠葛碱与蝙蝠葛苏林碱的平均回收
率(n = 6)分别为 101． 3% (RSD = 1． 4%)、102． 2%
(RSD =1． 2%)。
5． 5 耐用性试验 取按“3”项下方法制备的对照品
溶液和供试品溶液，分别以下列色谱柱进行分析测定:
①Agilent ZORBOX SB － C18(4． 6mm × 150mm，5μm) ;
②Agilent EClipse XDS － C18(4． 6mm × 250mm，5μm) ;
③ Packink:Kromasil 100A C18 4． 6mm ×250mm，5μm)。
结果表明，使用①、②、③色谱柱所得结果均可达到分
离的要求。
6 样品测定
精密吸取按“3”项下方法制备的对照品溶液和供
试品溶液各 10μL，进样测定，3 批样品含量测定结果
见表 1，色谱图见图 1。
表 1 北豆根药材含量测定结果
编号 来源 蝙蝠葛苏林碱(%) 蝙蝠葛碱(%) 总量(%)
1 安国 0． 3108 0． 4393 0． 7501
2 辽宁 0． 2323 0． 6017 0． 8340
3 河北 0． 2643 0． 4935 0． 7578
图 1
7 讨论
7． 1 供试品溶液制备方法的选择 根据文献［1］的方
法选择样品的提取溶剂、提取方法、提取溶剂的用量，
结果显示，药材粉末过 3 号筛、甲醇用量 25mL、超声处
理(功率 140W，频率 42kHz)30min结果最佳。
7． 2 液相色谱条件的选择
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7． 2． 1 检测波长的确定 分别取蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏
林碱的对照品溶液，以流动相为空白，在 200 ～ 400nm
的范围内进行 DAD 全波长扫描，蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏
林碱在 284nm 的波长处均有最大吸收，因此选择
284nm为蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的测定波长。
7． 2． 2 流动相的选择 依据文献［2］的液相色谱条
件，重复试验，调节流动相比例结果分离效果较好，因
此选择以乙腈 － 0． 05% 三乙胺溶液(45 ∶ 55)为流
动相。
图 2 对照品及 1 号样品的高效液相色谱图
1． 蝙蝠葛苏林碱(daurisoline) 2． 蝙蝠葛碱(dauricine)
7． 3 小结
蝙蝠葛碱含量与蝙蝠葛苏林碱含量有高有低，但
总量相对稳定，所以以总量计算，3 批北豆根中蝙蝠葛
苏林碱和蝙蝠葛碱总量范围在0. 7501% ～ 0． 8340%之
间，均值为 0． 7806%，按 80%计，含量限度暂定为:本
品按干燥品计算，含蝙蝠葛苏林碱(C37H42N2O6)和蝙
蝠葛碱(C38H44N2O6)的总量不得少于 0． 60%。
本文所确定的蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱的高效液
相色谱含量测定方法简单易操作，准确性高，适用于提
高北豆根药材的质量控制标准。由于客观原因本含量
限度要求是在所收集的 3 批样品的测定结果上确定
的，尚需进一步收集实验样品，以验证该含量限度的合
理性。
参考文献:
［1］ 骆厚鼎，彭爱华，叶昊宇，等． 制备型高速逆流色谱分离纯化北豆
根中的生物碱类化合物［J］．四川化工，2009，5(12) :34 － 37．
［2］ 张艳，石玉生，王栋．高效液相色谱法测定北豆根精制总碱胶囊中
蝙蝠葛碱含量［J］．中医药信息，2008，3(25) :
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