全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2012,21(14)
1672
中国新药杂志 2012 年第 21 卷第 14 期
［基金项目］ 成都医学院科研课题(CYZ09-008)
［作者简介］ 高秀蓉，女，讲师，主要从事药物新剂型设计及药代动
力学研究。联系电话:13678011025，E-mail:gaomuxouzi@ 126． com。
·实验研究·
高效液相色谱法测定蝙蝠葛碱的平衡溶解度和油水分配系数
高秀蓉1，2，蒋学华2，王 婷2
(1 成都医学院药学院药剂教研室，成都 610083;2 四川大学华西药学院临床药学与药事管理学系，成都 610041)
［摘要］ 目的:测定蝙蝠葛碱在不同 pH条件下的平衡溶解度以及在正辛醇-缓冲液体系中的油水分配
系数。方法:采用 HPLC法测定蝙蝠葛碱的浓度，以饱和法测定平衡溶解度，采用摇瓶法-HPLC 法测定蝙蝠
葛碱在正辛醇和水相中浓度，从而计算油水分配系数。结果:37 ℃下蝙蝠葛碱的平衡溶解度随 pH的升高而
增大;油水分配系数随 pH的升高而增大，在 pH 6． 8 ～ 8． 0 范围内(小肠的 pH 环境)，蝙蝠葛碱的 lgP 约为
0. 5，说明其脂溶性较强。结论:蝙蝠葛碱平衡溶解度和油水分配系数都受 pH 的影响;本试验所建立的方法
可准确测定蝙蝠葛碱的平衡溶解度和油水分配系数，并预测其体内过程。
［关键词］ 蝙蝠葛碱;摇瓶法;平衡溶解度;油水分配系数;高效液相色谱法
［中图分类号］ R94 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2012)14 － 1672 － 04
Determination of equilibrium solubility and oil /water partition
coefficient of dauricine by HPLC
GAO Xiu-rong1，2，JIANG Xue-hua2，WANG Ting2
(1 Department of Pharmacy，Chengdu Medical College，Chengdu 610083，China;2 Department of Clinical Pharmacy
and Pharmacy Administration，West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu 610041，China)
［Abstract］ Objective:To determine the equilibrium solubility of dauricine at various pHs and its oil /water
partition coefficient in the n-Octanol-buffer solution system． Methods:An HPLC method was established to deter-
mine the concentration of dauricine． A shake flask-HPLC method was applied and the value of oil /water partition
coefficient was calculated by the concentration ratio of dauricine in n-octyl alcolhol and water phase． Results:At
37 ℃ both the equilibrium solubility and the oil /water partition coefficient increased with the increasing pH． Con-
clusions:Both equilibrium solubility and oil /water partition coefficient of dauricine are affected by pH;this method
can be used to accurately determine the equilibrium solubility and oil /water partition coefficient of dauricine and
help to predict its behavior in vivo．
［Key words］ dauricine;shake flask method;equilibrium solubility;oil /water partition coefficient;HPLC
蝙蝠葛碱(dauricine)是从防己科植物蝙蝠葛
(Menispermum dahuricum DC．)的根茎中分离提取得
到的双苄基异喹啉类生物碱，药理研究表明其具有
抑制肿瘤细胞、抗心率失常、抗高血压、抗心肌缺血
及逆转肿瘤多药耐药等多种作用，临床上主要用于
治疗心血管系统疾病，其应用前景广泛［1 － 5］。文献
报道和作者前期研究中均发现，蝙蝠葛碱的口服生
物利用度很低，仅 16%左右［7 － 8］。而药物的脂溶性
大小是影响药物透膜吸收的重要因素之一［9 － 10］。
目前作者尚未见国内外文献报道对蝙蝠葛碱的油水
分配系数进行测定，本试验测定了蝙蝠葛碱在不同
pH条件下的平衡溶解度和油水分配系数，为其口服
吸收研究提供依据，并对其制剂的处方设计提供生
物药剂学基础。
仪器与试药
LC 2010C HT 高效液相色谱仪(包括 LC
10AT泵、SPD 10A紫外检测器和 LC solution 色谱
工作站，日本岛津公司) ;CP235D 电子天平(德国
Sartorius公司) ;Votex Genius 3 旋涡混合仪(德国
Chinese Journal of New Drugs 2012,21(14)
1673
中国新药杂志 2012 年第 21 卷第 14 期
IKA公司) ;HGC 36AC 型氮吹仪(上海泉岛科贸
有限公司) ;CQ 205 型超声清洗仪(上海超声波仪
器厂) ;TDL 5 台式离心机(上海安亭科学仪器
厂) ;pHS 4C型酸度计(成都方舟科技开发公司) ;
超纯水机(成都品成科技有限公司)
蝙蝠葛碱原料药(深圳市维琪生物科技有限公
司，批号:20090306，HPLC纯度为 98． 0%以上，结构
见图 1) ;蝙蝠葛碱对照品(深圳市维琪生物科技有
限公司，批号:20090315，HPLC 纯度为 99． 0%以上，
结构见图 1)。正辛醇(分析纯，成都贝斯特试剂有
限公司) ;HPLC 所用溶剂为色谱纯，其余试剂均为
分析纯，水为纯化水。
图 1 蝙蝠葛碱的化学结构式
方法与结果
1 色谱条件
色谱柱:Sepax C18柱(250 mm ×5． 6 mm，5 μm) ;
流动相:甲醇-水(78∶ 22，含 1%三乙胺和 0． 21%磷
酸) ;流速:1． 0 mL·min －1;检测波长:284 nm;柱温:
30 ℃;进样量:40 uL。在上述色谱条件下，蝙蝠葛碱
保留时间约为 5． 7 min，柱效≥3 000。色谱图见图 2。
图 2 蝙蝠葛碱的 HPLC图谱
2 溶液的配制
2． 1 蝙蝠葛碱储备液 精密称取蝙蝠葛碱适量，用
甲醇溶解，定容至 50 mL，得 29． 6 μg·mL －1蝙蝠葛碱
储备液。
2． 2 磷酸盐缓冲液 按 2005 年版《中华人民共和
国药典》附录配制 pH 分别为 3． 0，4． 0，5． 0，6． 0，
6. 8，8． 0，9． 0，10． 0 的系列磷酸盐缓冲液。
2． 3 pH 1． 5 的 HCl 溶液 按 2005 年版《中华人
民共和国药典》附录配制，pH为 1． 50。
2． 4 蝙蝠葛碱正辛醇溶液 称取蝙蝠葛碱 2． 01
mg，用正辛醇溶解，定容至 25 mL，得 80． 4 μg·mL －1
蝙蝠葛碱的正辛醇溶液(高浓度) ;取高浓度溶液
10． 0 mL，用正辛醇定容至 25 mL，得 32． 16 μg·mL －1
蝙蝠葛碱的正辛醇溶液(中浓度) ;取中浓度溶液
2. 5 mL，用正辛醇定容至 25 mL，得 3． 22 μg·mL －1蝙
蝠葛碱的正辛醇溶液(低浓度)。
3 最大吸收波长的确定
吸取蝙蝠葛碱储备液适量，甲醇稀释配制成浓
度为 10 μg·mL －1蝙蝠葛碱溶液。在 200 ～ 400 nm
范围内进行紫外扫描，结果见图 3。蝙蝠葛碱在 208
和 284 nm处有最大吸收，由于 210 nm 处吸收峰较
窄，且为末端吸收，故选择 284 nm为检测波长。
图 3 蝙蝠葛碱紫外吸收图谱
4 蝙蝠葛碱平衡溶解度的测定
4． 1 线性关系考察 精密移取蝙蝠葛碱储备液
5 mL，加入 10 mL 量瓶中，用流动相稀释、定容至
10 mL，得到 14． 80 μg·mL －1工作液，依照同样方法
往下稀释，得到质量浓度为 7． 40，3． 70，1． 85，0． 93，
0. 47，0． 24 μg·mL －1的系列标准溶液。分别精密吸
取各系列标准溶液按照“1”项下色谱条件直接进
样，记录峰面积。以进样浓度(C，μg·mL －1)为横坐
标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得蝙蝠葛碱
的线性回归方程为:A = 28 997． 61C + 763． 86(r =
0. 999 7)，结果表明，蝙蝠葛碱在 0． 24 ～14． 8 μg·mL －1
内线性关系良好。
4． 2 平衡溶解度测定 取过量蝙蝠葛碱原料于带
塞塑料管中，分别加入“2”项下配制的 pH 分别为
1． 5，3． 0，4． 0，5． 0，6． 0，6． 8，8． 0，9． 0，10． 0 的系列
缓冲液，水浴超声至药物不再溶解，放入摇床中于
37 ℃，250 r·min －1震荡 5 h。将饱和溶液于 12 000
r·min －1离心 10 min，取上清液 40 μL 注入高效液相
色谱仪(样品浓度超过线性范围时用流动相稀释一
Chinese Journal of New Drugs 2012,21(14)
1674
中国新药杂志 2012 年第 21 卷第 14 期
定倍数) ，记录峰面积，并将结果代入标准曲线方程
计算浓度。在 37 ℃下，不同 pH 缓冲液中蝙蝠葛碱
的平衡溶解度见表 1 和图 4。
表 1 蝙蝠葛碱在不同 pH磷酸缓冲液
中的平衡溶解度
pH值 平衡浓度 /mg·L －1
1． 5 9 225． 39
3． 0 8 536． 71
4． 0 8 451． 95
5． 0 8 215． 31
6． 0 8 117． 02
6． 8 1 812． 02
8． 0 58． 52
9． 0 23． 62
10． 0 17． 25
图 4 蝙蝠葛碱在不同 pH磷酸缓冲液
中的平衡溶解度
由以上结果可知，蝙蝠葛碱在酸性 pH 条件下
(pH 1． 5 ～5． 0)溶解性良好，在 pH 6． 8时溶解性急剧
下降，而在碱性条件下(pH 8． 0 ～10． 0)溶解性较差。
5 蝙蝠葛碱油水分配系数的测定
5． 1 线性关系的考察 同“4． 1”项方法。
5． 2 精密度试验 取“4． 1”项下制备的高、中、低
浓度的标准溶液按照“1”项下色谱条件进样，平行 5
次，计算得高、中、低浓度日内精密度分别为
0. 14%，0． 99%，0． 75%(n = 5) ，日间精密度分别为
1． 33%，1． 83%，2． 59%(n = 15) ，结果表明，方法精
密度良好。
5． 3 混旋时间考察 取质量浓度为 80． 4 μg·mL －1
蝙蝠葛碱的正辛醇溶液(高浓度)2 mL，加入被正辛
醇饱和后的 pH 1． 5 HCl 溶液 2 mL，分别强力涡旋
10，20，30，45，60 min，13 000 r·min －1离心 5 min，取
正辛醇层 0． 1 mL，在波长 284 nm 处测定吸光度，根
据标准曲线方程，计算正辛醇和水相质量浓度(分
别用 Co 和 Cw 表示，如浓度差过标准曲线范围，用甲
醇稀释一定倍数) ，结果见表 2。
表 2 混旋时间对分配平衡的影响
时间 /min Cw /μg·mL －1 Co /μg·mL －1
10 54． 33 25． 32
20 72． 04 9． 36
30 75． 24 4． 32
45 77． 21 4． 01
60 75． 70 4． 20
由表 2 可以看出，混旋时间 30 min 后，蝙蝠葛
碱在两相中已基本达到分配平衡，故选择 30 min 作
为混旋时间。
5． 4 油水分配系数测定方法［11 －13］ 取 2 mL 缓冲
液(水相)于 7 mL离心管中，分别加入 2 mL 高、中、
低 3 个浓度蝙蝠葛碱正辛醇溶液，强力涡旋 30 min，
13 000 r·min －1离心 5 min，水相为 pH 1． 5 ～ 6． 8 缓冲
液，取水相 40 μL 进样测定，pH 6． 8 ～ 10． 0 取油相
40 μL进样测定(如浓度差过标准曲线范围，用甲醇
稀释一定倍数)。根据标准曲线计算浓度，再乘以
稀释倍数，采用下式计算得到油水分配系数(P)。
P =
C － Cw
Cw
或 P =
Co
C － Co
(1)
其中，P为油水分配系，C 为蝙蝠葛碱在正辛醇
中的初始浓度，Cw 为测得蝙蝠葛碱在水相中的浓
度，Co 为测得蝙蝠葛碱在油相中的浓度。所得高、
中、低 3 个浓度下蝙蝠葛碱在不同 pH 环境下的油
水分配系数和 lgP值见表 3。
表 3 不同浓度和不同 pH条件下的油水
分配系数测定结果
缓冲液的
pH值
油水分配系数对数值(lgP)
高浓度 中浓度 低浓度
平均
lgP值
1． 5 － 0． 768 6 － 0． 701 8 － 0． 723 8 － 0． 731 4
3． 0 － 1． 097 7 － 1． 032 6 － 0． 628 4 － 0． 919 5
4． 0 － 1． 257 7 － 0． 572 9 － 0． 585 2 － 0． 805 3
5． 0 － 0． 845 9 － 0． 311 7 － 0． 654 9 － 0． 604 2
6． 0 － 1． 130 9 － 0． 520 7 － 0． 615 5 － 0． 755 7
6． 8 0． 471 4 0． 514 8 0． 456 3 0． 480 8
8． 0 0． 739 6 0． 509 8 0． 493 2 0． 580 9
9． 0 0． 733 9 0． 517 0 0． 526 5 0． 592 5
10． 0 0． 834 2 0． 495 4 0． 523 4 0． 617 7
图 5 蝙蝠葛碱在不同浓度和不同 pH
条件下的油水分配系数测定结果
Chinese Journal of New Drugs 2012,21(14)
1675
中国新药杂志 2012 年第 21 卷第 14 期
从以上结果可以看出，在酸性 pH 条件下(pH
1． 5 ～ 5． 0) ，蝙蝠葛碱的油水分配系数很低，而在碱
性条件下(pH 8． 0 ～ 10． 0)油水分配系数相对较高;
在 pH 6． 8 ～ 8． 0 范围内(该 pH 接近小肠的 pH 环
境) ，蝙蝠葛碱的 lgP为 0． 50，说明其脂溶性较强。
讨 论
本实验室在前期研究中发现蝙蝠葛碱在碱性条
件下不稳定，故在测定蝙蝠葛碱的平衡溶解度时，使
用超声波加速药物的溶解，并采用 250 r·min －1的高
速震荡速度进行试验，以缩短其溶解平衡时间。
体外测定油水分配系数是为了模拟生物体内药
物在水相和生物相之间的分配情况。许多有机溶剂
曾被用来模拟生物相，如氯仿、橄榄油和正辛醇等，
鉴于正辛醇的结构和理化性质的特点更近似生物
相，目前认为，正辛醇-水是一种良好的模拟系统，被
广泛采用［14］。故本试验选择正辛醇-水体系。
测定药物在两相中的浓度时，由于酸性环境下，
蝙蝠葛碱水溶性很高，正辛醇中的浓度很低以致无
法检测到，所以采取的方法是先检测水相中的浓度，
再通过公式计算其在油相中的浓度。
本试验分别测定了高、中、低 3 个浓度下蝙蝠葛
碱的油水分配系数，3 个浓度下结果很接近，且结果
互相得到验证，说明该结果较为可靠。
由于蝙蝠葛碱为碱性药物，在酸性条件下(pH
1． 5 ～ 5． 0)呈解离状态，水溶性较高，脂溶性较差，
所以其油水分配系数很低;相反，碱性条件下(pH
8． 0 ～ 10． 0)解离程度降低，水溶性降低，脂溶性提
高，所以其油水分配系数相对较高，说明蝙蝠葛碱的
解离状态和油水分配系数均受 pH 影响很大，且二
者结果一致。
根据蝙蝠葛碱在胃肠道 pH 环境中的溶解性和
油水分配系数可以预测其吸收情况［14］。细胞膜是
具有亲脂性的脂质双分子层，一般而言，具有较大油
水分配系数的药物更容易穿透细胞膜转运和吸收。
水难溶性的药物虽然具有较大分配系数但由于不能
在胃肠水性黏液层中充分溶解，难以进入细胞膜转
运，吸收也会受影响。胃液 pH 1 ～ 3，十二指肠 pH
4 ～ 6，蝙蝠葛碱在该环境下溶解性好，油水分配系数
很低，吸收会很差;空肠和回肠 pH 6 ～ 7，油水分配
系数有一定升高，但药物的溶解性很低，吸收也会受
到影响。可以预测，蝙蝠葛碱在整个胃肠道中的吸
收不会很好，该结果与本研究对蝙蝠葛碱口服生物
利用度报道结果一致。在制剂设计时，可考虑通过
结构修饰或制剂手段提高其脂溶性和溶解性，从而
促进其吸收。
影响药物口服吸收的因素很多，包括解离度、脂
溶性、分子量大小和胃肠道上皮细胞的转运载体的
转运等［15］，所以本试验所测定的溶解度和油水分配
系数只能作为预测药物口服吸收的参考依据之一，
应同时考虑其他因素的影响，才能全面阐明蝙蝠葛
碱口服吸收差的原因。
［ 参 考 文 献 ］
［1］ 李铭，单保恩． 北豆根的研究现状［J］． 国外医学中医中药分
册，2005，27(5) :267 － 271．
［2］ 黄晓东，韩东，崔新颖． 蝙蝠葛碱药理作用的研究进展［J］．
中国民康医学，2007，19(7) :575 － 576．
［3］ QIAN JQ． Cardiovascular pharmacological effects of bisbenzyliso-
quinoline alkaloid derivatives［J］． Acta Pharmacol Sin，2002，23
(12) :1086 － 1092．
［4］ 管思明． 蝙蝠葛碱对心肌电生理和肌浆网 Ca2 + -ATP 酶的效
应及其与汉防己甲素比较研究［J］． 中华心律失常学杂志，
1999，3(4) :286 － 289．
［5］ 李铭，梁文杰，曾亚平． 蝙蝠葛碱对人膀胱癌 T-24 细胞株生
长增殖的抑制作用［J］． 第三军医大学学报，2006，28(18) :
1860 － 1863．
［6］ 张彦周，朱俊兴，董建增，等． 蝙蝠葛碱对急性心肌梗死患者
血小板聚集性的影响［J］． 中国药理学通报，2002，18(1) :
97 － 98．
［7］ 陈淑娟，杨毅梅，刘奕明，等． 蝙蝠葛碱大鼠体内药物代谢动
力学研究［J］． 中国药理学通报，2001，17(2) :255 － 259．
［8］ 侯淑贤，胡本蓉，殷国勇，等． 家兔一次灌胃蝙蝠葛碱的药代
动力学［J］． 同济医科大学学报，1990，(1) :52．
［9］ 梁文权． 生物药剂学与药物动力学［M］． 第 3 版． 北京:人民
卫生出版社，2007:106 － 111．
［10］ 高坤，孙进，何仲贵． 口服药物吸收中的生物药剂学性质
［J］． 沈阳药科大学学报，2007，24(3) :186 － 192．
［11］ 王秀敏，邓英杰，赵春杰，等． β-榄香烯油水分配系数的测定
［J］． 沈阳药科大学学报，2005，22(4) :289 － 320．
［12］ 张婷婷，徐文，何仲贵，等． 水飞蓟宾在不同介质中平衡溶解
度和表观油水分配系数的测定［J］． 中国药学杂志，2006，41
(20) :1569 － 1571．
［13］ 徐文，孙进，何仲贵，等． HPLC 法测定冬凌草甲素的平衡溶
解度和表观油水分配系数［J］． 沈阳药科大学学报，2007，24
(4) :220 － 222．
［14］ 金玉燕，张均寿，张瑛，等． 西红花苷大鼠小肠吸收研究及油
水分配系数的测定［J］． 中国药科大学学报，2004，35(3) :
283 － 285．
［15］ 谭晓斌，贾晓斌． 从肠吸收屏障网络进行中药基础研究的思
路及探索［J］． 中草药，2009，40(10) :1520 － 1524．
编辑:周卓 /接受日期:2011 － 12 － 20