全 文 ：反相高效液相色谱法测定秦艽和
麻花艽中番木鳖酸的含量
林鹏程
(青海民族学院化学系 ,青海 西宁　810007)
摘要:建立了反相高效液相色谱法测定秦艽 、麻花艽中番木鳖酸含量的方法 。在检测波长为
254 nm、柱温 30 ℃、流速 1mL·min-1时 ,用 ZORBAXSB-C18柱 ,以 24%的甲醇 H2O(含 0.04%
H3PO4)洗脱 ,上述成分达到基线分离 ,该法简便 、易行 ,有较宽的线性范围和良好的线性关系 。
用该方法测定了秦艽 、麻花艽全草及根 、茎 、叶 、花等不同部位番木鳖酸的含量。
关键词:反相高效液相色谱法;番木鳖酸;秦艽;麻花艽
中图分类号:Q599　　文献标识码:A　　文章编号:1006-8996(2004)05-0062-03
Determination of loganic acid content in Gentiana
macrophylla and Gentiana straminea by reversed
phase-high pressure liquid chromatography
LIN Peng-cheng
(Chemistry Department of Qinghai Nationalities College ,Xining 810007 ,China)
Abstract:A quantitative method to determine the content of loganic acid in G.macrophylly and G.stra-
minea by reversed phase-high pressure liquid chromatography was established.The loganic acid was base
-isolated on the coloumn of ZORBAXSB-C18 which was eluted with 24%methanol-water solution
(contained 0.04%phosphoric acid), detective wavelength at 254 nm , coloumn temperature at 30℃, flow
rate at 1mL·min-1.A wide range of linearity and the good linear relationship was achieved on above con-
dicion.The method was simple and easy to hand.The content of loganic acid in different parts which in-
cluded whole grass , root , stem , leaf and flower in G.macrophylla and G.stramined .
Key words:reversed phase-high pressure liquid chromatography;loganic acid;G.macrophylly ;G.
straminea
秦艽(Gentiana macrophylla Pall)和麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)藏医均称为“解吉嘎保” ,可止
血 ,消肿 ,清腹热 、胆热及脉热[ 1] 。藏医用全草治关节炎 、肺病发烧 、黄疸及二便不通[ 2] ,中药以根入药
(总称秦艽)。其主要化学成分有番木鳖酸(Loganic acid)、龙胆苦甙(Gentiopicroside)等[ 3] 。现代药理学研
究表明 ,番木鳖酸具有一定的抗炎活性 ,对角叉菜胶引起的小鼠脚肿胀和十四烷佛波醇乙脂引起的小鼠
耳肿胀抑制率达 44.4%[ 4] ,但对番木鳖酸的测定方法未见报道 。本文建立了用反相高效液相色谱(RP
-HPLC)法测定秦艽 、麻花艽中有效成分番木鳖酸的方法 ,并利用该方法测定了上述两种药物全草及
根 、茎 、叶 、花等不同部位番木鳖酸的含量 ,为评价药材质量 、充分利用药物资源提供基础资料 。
1　材料与方法
1.1　仪器　Agilent 1100高效液相色谱议。配置:手动进样器 、在线脱气机 、高压二元梯度泵 、恒温柱温
收稿日期:2004-04-30
作者简介:林鹏程(1966—),男 ,河南洛阳人 ,副教授。主要从事分析化学 、食品分析 、药物分析的教学科研工作。
第 22卷　第 5期
2004年 9月 　　　　　　　　　
青海大学学报(自然科学版)
Journal of Qinghai University
　　　　　　　　　Vol.22 No.5
Sep.2004
DOI :10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2004.05.019
箱 、DAD检测器 、Agilent1100色谱工作站 、ZORBAX SB-C18色谱柱;KQ3 200超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司);SZ-97自动三重纯水整流器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2　试剂　甲醇系高效液相色谱专用试剂(山东禹王实业有限公司禹城化工厂);磷酸为AR级(北京
红星化工厂);番木鳖酸对照品由青海普兰特藏药研究所孙洪发研究员提供(纯度大于 98%);水为自制
三重蒸馏水。
1.3　样品采集　秦艽 、麻化艽在 2003年 8月采于青海省互助北山林场 ,由中国科学院西北高原生物研
究所胡凤祖副研究员鉴定。样品分别以全草及根 、茎 、叶 、花五种方式 ,阴干粉碎后过 80目筛 ,冷藏保
存。
1.4　方法
1.4.1溶液配制
(1)对照品储备液的配制。准确称取一定量的番木鳖酸对照品 ,以适量甲醇溶解并配置成浓度为 2.5
mg·mL-1的溶液 ,使用时稀释成所需浓度。
(2)样品溶液。精密称取粉碎至 80目的样品0.5 g ,加入甲醇 10 mL ,超声提取 0.5 h ,抽滤 ,以甲醇先涤
滤渣 2次 ,每次1 mL。滤渣重复上述操作 ,所得滤液与前一次滤液合并 ,浓缩后定容至 10 mL ,过 0.45
μm 滤膜供测试使用。测定时每份样品重复过样 3次 ,取均值。
1.4.2　色谱条件　色谱柱:ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm ,5 μm)柱;流动相:24%的甲醇-水(含
0.04%磷酸);流速 1 mL·min-1;检测波长 254 nm;柱温 30 ℃。该色谱条件下番木鳖酸被快速洗脱且与
其他成分达到基线分离 ,保留时间为8.9 min(见图 1)。
图 1　对照品(A)及秦艽全草(B)色谱图
1.4.3　线性关系考察及
检测限测定 　取浓度为
0.25 mg·mL-1的番木鳖
酸对照品储备液 ,以甲醇
配制浓度分别为 0.125 、
0.050 、 0.025 、 0.0167 、
0.0125 、0.010 mg·mL-1对
照品系列标准溶液 ,每次
进样 5 μL ,以峰面积的积
分值定量 ,测得番木鳖酸
回归方程为:A =620.23
X+1.12 , 相关系数 r =
0.9999 ,线性范围为 0.01
～ 0.125(mg·mL-1)。在
选定的色谱条件下 ,测得
当信噪比 S N=3 时 , 其
最低检测限为 1.25 ng 。
1.4.4　精密度 、重复性及稳定性试验　取浓度为 0.025 mg·mL-1番木鳖酸对照品溶液 ,在选定的色谱条
件下测定色谱峰的峰面积 ,计算得 RSD 为 0.72%,表明仪器精密度良好;精密称取秦艽全草样品 0.5 g
共6份 ,按(2)项下方法操作 ,在选定的色普条件下测定番木鳖酸的含量 ,计算得 RSD 为 1.6%(n=6),
表明方法重复性良好;取其中 1份样品 ,在 0 、2 、4 、6 、8 h时分别进样 ,测定番木鳖酸的峰面积 ,计算得
RSD 为1.8%(n=5),表明样品溶液在 8 h内稳定。
1.4.5　回收试验　精密称取 3份已测知含量的秦艽全草样品各 0.05 g ,添加浓度为 0.25 mg·mL-1的番
木鳖酸对照品溶液 0.80 mL ,按“ 1.4.1(2)”项下方法操作 ,测得番木鳖酸平均回收率(n=3)为 101%,
RSD 为2.4%。
63第 5期　　　　　林鹏程:反相高效液相色谱法测定秦艽和麻花艽中番木鳖酸的含量　　　　　　
2　结果
2.1　提取方法确定　比较了不同提取方法(热回流提取 、超声提取)、提取时间(15 ,30 ,45 ,60 min)、提取
次数(2 、3 、4)对提取率的影响 ,结果发现 ,超声提取法优于热回流法 ,且超声 30 min ,提取 2次即可提取
完全 。
2.2　测定结果　用 RP-HPLC法测得的秦艽和麻花艽全草及根 、茎 、叶 、花中番木鳖酸的含量见表 1。
表 1　秦艽和麻花艽中番木鳖胶酸的含量
统计数字 秦艽全草 根 茎 叶 花
麻花艽
全草 根 茎 叶 花
番木鳖酸 x
loganic acid
0.623 0.816 0.565 0.435 0.458 0.383 0.195 0.317 0.726 0.324
RSD % 1.33 0.78 0.92 0.87 0.89 0.56 0.95 0.47 0.76 0.44
3　讨论
(1)由测定结果可见 ,对于全草 ,秦艽中番木鳖酸的含量高于麻花艽 。番木鳖酸在秦艽 、麻花艽的各
部位均有分布 ,其中秦艽以根中分布最多 ,叶中分布最少 ,麻花艽以叶中含量最高 ,根中最少 ,反映了同
名但多品种植物入药的质量差异;其含量差异并不悬殊 ,表明藏医以全草入药是有科学依据的 。
(2)建立的 RP-HPLC法具有提取 、分析方法简便快速 、结果准确可靠等特点 ,测定结果能为全面评
价药物质量及综合利用药材资源提供基础的实验数据 。
参考文献:
[ 1] 杨永昌 ,何廷农 ,卢生莲 ,等.藏药志[ M] .西宁:青海人民出版社 , 1991.11.
[ 2] 中国科学院西北高原生物研究所.青海经济植物志[M] .西宁:青海人民出版社 , 1987.453-454.
[ 3] 纪兰菊 ,孙洪发.青藏高原四种龙胆植物化学成分初步研究[ A] .中国科学院西北高原生物研究所.高原生物学集刊(11)[ C] .北京:
科学出版社 , 1992.113-118.
[ 4] Recio MC ,Giner RM ,Manez S , et al.Structural consiiderations on the iridoids as amti-inflammatory agents[ J] .Planta Med ,1994 , 60(3):232-234.
(责任编辑　陈　军)
64　　　　　　　　　　　　　　　　　　青海大学学报　　　　　　　　　　　　　　　　第 22卷