全 文 ：第 2 9卷第 8 期
2 1 0 3年 8 月
扬 南中值像志 V o l . 2 9
1 0 3H UN A N J OU RNA L OT A D T F R I IN OA L CH IN E S E E D I MC IN E A u g
N 08
1 U Z 3
HP LC法测定丁香寥药材中没食子酸的含量
曾翠兰 ,卢雪明
( 中山大学附属第六医院 广东 广州 万10 6 5 5)
〔摘要 ] 目的 : 采用 高效液相 色谱法建立丁香寥 药材中没食子酸的测 定方 法 。 方 法 : 采用 大连依利特 ( o D s 25 o m m x
4
.
6 m m
,
5林m) 色谱柱 , 流动相为 乙睛 一 0 . 1% 磷酸溶液 ( 1: 9 ) 溶液 ,检测波长为 27 3 n m , 流速为 1. Om L/ m in 。 结果 : 没食子酸进
样量在 0 . 0 5 1 6 8 一 0 . 5 168 林g 范围 内线性关 系良好 , 平均 回收率为 98 . 7 % 。 结论 : 本方法可作为丁香寥药材的质量控制方法 。
〔关键词」 H P L C 法 ; 丁香寥 ; 没食子酸 ; 含量测定 ; 实验研究
[中图分类号 〕咫 8 2 . 7 10 . 3 [文献标识码 〕A [文章编号 〕10 0 3 一 7 7 0 5 ( 2 0一3 ) 0 8 一 。一3 0 一 0 2
H P L C m e t h o d fo r c o n t e n t d e te r m in a t i o n o f g a l lic a c id i n m e d ic in a l m a t e r i a l o f L u d w i g ia P r o s t r a t a
Z E N G C
u i 一 la n 工U X u e 一 m in g
( T h
e
S i
x th A if l ia t e d H o s p i t a l o f S u n Y a t 一 s e n U n iv e r s iyt ,G u a n g z h o u 5 1 0 6 5 5 ,G u a n g d o n g ,C h i n a )
A b s t r a c t : Obj
e e t iv e : T o e s t a b li s h a m e th o d fo r d e t e r m i n i n g th e e o n t e n t o f g a l lie a e i d i n m e d i e i n a l m a t e ir a l o f L u加 i g ia p or s t r a t a b y
h i g h
一 p e for
r m a n e e li q
u i d e h or m a t o g r a p h y ( H P LC )
.
M e th
o d s : H PL C w a s p e for mr
e d o n a n O D S e o l u m n ( 2 5 0 m m x 6 m m 万林m ) ( El i t e ,
D a li
a n
,C h i
n a
) w i th
a m o b i le p h a s e o f a e e t o n i t ir le 一 0
.
1% p h o s p h o ir e a e i d s o lu t i o n ( 1: 99 )
a t a d e t e e t i o n w a v e le n g th o f 2 7 3 n m a n d a
fl
o w ar t e o f 1
.
0 m l /m i
n
.
R e s u l t
s : G
a
l li
e a e i d h a d a g o o d li n e a r er la t i o n s h i p b e饰 e e n s a m p le s i z e a n d p e a k a er a w i th i n 0 . 0 5 1 6 8 一 0 . 5 1 6 8
林 g 办 n d th e a v e r a g e er e o v e叮 ar t e w a s 9 8 . 7% . C o n e lu s io n : Th i s H P LC m e th o d e a n b e u s e d fo r q u a li yt e o n t r o l o f m e d i e i n a l m a t e ir a l o f
L u加 ig ia p or st ar at .
K e y w o r d s : h ig h 一 p e for mr
a n e e
li q
u i d e h or m a t o g ar p h y ; L u加 i g ia p or s tar t a ; g a l li e a e id ; e o n t e n t d e t e r m i n a t i o n ; e x p e ir m e n t a l s t u街
丁香寥为柳叶菜科植物丁香萝 L u d w is a p or st ar et R xo b. 本品用 乙醇为提取溶媒进行超声提取 ,现对超声提取时间
的干燥全草 厦 、 秋季采收 赊去杂质 、 干燥 。 别名 : 水丁香 、 进行考察 ,方法如下 : 取干燥本品 ,粉碎成细粉 ,取 3 份各约
田要草 、 红麻草川 。 本品系 民间常用草药 ,始载于 《福建 民 0 . 5 9 精密称定 置具塞三角瓶中 分别精密加入乙醇 20 m L ,
间草药》和 《湖南药物志 》 具有清热解毒 、 利湿消肿的作用 , 称定重量 第 1 份超声处理 ( 12 o w 朋K zH ) 巧 m in 、 第 2 份超
在湖南省民间广泛用于治疗痢疾 、 淋病等 。 湖南省安仁县 声处理 30 m in 、 第 3 份超声处理 45 m in 放冷 ,再称定重量 加
卫生局和湖南省中医药研究院曾对该药进行临床研究 ,开 乙醇补足减失的重量 摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 Z m L ,置
发了药品抗菌痢灵片 、 结肠宁 、 妇留栓等新药 ,均以其作为 于 10 m L 量瓶中 ,加乙醇稀释至刻度 ,精密量取 10 林L ,注入
主要原料 。 据文献资料报道 ,其有效成分为没食子酸与诃 液相色谱仪中 测定 。 结果表明 : 超声处理 巧 m in 时 样品中
子次酸三乙醋「1」 。 本实验参照 《中国药典 》及其他相关资料 的没食子酸提取不完全 超声处理 30 m in 与 45 m in 时 ,其含
中没食子酸的含量测定方法 2[ 一 5」 采用高效液相色谱法测定 量相当 均可将样品中的没食子酸提取完全 ,因此确定本品
本品中没食子酸的含量并对其进行方法学考察 ,其结果准 超声处理时间为 30 m in 。 供试品溶液制备方法 : 取本品 ,粉
确可靠 方法可行 。 碎成细粉 取细粉约 0 . 5 9 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密
1 实验材料 加入乙醇 Z Om L 称定重量 超声处理 ( 12 OW 井OK H z ) 3Om i n ,
1
.
1 仪器 岛津 L C 一 10 AvT p 高效液相色谱仪 ; H W 一 2 00 放冷 再称定重量 ,加乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,精
色谱工作站 。 密量取续滤液 Zm L 置于 10 m L 量瓶中 加乙醇稀释至刻度 ,
1
.
2 试药 乙睛 、 乙醇均为色谱试剂 ,水为重蒸水 ,其他试 摇匀 ,即得 。
剂均为分析纯 。 2 . 2 . 2 对照 品溶液的制备 精密称 取没食子酸对照品
2 方法与结果 12 . 9 02 m g 置于 l o m L 量瓶中 加乙醇稀释至刻度 ,摇匀 得
2
.
1 色谱条件 色谱柱 : 大连依利特 OD S 25 0~ x 4
.
6
~
, 浓度为 0 . 12 902 m g /m L 的没食子酸对照品贮备液 ,再精密吸
5林叫流动相 : 乙睛 一 a l % 磷酸溶液 (l : 9 L 检测波长 : 27 3n 叫 取 s m L 置于 25 m L 量瓶中 ,加乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得
流速 :l . 0毗 / im n 。 在上述选定条件下 段食子酸峰与样品中其 ( 浓度 0 . O2 5 8Om g / m )L 。
他组分色谱峰可达基线分离 且与其他相邻色谱峰分离度大于 2 . 2 . 3 测定方法 分别精密吸取对照品溶液 、 阴性样品溶
1
.
5 ; 按没食子酸峰计算 理论板数在 2以幻 以上 。 液与供试品溶液各 10 林L ,注入液相色谱仪 ,测定 。 结果表
2
.
2 溶液配制 明 供试品溶液色谱中 在与没食子酸对照品色谱峰相应位
2
.
2
.
1 供试品溶液的制备 参照 《中国药典 》及相关文献 , 置上有相应峰 。 对照品 、 供试品色谱图分别见图 1 。
第 8期 曾翠 兰 ,卢雪明 : HP L C 法测定丁香寥药材中没食子酸的含量 13 1
A
. 阴性样品 B .
图 1
2
.
3 线性关 系考察 精密吸取浓度为 0 . 1 2 902 m g /m L 的没
食子酸对照品溶液 1 、 3 、 5 、 7 、 10 m L ,分别置 25 m L 量瓶中 加
乙醇稀释至刻度 摇匀 精密吸取 10 林L 进样 ,测定其峰面积
积分值 ,以对照品浓度为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,
绘制标准曲线 其回归方程为 : A = 2 6 6 6 806 x c + 4 5 1 . 4 25 ,
r = 0
.
9 999
。 结果表明没食子酸在 0 . 0 5 16 8 一 0 . 5 1 6 8林g 范围
内具有良好的线性关系 。 标准曲线见图 2 。
对照品
H P L C 图
C
. 供试品
表 1 回收率测定结果
卜曰
)邢%(序号 取样量样品中含没食 加入没食子 实测没食子酸 回收率 平均回收率
( g) 子酸量( mg) 酸量( mg)
2
.
4斜0
2
.
4斜0
2
.
4斜0
2
.
4斜0
2
.
4斜0
2
.
4斜0
总量( mg)
溯服姗脱0. 4324
0
.
4328
0
.
4360
0
.
4364
0
.
4362
0
.
4376
2
.
6822
2
.
6847
2
.
7046
2
.
7070
2
.
7058
2
.
7145
(% )
98
.
42
98
.
83
99
.
08
99
.
42
98
.
48
98
.
22
(% )
98
.
74 0
.
46
表 2 1 0 批样品含量测定结果 ( n = 2 ,% )
图 2 没食子酸标准曲线图
2
.
4 精密度 实验 精密吸取同一份 (批号 : 2 0 1 0 0 3 0 3) 供试
品溶液 10 林 L 重复进样 6 次 测定其峰面积积分值平均值为
7 8 9 8 5 0 双 SD 为 1. 10 % 注吉果表明本方法精密度良好 。
2
.
5 稳定性实验 分别精密吸取同一份 (批号 : 2 0 1 0 0 3 03)
供试品溶液 10 林 L于 O、 3 、 6 、 9、 12 h进样 测定其峰面积积分
值平均值为 7 9 19 1 0 . 8 ,R S D 为 1 . 0 6 % ,结果表明 ,供试品溶
液在 12 h 内峰面积值基本稳定 。
2
.
6 重复性实验 取同一批号样品 ( 批号 : 2 0 1 0 0 3 0 3 ) 6 份
按前述供试品溶液制备方法 ,平行处理并测定 ( n = 2) 户份
样品的平均含量为 0 . 0 1 2 1 2% , R S D 为 1 . 6 6 % ,结果表明本
方法重复性 良好 。
2
.
7 回收率实验 精密称取已 知含量为 0 . 01 21 2% ( 批号 :
2 0 1 0 0 3 0 3 ) 样品约 0 . 2 5 9 共 6 份 ,分别精密加入没食子酸对
照品溶液 ( 精密称取没食子酸对照品 12 . 42 m g ,置于 25 m L
量瓶中 加乙醇稀释至刻度 摇匀 ,即得浓度为0 . 4 9 68 m g m/ L
的对照品溶液 ) s m L ,即 2 . 4 8 4 Om g ,再分 别精 密加 入乙 醇
16 m L 胺上述含量测定项下的方法测定含量 ,实验结果表
明 本方法加样回 收率好 ( 样品进样量约为 0 . 26 哪 ,在线性
范围内 ) 。 结果见表 1 。
2
.
8 10 批药材含量测定 按上述含量测定方法测定 10 批
样品中没食子酸的含量 结果见表 2 。 10 批成品的平均含量
约为 0 . 0 12 % 胺约 80 % 折算 ,暂规定本品中含没食子酸不
得少于 0 . 0 10 % 。
+L 。。 含量 } 今昙
} 十L卜旦 目玉
1 2 平均 一…`巧 ` 2 平均
20 110803 0
.
0117 0
.
0117 0
.
0117…燕…. :{…. ))…. )20 110805 0. 0122 0. 0121 0. 012220 110807 0. 0113 0. 0115 0. 011420 11110 1 0. 0108 0. 0110 0. 010920 111102 0. 0126 0. 0124 0. 0125
没食子酸本身不是很稳定 ,在空气中容易被氧化 ,所
以我们最后选择乙醇为供试品溶液制备的溶剂 。 在流动
相选择过程中 用醇 一 磷酸溶液 ,样品峰拖尾 ,所以最后选
择流动相 为乙睛 一 0 . 1% 磷酸溶液 ( 1 : 9 9 ) 。 实验结果表
明 ,本含量测定方法准确可控 ,方法可行 。 根据 10 批药材
测定结 果 ,规 定丁 香 寥 药 材 中没 食 子 酸 含 量应 不 少
于 0 . 0 1 0 % 。
参考文献
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术出版社 ,l 9 7 7 : 5 2 0 -
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酸的含量 [ J〕 . 华西药学杂志 2 0 0 7 2 2 ( 一) : 8一 82 -
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( 2 ) : 17 3 一 17 4
-
( 收稿 日期 : 2 0 1 3 一 0 5 一 1 0 )