全 文 ：化学与生物工程 ２０１３，Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．６ 　 　
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
４３　
基金项目：贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题项目（ＱＺＹＹ２０１２－７２）
收稿日期：２０１３－０３－２８
作者简介：徐红（１９７０－），女，贵州凯里人，教授，研究方向：分子光谱分析，Ｅ－ｍａｉｌ：１７３８９４３２６９＠ｑｑ．ｃｏｍ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－５４２５．２０１３．０６．０１０
苗药观音草提取物的体外抗氧化活性研究
徐　红，黄亚励，张奇龙，王　丽
（贵阳医学院化学教研室，贵州 贵阳５５０００４）
摘　要：采用羟基自由基体系和超氧阴离子自由基体系对观音草提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明，观音
草提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除作用，其清除率随观音草提取物浓度的增大而升高，说明观
音草具有较强的抗氧化活性，极可能是一种天然抗氧化剂的新资源。
关键词：观音草；抗氧化性能；清除率
中图分类号：Ｒ　２９１．６　Ｑ　９４６．８３　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－５４２５（２０１３）０６－００４３－０２
　　观音草又名吉祥草，为百合科植物吉祥草［Ｒｅｉ－
ｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ］的全草，是我国西南苗
族地区常用的传统草药之一。在贵州、湖南、云南、广
西、四川等苗族人口主要聚居区，苗药观音草应用广
泛［１］，并在苗药产业化发展中扮演着重要的角色，但目
前对观音草的应用主要集中在止咳、化痰、抗炎、降血
糖等方面［２，３］，药理实验研究少有报道，因此，对其药
用价值的深入研究和开发利用意义重大。
天然植物是很有潜力的天然抗氧化剂资源，具有
高效、低毒等优点，且其提取物兼具抗氧化作用及清除
体内自由基的作用［４］。作者在此以观音草为研究对
象，利用不同极性的溶剂对观音草的乙醇提取物进行
萃取，获得不同极性溶剂的提取物，并研究了不同提取
物的体外抗氧化活性，拟为进一步探索其药理作用机
理奠定基础。
１　实验
１．１　材料、试剂与仪器
观音草药材购于贵州安顺药材公司，经贵阳中医
学院民族医药研究所鉴定为百合科植物观音草［Ｒｅｉ－
ｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ］。
无水乙醇，９５％乙醇，０．２×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１邻苯三
酚溶液，７．５×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１水杨酸溶液，０．１％过氧
化氢溶液，７．５×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１硫酸亚铁铵溶液，Ｔｒｉｓ－
ＨＣｌ缓冲溶液。所用试剂均为分析纯，实验用水为二
次蒸馏水。
ＴＵ－１８００ｐｃ型紫外可见分光光度计，北京普析公
司；ＰＨＳ－３Ｃ 型酸度计，上海大中分析仪器厂；ＲＥ－
５２ＡＡ型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。
１．２　方法
１．２．１　观音草提取物溶液的制备
渗漉提取样品的制备［５］：将干燥的观音草粉碎，称
取１．０ｋｇ，常温下以３．０Ｌ９５％乙醇浸取７ｄ，固液分
离，将滤液旋蒸后得到总浸膏；悬浮于水中，按照极性
从小到大的顺序，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃
取，直至上清液近无色，将得到的各极性溶剂的萃取液
旋蒸，得到不同极性溶剂提取浸膏，常温晾干。
分别以无水乙醇－水（体积比７∶３）配制浓度为２
ｍｇ·ｍＬ－１的观音草乙醇总提取物和不同极性溶剂提
取物溶液。
１．２．２　羟基自由基（·ＯＨ）清除实验［６］
于１０ｍＬ具塞比色管中依次加入７．５×１０－３　ｍｏｌ
·Ｌ－１硫酸亚铁铵溶液１．０ｍＬ、７．５×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１
水杨酸溶液１．０ｍＬ、０．１％ Ｈ２Ｏ２溶液１．０ｍＬ，再分
别加入浓度为２ｍｇ·ｍＬ－１的观音草乙醇总提取物或
不同极性溶剂提取物溶液１．０ｍＬ、２．０ｍＬ、３．０ｍＬ、
４．０ｍＬ、５．０ｍＬ，用蒸馏水定容，在３７℃水浴中恒温
反应１ｈ后，于波长５１０ｎｍ处测定体系吸光度Ａｉ。
相同条件下，测定试剂空白的吸光度Ａ０。按式（１）计
算羟基自由基的清除率：
　 徐　红等：苗药观音草提取物的体外抗氧化活性研究／２０１３年第６期４４　
清除率＝Ａ０－ＡｉＡ０ ×１００％
（１）
１．２．３　超氧阴离子自由基（·Ｏ－２ ）清除实验［７，８］
将１０ｍＬ比色管、ｐＨ值８．２的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶
液、蒸馏水、０．２×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１邻苯三酚溶液分别在
２５℃水浴中保温１０ｍｉｎ后，在１０ｍＬ比色管中迅速
加入 Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲溶液２．０ ｍＬ、邻苯三酚溶液
２．０ｍＬ，用蒸馏水定容，摇匀，立即于３２５ｎｍ处每隔
３０ｓ测吸光度，计算线性范围内每分钟吸光度的增加
值△Ａ０。在相同条件下，分别加入浓度为２ｍｇ·
ｍＬ－１的观音草乙醇总提取物溶液１．０ｍＬ、２．０ｍＬ、
３．０ｍＬ、４．０ｍＬ、５．０ｍＬ，按相同方法测定并计算
△Ａｉ。按式（２）计算超氧阴离子自由基的清除率：
清除率＝△Ａ０－ △Ａｉ△Ａ０ ×１００％
（２）
２　结果与讨论
２．１　观音草提取物对羟基自由基的清除作用
分别测定观音草乙醇总提取物和不同极性溶剂提
取物在体外对羟基自由基的清除率，结果见图１。
１．乙醇总提取物　２．石油醚提取物
３．乙酸乙酯提取物　４．正丁醇提取物
图１　不同观音草提取物对羟基自由基的清除率
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ
ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｔｏ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ
由图１可知，观音草乙醇总提取物和不同极性溶
剂提取物对羟基自由基的清除率随提取物浓度的增大
而升高；在相同浓度下，清除率大小顺序为：乙醇总提
取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取
物，观音草乙醇总提取物对羟基自由基的清除作用最
强，最高达到８４．５％。
２．２　观音草乙醇总提取物对超氧阴离子自由基的清
除作用
测定观音草乙醇总提取物在体外对超氧阴离子自
由基的清除率，结果见图２。
由图２可知，观音草乙醇总提取物对超氧阴离子
自由基的清除率随提取物浓度的增大不断升高，最高
图２　观音草乙醇总提取物对超氧阴离子自由基的清除率
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ
Ｒｅ　 ｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｔｏ　ｓｕｐｅｒ　ｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ
达到７９．３２％。
２．３　讨论
观音草具有较强的抗氧化性，在不同极性溶剂提
取物中，以乙酸乙酯提取物清除羟基自由基的能力最
强，这与文献结果一致［５］；由于观音草中所含的皂苷、
甾体化合物、皂苷元、萜类化合物等复合成分的协同作
用，使乙醇总提取物的抗氧化效果比单一极性溶剂提
取物的抗氧化效果更强。因此，总抗氧化能力的评价
是抗氧化活性成分筛选的重要方式。
３　结论
采用羟基自由基体系和超氧阴离子自由基体系对
观音草提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明，
观音草提取物对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有
较强的清除作用，其清除率随观音草提取物浓度的增
大而升高，说明观音草具有较强的抗氧化活性，极可能
是一种天然抗氧化剂的新资源。
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ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ　ｏｆ　１１－ｈｙｄｒｏｘｙｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｒｂａｚｏｌｅｎｉｎｅ
［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，１９５１，７３（５）：２１８８－２１９５．
［２１］　Ｓｉ　Ｙ　Ｇ，Ｇｕｏ　Ｓ　Ｐ，Ｗａｎｇ　Ｗ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｉｎｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｒｉ－
ｐｌｅ　ｂｏｎｄ　ｉｎα，α，α－ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐａｒｇｙｌ　ｍｅｓｙｌａｔｅ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｏｆα，α－ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｅｎａｍｉｎｏｎｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２－ｐｈｅｎｙｌ－４－
ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｑｕｉｎｏｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｇ　Ｃｈｅｍ，２００５，７０（４）：１４９４－
１４９９．
［２２］　Ｓｈｒｉｎｅｒ　Ｒ　Ｌ，Ａｓｈｌｅｙ　Ｗ　Ｃ，Ｗｅｌｃｈ　Ｅ．２－Ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ［Ｊ］．Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，１９５５，３：７２５－７２８．
Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ
２－Ｂｅｎｚｙｌ－２，３，４，５－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１　Ｈ－ｐｙｒｉｄｏ－［４，３－ｂ］Ｉｎｄｏｌｅ
ＭＡ　Ｑｉａｎｇ，ＣＵＩ　Ｔａｏ，ＴＥＮＧ　Ｄａ－ｗｅｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６０４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｄｏｐｔｉｎｇ　Ｆｉｓｃｈｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ，ｗｉｔｈ　ｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ　ａｎｄ　１－ｂｅｎｚｙｌ－４－ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ　ｋｅｔｏｎｅ　ａｓ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉ－
ａｌｓ，ｆｉｒｓｔｌｙ　ｈｙｄｒａｚｏｎｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｗａｓ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　２－ｂｅｎｚｙｌ－２，３，４，５－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１　Ｈ－ｐｙｒｉｄｏ－［４，３－ｂ］ｉｎ－
ｄｏｌｅ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ａｃｉｄ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ，ｃｏｏｌｉｎｇ，ｓｕｃｔｉｏｎ　ｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ，ｗａｓｈｉｎｇ，ａｎｄ　ｒｅｃｒｙｓｔａｌｉ－
ｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｆｅｅｄｉｎｇ　ｍｏｄｅ，ａｃｉｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｏｎｅ－ｐｏｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｒｅｃｒｙｓｔａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ
ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ　ｗａｓ　ｄｒｏｐｗｉｓｅ　ａｄｄｅｄ　ｔｏ　ａ
ｍｉｘｔｕｒｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　１－ｂｅｎｚｙｌ－４－ｐｉｐｅｒｉｄｏｎｅ　ａｎｄ　ａｃｉｄ，ａｃｉｄ　ｗａｓ　ａ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（ｔｈｅ
ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　５∶１），ｒｅｃｒｙｓｔａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｗａｓ　ｍｅｔｈａｎｏｌ．Ｕｎｄｅｒ　ａｂｏｖｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔ　ｃｏｍ－
ｐｏｕｎｄ　ｗａｓ　８６％～９３％ （ｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ　ｄｏｌａｒｓ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｖｅｒ　９８％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｈｅｎｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｅ；２－ｂｅｎｚｙｌ－２，３，４，５－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１　Ｈ－ｐｙｒｉｄｏ－［４，３－ｂ］ｉｎｄｏｌｅ；ｒｅｃｒｙｓｔａｌｉｚａｔｉｏｎ；ｉｍ－
ｐｒｏｖｅｄ　ｔｅｃｈｎｏｌｏ

ｇｙ
（上接第４４页）
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ
Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　Ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ
ＸＵ　Ｈｏｎｇ，ＨＵＡＮＧ　Ｙａ－ｌｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｑｉ－ｌｏｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｌｉ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒ　ｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ
Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）
Ｋｕｎｔｈ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｓ　ａ　ｒｅｓｕｌｔ，Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ　ｗａｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｙ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｎｅｗ
ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ；ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ