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苗药观音草总皂苷水提取工艺的研究
王 勇
（黑龙江江世药业有限公司，黑龙江 哈尔滨 150000）
苗药是指在苗医药理论指导下或苗族民间习用于防治疾病的
药物。苗药是在实践中逐步发展形成的具有苗族医药特色并具有较
强地域性的民族药,是我国传统医药的一个重要组成部分[1-3]。苗药
主要分布于苗族聚居的苗岭山脉、乌蒙山脉、大苗山脉及海南山地
等广大地区,如茯苓、天麻、桔梗、半夏、南星、首乌、黄精、钩藤、杜仲
等。观音草根能破瘀止痛,主治劳伤瘀血、月经不调、痛经等症。带根
全草能消肿、止痛、解毒,主治蛇咬伤、疮疖、疔毒,多用为镇痛药,治
胃肠疼痛及溃疡等症[4-5]。本文对观音草提取工艺进行研究。
1 实验部分
试剂与仪器:
石油醚(常州市耕耘化工有限公司)、正丁醇(东营合益化工有限
公司)、香草醛(上海北凌化工有限公司)、冰醋酸(上海北凌化工有限
公司)、高氯酸(常州市耕耘化工有限公司)、甲醇(东营合益化工有限
公司)。KHW-D-1LC精密拉伸水浴锅(上海科恒实业发展有限公司);
TGL20MW台式大容量高速冷冻离心机 (湖南赫西离心机仪器有限
公司); 上海雷磁PHS-3C酸度计 (北京联合科仪科技有限公司);RV
10 数显型 V旋转蒸发仪 (北京泰泽嘉业科技发展有限公司);EPED
(易普易达)-TF超纯水器 (南京易普易达科技发展有限公司);VER-
TEX VI500高效液相色谱仪(上海禾工科学仪器有限公司);UV-2200
双单色器双光束紫外/可见分光光度计(北京北分瑞利分析仪器(集
团)公司);现货赛多利斯BSA124S-CW电子天平(州市深华生物技术
有限公司);US6180DH数显型超声波清洗器(北京优晟联合科技有限
公司)。
2含量测定
2.1供试品溶液的制备: 取观音草提取液20毫升, 用石油醚萃
取6次,每次20毫升,弃去石油醚,再用水饱和正丁醇萃取4次,第一
次25毫升,第二次20毫升,第三次20毫升,第四次15毫升,合并正
丁醇层,弃去水层。将正丁醇层用水洗两次,每次40毫升,减压回收
正丁醇,将残渣用甲醇溶解并转移至10毫升容量瓶内,用甲醇定容,
摇匀,既得。
2.2对照品溶液的制备: 精密称取5mg薯蓣皂苷于一百毫升量
瓶中,加甲醇五十毫升,超声使溶解,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,既
得。
2.3波长的选择。分别取样品液适量、对照品1毫升, 置于10
毫升具塞试管中,挥干甲醇,先加5%香草醛冰醋酸溶液0.2毫升,再
加高氯酸0.8毫升,60摄氏度水浴15分钟,再置于冰水中5分钟,再
加5毫升冰醋酸,摇匀,以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范
围测定络合物的吸光度,络合物于460 nm波长处有最大吸收,故测
定时选用此波长。
2.4标准曲线的制备: 精密吸取对照品溶液0 mL、 .5 mL、1.0
mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL,分别置于10毫升具塞试管中,
挥干甲醇, 先加5%香草醛冰醋酸溶液0.2毫升, 再加高氯酸0.8毫
升,60摄氏度水浴15分钟, 再置于冰水中5分钟, 再加5毫升冰醋
酸,摇匀,用第一管作空白对照,在460nm处测吸光度,以吸光度(A)为
横坐标、浓度(C)为纵坐标,绘制标准曲线。线性范围为0.25~3.5mg。
3 结果
3.1提取温度对总皂苷得率的影响
分别称取观音草1公斤,加入10倍量纯化水,分别采用40摄氏
度、50摄氏度、60摄氏度、70摄氏度、80摄氏度、90摄氏度提取60
分钟。实验结果表明采用80摄氏度、90摄氏度回流提取总皂苷含
量高于其他温度提取。80摄氏度、90摄氏度回流提取黄酮含量无明
显差别,所有采用80摄氏度回流提取。
3.2提取次数对总皂苷得率的影响
称取观音草1公斤,加入10倍量纯化水,80摄氏度提取4次,每
次60分钟,分别对每次提取液进行含量测定。实验结果表明样品的
第三次和第四次提取液含量非常低,第二次的提取液虽然低于第一
次提取液但含量还很高,所以采用提取两次。
3.3提取时间对总皂苷得率的影响称
分别称取样品1公斤,80摄氏度分别提取2次,分别采用第一次
10倍量纯化水提取60分钟,第二10倍量纯化水提取60分钟;第一
次10倍量纯化水提取80分钟,第二次10倍量纯化水提取80分钟;
第一次10倍量纯化水提取100分钟, 第二次10倍量纯化水提取
100分钟,测定每次提取液含量。实验结果表明第一次提取80分钟
和提取100分钟含量无明显差别,提取80分钟含量明显高于60分
钟,所以采用第一次提取80分钟为提取时间。第二次提取60分钟、
80分钟、100分钟无明显差别,所以选择提取60分钟为第二次提取
时间。
3.4加水倍数对总皂苷得率的影响
分别称取样品1公斤,80摄氏度分别提取2次,第一次分别加入
8倍量、10倍量、12倍量、14倍量纯化水提取80分钟, 第二次分别
加入6倍量、8倍量、10倍量、12倍量纯化水提取60分钟。实验结
果第一次提取表明12倍量和14倍量纯化水含量无明显差别,12倍
量优于10倍量和8倍量,所以采用12倍量为提取的加水倍数。第
二次提取采用10倍量、12倍量纯化水提取无明显差别,10倍量高
于6倍量和8倍量,所以选择10倍量为第二次提取的加水倍数。
4 结论
观音草总皂苷最佳提取工艺为80摄氏度分别提取2次,第一次
分别加入12倍量纯化水提取80分钟, 第二次分别加入10倍量纯
化水提取60分钟。
参考文献
[1]宋立人总编.国家中医药管理局《中华本草》编委会[编].中华本草
[M].贵阳：贵州科技出版社,2005.
[2]冉懋雄,陈德媛,包骏,周茜,何忠丽.略论贵州苗族医药的发展历程
与医理方药特色[J].中国民族民间医药杂志,2000(1) .
[3]贵州省中药资源普查办公室,贵州省中药研究所编.贵州中药资源
[M].北京：中国医药科技出版社,1992.
[4]徐宏,杜江.苗药观音草在民间的使用及开发应用情况[J].中国民
族医药杂志,2006(5) .
[5]刘亮,杜江,潘炉台,冯华.苗药观音草中总皂苷的含量测定[J].中国
民族民间医药,2011(4).
摘 要：本文对观音草总皂苷提取工艺进行研究。观音草总皂苷最佳提取工艺为80摄氏度分别提取2次，第一次分别加入12倍量
纯化水提取80分钟，第二次分别加入10倍量纯化水提取60分钟。
关键词：观音草；提取；工艺
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