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金钟花花色苷的提取及其稳定性研究



全 文 :D(温度,℃)
35
45
65
C(时间,h)
3
5
7
B(盐酸,%)
0.5
1.0
1.5
A(乙醇,%)
40
75
95
水平
1
2
3
表 1 试验具体因素水平
因素
金钟花花色苷的提取及其稳定性研究
刘会超, 贾文庆, 周艳霞
(河南科技学院园林学院,河南 新乡 453003)
摘 要:以金钟花花瓣为试验材料,研究了其花色苷的最佳提取方案及稳定性。 结果表明,用 95%乙醇和 1%盐酸在 45℃条件
下浸提 7 h,效果最佳。 pH 值对金钟花花色苷稳定性影响显著;Na+、Cu2+、Ca2+对花色苷稳定性影响不显著,Zn2+对其影响显著;花色
苷的抗氧化性好,抗还原能力较差;葡萄糖、蔗糖等食品添加剂对金钟花花瓣花色苷无影响,柠檬酸对其影响较大。
关键词:金钟花; 花色苷; 提取; 稳定性
中图分类号:S685.99 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2010)10-0131-03
Studies on the extraction and stability of Forsythia Anthocyanin
LIU Hui-chao, JIA Wen-qing, ZHOU Yan-xia
(Horticulture and Landscape Architecture,Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China)
Abstract:The extraction and stability of anthocyanin was studied with the petal of Weeping Forsythia.The result indicated that the
optimum yield of anthocyan could be obtained by 95% ethanol and 1% hydrochloride at 45℃ for 7h. The pH had significant effect on the
anthocyan.If pH is lower,the anthocyan was suituable to keep its good heat resistance. Na+,Cu2+,Ca2+ had no effect on the anthocyan,but
Zn2+ had greater effect. The anthocyan had better oxidizability and worse reducibility. Glucose and Slucose had no effect on the anthocyan,
but the citric acid had greater effect.
Key words:Forsythia viridissima;Anthocyanin;extraction;stability
花色苷是人们最熟悉的水溶性天然食用色素, 作为
一种天然食用色素,安全、无毒,资源丰富,而且具有一
定营养和药理作用 [1],随着人们健康意识的逐步提高及
近年来合成色素毒性的不断发现, 天然色素已在人们的
日常生活中占有重要的地位,尤其在医药、食品及化妆
品等行业的生产与应用中, 人们对天然色素的研究和开
发非常广泛 [1]。
金钟花为木犀科连翘属落叶灌木,花朵金黄色,富含
天然色素,为早春重要的观花灌木。 可作花蓠或护堤树栽
植,其花、茎、果实、根均可入药。 目前已经发现金钟花叶的
水提取物(FSE)具有体外抗氧化、抗衰老和降血脂作用[2-4]。
近些年有关金钟花有效成分和药理作用的研究较多,但对
其花瓣花色苷的研究未见报道。 本试验对金钟花花瓣花色
苷的最佳提取方法和其稳定性进行了初步探讨,旨在为金
钟花的开发和综合利用提供一定的参考价值。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试材料为金钟花盛花期开放的花瓣, 于 2008 年 3
月 19 日采自河南科技学院校园西区,带回实验室后立即
放入-80℃冰箱保存备用。
1.2 试验方法
1.2.1 花色苷的提取 根据预试验,确定提取剂乙醇和盐
酸、时间、温度为试验的 4 个因素,采用 L9(34)进行正交试
验设计,共计 9个处理组合,每处理组合重复 3 次,其中物
料比均为 1∶20。精确称取 1.000 g花瓣 9份,装入试管。按
照表 1添加试剂,浸提一定时间后,筛选出最佳方案。在最
佳提取条件下制备花色苷提取液,备用。
1.2.2 金钟花花色苷稳定性研究 借鉴蒋新龙[5]的研究方
案并加以改进, 研究金钟花花色苷的光谱特性及不同 pH
值、温度、氧化还原剂、光照条件、金属离子、食品添加剂对
该花色苷的影响。
2 结果与分析
2.1 最佳浸提方案的确定
表 2的结果表明, 金钟花花色苷提取的 9 个组合中,
第 7 组合提取效果最好,吸光值最高、达 4.501(±0.001);
以 95%乙醇和 1%盐酸在 45℃条件下浸提 7 h,效果最佳;
乙醇对金钟花花色苷的提取影响最显著,时间、盐酸次之,
温度最小。
2.2 金钟花花色苷的光谱特性
从图 1 可以看出, 在波长 200~400 nm 的范围内,金
钟花花瓣花色苷的吸光度随着波长的增加呈现先上升后
下降后趋于平稳的趋势, 在 370 nm 处达到最大值 4.591
(±0.010),表明 370 nm 是该花色苷溶液的最佳吸收峰。
2.3 pH值对金钟花花色苷稳定性的影响
收稿日期:2010-04-12
基金项目:河南省创新人才工程(2005-126-49);河南科技学院博
士基金(050106);河南科技学院重点项目基金(5046)
作者简介:刘会超(1964-),男,博士,教授,E-mail:liuhc918@yahoo.
com.cn
广东农业科学 2010 年第 10 期 131
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2010.10.004
pH=11
3.071±0.003cC
3.116±0.004bB
3.135±0.00aA
3.109±0.003bB
3.078±0.007cC
pH=8
3.081±0.003bB
3.131±0.00aA
3.126±0.004aA
3.087±0.004bB
2.985±0.00cC
pH=6
3.103±0.004cB
3.167±0.07aA
3.112±0.003bB
3.080±0.00dC
3.114±0.004bB
pH=2
3.098±0.003bB
3.142±0.003aA
3.103±0.004bB
3.077±0.003cC
3.031±0.003dD
温 度
4(对照)
20
40
60
80
吸光度
表 3 温度对不同 pH值的花色苷稳定性的影响
Ca2+
3.016±0.008aA
2.928±0.006bB
2.923±0.004bB
2.923±0.002bB
2.922±0.002bB
Zn2+
3.016±0.008aA
2.872±0.003dD
2.888±0.002cC
2.893±0.002cC
2.921±0.005bB
Cu2+
3.016±0.008aA
2.916±0.002bB
2.913±0.002bB
2.911±0.003bB
2.914±0.002bB
Na+
3.016±0.008aA
2.929±0.002bB
2.930±0.003bB
2.934±0.001bB
2.936±0.002bB
金属离子浓度
0
0.005
0.010
0.050
0.100
表 4 加入不同浓度金属离子的花色苷水溶液在 370nm 处的吸光值
从图 2可以看出,在 370 nm处,金钟花花瓣的花色苷
的吸光度随 pH值的增加呈先增加后降低最后趋于平缓的
趋势,在 pH为 7时达到最高吸收值 3.482(±0.004)。观察发
现,花色苷颜色在酸性环境中呈绿色,随着 pH的增加颜色
逐渐变浅,pH为 7时变为黄绿色,在弱碱环境中呈淡黄色,
随着 pH的增加颜色逐渐加深,pH为 13时呈金黄色。 表明
金钟花花瓣花色苷在酸性中有良好的稳定性。
2.4 温度对金钟花花色苷稳定性的影响
温度对金钟花花色苷稳定性的影响结果(表 3)表明,
在低 pH 条件下,20℃时的吸光值最大, 分别为 3.142(±
0.003)(pH=2)、3.167 (±0.07)(pH=6);40℃时的吸光值与对
照最接近,60℃到 80℃吸光度逐渐下降。 总之,碱性条件下
温度对花色苷的影响显著,而在酸性条件下,4~40℃时花色
苷的稳定性较好,后随着温度的升高稳定性逐渐下降。
吸光度 A
2.866±0.006bB
3.684±0.021abAB
3.658±0.019abAB
4.027±0.023aAB
4.113±0.011aAB
2.866±0.025bB
4.501±0.001aA
2.850±0.004bB
3.813±0.011abAB
D
1
2
3
3
1
2
2
1
3
3.276
3.684
3.833
0.024
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
2.861
3.841
4.152
0.126
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
3.798
3.549
3.409
0.054
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
3.403
3.669
3.721
0.224
处理号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
r
表 2 正交试验结果
注:表中同列数据后小写英文字母不同者表示差异显著,大写
英文字母不同者表示差异极显著。 表 3~表 6 同。
图 1 金钟花花瓣花色苷的光谱特性曲线



波长(nm)
图 2 pH 值对金钟花花色苷稳定性的影响



pH
2.5 不同金属离子对金钟花花色苷稳定性的影响
表 4 结果表明,金属离子 Na+、Cu2+、Ca2+对金钟花花色
苷稳定性的影响不显著,而 Zn2+对其影响显著,分析认为
Zn2+可能与花色苷形成了某种络合物,而影响了花色苷的
稳定性。 花色苷在 Na+、Cu2+,、Ca2+、Zn2+金属离子溶液中颜
色几乎没有变化,这也表明金属离子 Na+、Cu2+、Ca2+对花色
苷稳定性影响不大。
2.6 不同氧化还原剂对金钟花花色苷稳定性的影响
不同氧化还原剂对金钟花花色苷稳定性的影响结
果(表 5)表明,H2O2 对花色苷的影响不显著 ,而 Na2SO3
对其影响极显著 。 这表明花色苷的抗氧化性比较好 ,
而抗还原性较差。 溶液颜色变化较大,而在 H2O2 溶液
中颜色变化最为显著。 这可能是由于花色苷中各花色
苷比例发生了变化, 从而引起颜色的变化。 低浓度的
Na2SO3 条件下花色苷溶液的颜色变化不明显 , 高浓度
的变化明显 ,这表明高浓度的 Na2SO3 对花色苷的影响
132
2.3 化学防治
2.3.1 注重调查,加强预测预报 柑桔矢尖蚧难防关键在
于其有保护介壳,若介壳已硬化,喷药对其无效,同时每代
延长时间,到 2~3 代就无明显界线之分,因此必须定期定
点进行细致观察,及时作出预报,指导防治工作,出现有第
1代幼虫就有必要喷药,做到严防第 1代,控制第 2 代,治
少第 3代。
2.3.2 及时喷药防治 药剂可选用石硫合剂、 氧化乐果、
乐斯本、敌敌畏加少量的洗衣粉。 2008 年 5 月 10 日发现
柑桔矢尖蚧成虫,5 月 15 日发现幼虫,6 月 6 日即喷第 1
次农药,6月 12 日、6 月 22 日、7 月 2 日各喷药 1 次,根据
调查,防治效果很好。
2.3.3 防治效果 由于 2008 年及时进行了上述综合防
治措施,收到了良好的效果。 2009年 5月 13日对 18个果
园顶点观察和大面积的柑桔园普查,经冬前刷掉越冬若虫
的, 虫口数平均为 28个, 未经刷过的虫口数平均为 228
个,对比减少 87.72%。 以后又经冬剪、夏剪和喷药防治,7
月 25日调查,处理过的虫口数平均为 3个,未处理的平均
为 40个,对比减少 92.5%;9月 5日调查,处理过的平均虫
口数为 1个,对照平均为 3个,对比减少 66.67%。 2009年
综合治理前查 1 000 株,有虫株 675 株,经综合治理后有
虫株 175株,减少 74.07%。
吸光度
3.016±0.008dD
3.095±0.003cC
3.128±0.003aA
3.113±0.002bB
3.126±0.002aAB
浓度
(mol/L)
0
0.01
0.05
0.10
0.20
处理
Na2SO3
吸光度
3.016±0.008aA
3.017±0.006aA
3.002±0.002bA
3.004±0.002bA
3.004±0.004bA
浓度
(mol/L)
0
0.3
0.6
0.9
1.2
处理
H2O2
表 5 氧化还原剂对金钟花花色苷稳定性的影响
20
3.031±0.002abA
3.068±0.003aA
3.042±0.001aA
10
3.030±0.007bA
3.046±0.002aA
3.037±0.005bB
5
3.063±0.004aA
3.028±0.002aA
3.041±0.002cC
0
3.171±0.003cB
3.171±0.003bB
3.171±0.003dC
食品添加剂
葡萄糖
蔗糖
柠檬酸
浓度(%)
表 6 常用食品添加剂对花色苷稳定性的影响
较大。
2.7 不同食品添加剂对金钟花花色苷稳定性的影响
结果 (表 6)表明 ,不同浓度的食品添加剂对花色
苷的稳定性影响不同, 葡萄糖和蔗糖对花色苷的影响
不显著, 而柠檬酸对花色苷的影响较大。 但颜色均无
明显变化 , 这也表明食品添加剂对花色苷影响不显
著。
3 结论与讨论
本试验浸提时间为 7 h,与蒋新龙 [5]、李永强等 [6]浸提
时间均>6 h比较接近。 提取剂:75%乙醇+0.5%盐酸,这与
他们的 95%和 1%也较接近,这表明花色苷易溶于酸和低
级醇。 提取温度为 45℃,明显小于其他花色苷的浸提温度
(80℃),即在较低的温度下就能到达最佳提取效果,这可
能是由于设置的梯度较少或者是该花色苷极易溶于提取
剂造成的。
抗氧化活性是花青素类色素一项显著的生理功能。
Choi[7]考察了从葡萄、甘薯、茄子和红甘蓝中提取的几种
不同的酰化花色苷的抗氧化活性 , 发现大多数酰化花色
苷都具有同 α-生育酚同样强度的抗氧化活性,金钟花花
色苷的抗氧化性良好, 这可能是因为金钟花花瓣含有较
多的生育酚类似物,且具有一定的抗还原性和热稳定性,
这可能是由它的结构所决定的, 花色苷是黄酮多酚类化
合物 [1],结构中酚羟基过少而造成氢键的数目减少,—OH
表现出较强的活性;该花色苷能产生令人欣悦的色彩,且
安全无毒,可以作染色剂和应用于化妆品领域;pH、金属
离子、光照及食品添加剂对该花色苷影响都不显著,这表
明金钟花花色苷的稳定性良好, 是一种可被人类开发利
用的理想天然色素。 但目前国内对植物花瓣中所含花色
苷类的研究起步不久,尚有大量的研究工作需要做,以扩
大其应用领域。
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