全 文 ：作者简介:潘萍(1983-),女 , 2005级在读硕士研究生;通讯
作者:潘金火(1963-), 男 , 博士后 , 教授 , 主要从
事药物制剂研究工作。
垂盆草中总黄酮含量的测定
潘　萍 ,潘金火 (南京中医药大学 药学院 , 江苏 南京 210046)
摘要:目的 建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法 , 测定波长为 501nm。结果 总黄酮检测浓度在
0.010 36 ～ 0.082 88 mg/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为 98.62%(RSD=1.11%, n=6)。
结论 本方法用于垂盆草中总黄酮的含量测定 ,结果准确 、可靠 、稳定。
关键词:紫外分光光度法;垂盆草;总黄酮;含量测定
中图分类号:R282.2　文献标识码:A　文章编号:1006-8783(2007)05-0509-02
　　垂盆草(SedumsarmentosumBunge)又称卧茎景
天 ,系景天科多年生草本植物垂盆草的新鲜或干燥
的全草 ,我国大部分地区均有分布。该药味甘 、淡 、
性凉 ,具有清热解毒 、利尿消肿 、排脓生肌之效 ,主治
丹毒溃疡 ,小便不利及急 、慢性肝炎等 。据有关文献
报道 ,垂盆草中含有氰苷 、黄酮类 、甾醇类和三萜类
等化合物 [ 1, 2] 。潘金火等[ 3, 4]对垂盆草的保肝降酶
活性成分进行了一系列的研究 ,证明垂盆草中具有
保肝降酶作用的活性成分主要存在于 H2O部分和
n-BuOH部分(主要含苷类和总黄酮),进而确认其
中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之
一 。本文采用经典的比色法对垂盆草中的总黄酮含
量进行测定 ,以为其后继的开发利用提供依据 。
1　仪器与试药
UV-2401型可见紫外分光光度计(日本岛津公
司);bp211D型十万分之一天平 (德国赛多利斯公
司);索式提取器等。
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:
086-9303);垂盆草(购于安徽省毫州市药材总公
司 ,经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授
鉴定为 SedumsarmentosumBunge的干燥全草 ,粉碎
至 40 ～ 60目);亚硝酸钠 、氢氧化钠 、硝酸铝 、乙醇等
为分析纯。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
精密称取于 120 ℃下减压干燥至恒重的芦丁对
照品 10.36 mg,置 50 mL容量瓶中 ,加 80%(体积分
数)乙醇 35 mL超声使之完全溶解 ,冷却至室温 ,以
80%(体积分数)乙醇稀释至刻度 ,摇匀 , 得浓度
0.2072mg/mL的芦丁对照品溶液 ,冷藏 ,备用 。
2.2　供试品溶液的制备
精密称取垂盆草药材粉末 1.0 g,置索氏提取器
中 ,加石油醚(60 ～ 90℃)100 mL在 85 ℃水浴温度
条件下回流提取至无色 ,弃去石油醚 ,药渣挥干石油
醚 ,再用 80%(体积分数)乙醇 100 mL在 100 ℃水
浴温度条件下回流提取 6 h,冷却后 ,用 80%(体积
分数)乙醇定容至 100 mL,备用。
2.3　定性鉴别反应
2.3.1　氨水反应
取样品溶液点于滤纸上 ,将滤纸在氨水上方熏
15 min,立即置紫外光下观察(254 nm),呈黄绿色荧
光斑点。
2.3.2　三氯化铝反应
取样品溶液点于滤纸上 ,滴加 5%(质量分数)
三氯化铝甲醇溶液 , 吹干呈灰黄色 ,在紫外光下
(254 nm)观察 ,呈黄绿色荧光斑点。
2.3.3　盐酸 -镁粉反应
取样品 1 mL,加少许镁粉 ,再滴加几滴浓盐酸 ,
水浴加热 2 min后显红色。
2.4　测定波长的选择
精密量取对照品溶液 3 mL和供试品溶液 5
mL,分别置 10 mL容量瓶中 ,加 5%(质量分数)亚
硝酸钠溶液 0.4mL,混匀 ,放置 6min;加 10%(质量
分数)硝酸铝溶液 0.4 mL,放置 6过 min;加 4%(质
量分数)氢氧化钠溶液 1.0 mL,用 80%(体积分数)
乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,以 80%(体积
分数)乙醇为空白同法配制空白对照液 。在 400 ～
700 nm波长处扫描 ,对照品与供试品溶液显色后均
在 501 nm左右波长处有最大吸收 ,故将 501 nm作
为测定波长。紫外光谱图见图 1。
509
第 23卷第 5期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.23 No.5
2007年 10月 JOURNALOFGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMACY Oct.2007
1.供试品;2.芦丁对照品;3.阴性对照
图 1　紫外扫描图谱
Fig.1　 UVSpectrum
2.5　专属性试验
取 “2.2”项下供试品溶液 5 mL,置 10 mL容量
瓶中 ,加 80%(体积分数)乙醇至刻度 ,以 80%(体
积分数)乙醇溶液为空白对照液 ,在 400 ～ 700nm波
长处扫描。未经显色的供试品在 501 nm左右波长
处基本无吸收 ,说明此显色方法的专属性较强 。紫
外扫描光谱见图 1。
2.6　标准曲线的绘制
分别精密量取对照品溶液 0.5、1.0、2.0、3.0、
4.0mL,各置 10mL容量瓶中 ,分别加 80%(体积分
数)乙醇至 5 mL,加入 5%亚硝酸钠溶液 0.4 mL,混
匀 ,静置 6 min;加入 10%(质量分数)硝酸铝溶液
0.4mL,摇匀 ,静置 6 min,加入 4%(质量分数)氢氧
化钠溶液 1.0 mL,再加 80%(体积分数)乙醇至刻
度 ,摇匀 ,放置 15min,以 80%(体积分数)乙醇为空
白同法配制空白对照液。分别于 501 nm波长处测
定吸光度 ,以吸光度值(A)对质量浓度(ρ)进行线性
回归 ,得回归方程 ρ=0.086 5A+0.001 2(r=0.999
8)。结果表明 ,芦丁检测浓度在 0.010 36 ～ 0.082
88 mg/mL范围内线形关系良好 。
2.7　精密度试验
取 “2.1”项下对照品溶液 5 mL,置 25 mL容量
瓶中 ,按 “2.4”项下的方法显色 ,于 501 nm波长处
测吸光度 5次 。结果 ,吸光度平均值为 0.4616, RSD
=1.94%,表明该方法精密度良好。
2.8　稳定性试验
取 “ 2.2”项下供试品溶液 5 mL,置 10 mL容量
瓶中 ,按 “ 2.4”项下的方法显色 ,于 0、20、40、60、80、
100、120 min时测定吸光度 。结果 RSD=1.16%。
表明样品显色后 120 min内稳定性良好 。
2.9　重现性试验
取药材样品 1.0 g,共 6份 ,精密称定 ,按 “2.2”
项下方法制备各供试品溶液 ,各取 5 mL再按 “2.4”
项下的方法显色 ,于 501nm波长处测定吸光度 。按
标准曲线法计算 , 结果 , 总黄酮的平均含量为
1.21%, RSD=1.67%,表明本方法重现性良好。
2.10　加样回收率试验
精密称取于 120℃下减压干燥至恒重的芦丁对
照品 50.86mg,置 50mL容量瓶中 ,加 80%(体积分
数)乙醇 35 mL超声使之完全溶解 ,冷却至室温 ,以
80%(体积分数)乙醇稀释至刻度 ,摇匀 , 得浓度
1.0172mg/mL的芦丁对照品溶液 ,备用 。取垂盆草
药材约 0.5 g,共 6份 ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,
分别加入浓度为 1.0172 mg/mL的芦丁对照品溶液
6mL,按 “2.2”项下方法制备各供试品溶液。取各
供试品溶液 5 mL,再按 “ 2.4”项下的方法显色 ,于
501 nm波长处测定吸光度 ,采用随行标准 ,标准曲
线法定量 ,结果见表 1。
2.11　样品含量测定
取 3个批号的垂盆草药材约 1.0 g,每批两份 ,
精密称定 ,按 “ 2.2”项下的方法制备各供试品溶液 ,
各取 5 mL再按 “ 2.4”项下的方法显色 ,于 501 nm
波长处测定吸光度。按标准曲线法计算 ,结果 3个
批号 070101、070111、070121的总黄酮含量分别为
1.21%、1.24%和 1.20%。
表 1　芦丁加样回收率试验
Tab.1　Resultsofrecoverytest(n=6)
m(样品量)/g m(样品中的量)/mg m(加入量)/mg m(测得量)/mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
0.502 1 6.125 6 6.103 2 12.099 4 97.88
0.505 3 6.164 7 6.103 2 12.190 5 98.73
0.507 2 6.187 8 6.103 2 12.281 6 99.85 98.62 1.11
0.503 6 6.143 9 6.103 2 12.227 0 99.67
0.501 2 6.114 6 6.103 2 12.135 9 98.66
0.500 8 6.109 8 6.103 2 12.026 6 96.95
(下转第 527页)
510
广东药学院学报 , 2007, 23(5)
可可碱的包衣工艺为 A2B3C2D2。即缓释层成分组
成是 EudragitRL∶RS质量比为 1∶1.5,肠溶层包衣增
重为 6%,缓释层包衣增重为 2.0%,固化时间是 3
h。经验证 ,己酮可可碱包衣片的批内 、批间重现性
好 ,体外释放 t50为(7.45±0.22)h, RSD均小于 2%,
证明此工艺稳定性好 。
2.3.3　PTX包衣片包衣工艺小结　将己酮可可碱
素片置包衣锅中 ,先包 1%羟丙甲基纤维素(HPMC)
的 80%乙醇溶液作为隔离层 ,再包以 EudragitRL∶
RS质量比为 1∶1.5的混合液作为缓释层 ,缓释层包
衣增重为 2.0%,最外层包以 EudragitFS30D水分散
体作为肠溶层 ,肠溶层包衣增重为 6%,包衣结束后
将片剂置 40 ℃烘箱中热处理 3h。
3　讨论
3.1　据文献报道 ,肠道中 pH值最高的部位不是结
肠 ,而是小肠末端的回盲部 ,约为 7.4±0.4,由于短
链脂肪酸 、CO2和一些发酵产物的存在 ,进入结肠后
pH又明显下降到 6.4左右 ,在疾病状态下会降至更
低 [ 3] 。一般的 pH依赖型包衣材料在 pH6 ～ 7时溶
解 ,如果系统通过小肠后仍不释药 , 可能会造成在
pH更低的结肠内释药延迟;如果系统提前释药 ,有
时药物根本不能到达结肠。所以本实验采用 0.1
mol/L盐酸溶液 、pH7.4的磷酸盐缓冲液优化片芯
包衣工艺 ,所采用的肠溶层包衣材料为 pH敏感型
材料 EudragitFS30D为阴离子型丙烯酸树脂 ,可在
pH>6.8时溶解 ,由于小肠末端的 pH为 7 ～ 8,因此
以这种材料包衣 ,衣膜将会在小肠末端接近升结肠
处开始溶解 ,随后缓慢释放药物 。而应用的缓释型
包衣材料为不溶于水和消化液的渗透型丙烯酸树脂
EudragitRL30D、EudragitRS30D。
3.2　在片芯的外层包以水溶性包衣材料羟丙甲基
纤维素 ,可防止片芯粘连 ,提高包衣质量 ,而对体外
释药行为无明显影响 ,所引起的释药时滞可以忽略。
3.3　本文以己酮可可碱为模型药物制备结肠定位
释药片 ,片芯制备工艺简单 、包衣工艺合理可行 、操
作性强 、成本低 ,适合工业大生产 。
参考文献:
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[ 2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [ S] .北
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(收稿日期:2007-05-14;修回日期:2007-09-21)
(上接第 510页)
3　讨论
提取总黄酮可采用不同浓度的甲醇 、乙醇 、丙酮
等作溶剂 ,但黄酮类化合物基本不溶于石油醚 [ 5, 6] ,
故先用石油醚脱脂 ,再选用 80%(体积分数)乙醇作
溶剂 ,可将黄酮苷和苷元较完全地提取出来 ,并避免
和减少多种水溶性成分的溶出。实验结果表明 ,在
该条件下总黄酮含量较高 ,为 1.22%。垂盆草中黄
酮类化合物具有很好的保肝降酶作用 ,所以垂盆草
有很好的开发利用价值。
参考文献:
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [ S] .北
京:化学工业出版社 , 2005.148.
[ 2] 魏太明 , 阎玉凝 , 关昕璐 , 等.垂盆草的化学成分研究 I
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(收稿日期:2007-05-16;修回日期:2007-06-26)
527
第 5期　吴杏梅.己酮可可碱结肠定位包衣片制备工艺研究