全 文 ：收稿日期: 2006 - 12 - 07
作者简介:李家春 ( 1977 - ), 男,安徽舒城人, 2004级硕士研究生,
主要从事中药化学研究。
图 1 三七显微鉴别
常温下挥去药渣中丙酮, 再以 30mL水分 3次浸泡, 倾去水
溶液,加丙酮 10mL浸泡 15m in, 滤过,滤液作为供试液。
2. 3. 2 阴性对照溶液的制备 取不含红花的本处方药材,
按 / 2. 3. 1供试品溶液的制备0下方法制得。
2. 3. 3 对照药材溶液的制备 取红花对照药材 0. 1g, 研
细,以下步骤按 / 2. 3. 1供试品溶液的制备0下方法制得。
2. 3. 4 薄层结果 分别吸取上述 3种溶液 5LL, 点于同一
含有 0. 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 H 薄层板上,
以丙酮 -甲醇 -水 ( 10B3B2)为展开剂, 展开后, 取出晾干
在可见光下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位
置上,显相同颜色的斑点; 在与阴性对照溶液色谱相应的该
位置上,无相同颜色的斑点。
2. 4 三七显微鉴别
取红药片 5片 ,除去糖衣, 研细,取粉末适量, 水和氯醛
透化,置显微镜下观察, 树脂道碎片含黄色分泌物,见图 1。
2. 5 红花显微鉴别
取红药片 5片 ,除去糖衣, 研细,取粉末适量, 水和氯醛
透化,纺锤形韧皮薄壁细胞有 1 ~ 2隔膜分隔,壁上常有斜
网格纹理。
3 讨 论
对川芎和当归的薄层鉴别进行了探索, 由于两者含有
阿魏酸,薄层上相互干扰。根据药典及相关文献, 采用对川
芎和当归同时进行薄层鉴别的方法, 排除干扰,方法准确、
可靠,重现性好。
本文在参考了若干文献 [1 - 4]后, 确定了以丙酮 -甲醇
-水 ( 10B3B2)为展开剂, 斑点清晰, 本方法准确、可靠, 重
现性好。由于红药片中红花所占的比例偏低,所以鉴别时
应增加样品用量。
参考文献
[ 1 ] 陶海, 赵晶. 健骨活血丹的质量控制 [ J ]. 辽宁中医杂志,
2006, 33( 6 ) : 476 - 477
[ 2 ] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花 [ J ].首都医
药, 2000, 7( 7 ) : 498
[ 3 ] 陈卫军,王新春,袁勇,王冰林.复方当归红花酊的薄层色谱
鉴别 [ J].时珍国医国药, 2004, 15( 6) : 343 - 344
[ 4 ] 周本杰,张笑云,李梅,等. 骨伤酒中没药及红花的薄层色谱
鉴别 [ J].时珍国医国药, 2000, 11( 9) : 803 - 804
[ 5 ] 王艳萍,王伟东,等.沈阳红药片的质量标准研究 [ J ].中国实
验方剂学杂志, 2001, 7( 4 ): 10 - 11
第 25卷 第 5期
2 0 0 7年 5月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 5
M ay 2 0 0 7
中华中医药
987
学刊
RP -HPLC法测定垂盆草胶囊中槲皮素的含量
李家春,彭国平,孙 兰
(南京中医药大学,江苏 南京 210029)
摘 要:目的: 建立一种测定垂盆草胶囊中槲皮素的方法。方法: 采用 RP -HPLC法,色谱柱为 ODS柱, 流动
相: 0. 1%三氟乙酸溶液 B甲醇 ( 58B42) , 检测波长: 371nm, 柱温: 30e 。结果: 建立的色谱方法能使槲皮素在
5. 05~ 60. 6Lg /mL范围内, 线性关系良好 ( r = 0. 9999) , 平均回收率 100. 6% , 重现性实验 RSD = 1. 07% ( n =
6)。结论:本法简便准确可用垂盆草胶囊的含量测定。
关键词:垂盆草胶囊;反相高效液相色谱法; 槲皮素;含量测定
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 05 -0987 - 02
Determ ination of Sedum Sarmentosum Bunge Capsules by RP -HPLC
L I Jia-chun, PENG Guo-ping, SUN Lan
( Nanjing Unive rsity o f T rad itional ChineseM edicine, N an jing 210029, Jiangsu, Ch ina)
Abstrac:t Ob jective: To e stablish a m ethod fo r de term ination of Querce tin in Sedum sa rm entosum Bunge Capsu le s.
M ethods: Reversed pha se h igh pe rfo rmance liqu id chrom a tog raphy w as adopted using ODS co lum n, them ob ile pha sew as
0. 1% TFA so lu tion -m ethanol( 58B42) and its mob ile ra te w as 1. 0 mL /m in. The de tec tive w ave leng th w as 371nm. The
temperature o f co lum n w as 30e . R esu lts: Under the adopted chrom a tog raphic conditions, Que rce tin had fine linear re-
sponse s ( r = 0. 9999) w ith average recove ry o f 100. 6% and repeatab ility precision RSD of 1. 07% ( n = 6) .
C onclusion: This m ethods w as sim ple and accurate and it can be used in quantitative dete rm ina tion fo r Sedum sa rm ento-
sum Bunge C apsules.
Keywords: sedum sarm entosum bunge capsu le s; RP -HPLC; quercetin; quantitative determ ination
987
DOI：10.13193/j.archtcm.2007.05.124.lijch.052
第 25卷 第 5期
2 0 0 7年 5月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 5
M ay 2 0 0 7
中华中医药
988
学刊
垂盆草 Sedum sarm entosum B unge为景天科多年生草木
植物,分布广泛。它具有清热解毒, 抗菌消炎作用。垂盆草
胶囊具有清利湿热,降低谷丙转氨酶的作用,临床上用于急
性肝炎,迁移性肝炎及慢性肝炎活动期的治疗。化学研究
表明,垂盆草含有黄酮及其苷、三萜、甾醇、生物碱、氰苷、氨
基酸、糖类等成分 [1 - 3]。目前垂盆草及其上市的制剂缺少
有效的质量控制方法, 无法保证成药质量的均一性。黄酮
及其苷类化合物是其主要成分之一, 本文就拟测定垂盆草
胶囊中槲皮素的含量, 为制剂的质量控制提供一种思路。
1 仪器与试药
W ate rs D lta 600高压输液泵, W a ters 2487检测器, W a-
te rs 600控制器。TU -1800 s分光光度计 (北京普析通用仪
器有限责任公司 ), 槲皮素对照品购自中国药品生物制品
检定所 (供含量测定用, 批号为 0081 - 9304)。甲醇色谱纯
(淮阴汉邦科技有限公司 ), 三氟乙酸为色谱纯 ( Tedia com -
pany ),水为去离子水。垂盆草由黄山龙源药业提供, 垂盆
草胶囊为实验室自制。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱 ; K romasi:l ODS
C18 ( 4. 6mm @ 250mm, 5Lm ); 流动相: 甲醇B0. 1%三氟乙酸
水溶液 ( 42B58) ;流速: 1. 0m L /m in;检测波长: 371nm; 柱温:
30e ;进样量: 5LL。在该条件下槲皮素和其他干扰成分能
够得到较好的分离, 按槲皮素峰计算理论塔板数应不低于
2000。
2. 2 对照品纯度试验 取槲皮素对照品适量, 加甲醇制成
0. 1mg /mL的对照品溶液。精密吸取槲皮素对照品溶液
5LL, 照高效液相色谱法 ( 2005年版《中国药典》一部附录 )
测定,将保留时间延长 1倍和缩短 1倍未见有杂质峰出现。
图 1 槲皮素紫外图谱
图 2 槲皮素结构
2. 3 标准曲线绘制 取于 60e 真空干燥至恒重的槲皮素
对照品适量,精密称定 , 置于 50m L容量瓶中, 加甲醇溶解
并稀释至刻度,制成槲皮素标准贮备液 ( 0. 101mg /m L)。再
分别精密移取 0. 5、1、2、3、4、5、6m L于 10mL容量瓶中, 加
甲醇稀释至刻度,配制成系列对照品液,分别吸取上述溶液
5LL, 注入液相色谱仪, 测定, 以峰面积为纵坐标 ( Y ), 对照
品浓度 (Lg /m L)为横坐标 ( X ), 绘制标准曲线, 得回归方
程: Y = 94131X -23497 ( r = 0. 9999)槲皮素浓度在 5. 05
~ 60. 6Lg /m L之间呈良好的线性关系。
2. 4 精密度考察 精密吸取槲皮素对照品溶液 5LL, 重
复进样 6次, 测定,结果槲皮素峰面积的 RSD= 0. 56%。
2. 5 重现性试验 取同一批样品,精密称取 6份,按样品
含量测定方法提取、分析, 结果槲皮素峰面积的 RSD =
1. 07%。
2. 6 稳定性试验 将制备好的供试品溶液进行进样分
析,以后每 2h进样 1次, 测定 6次, 槲皮素含量的 RSD=
0. 60% , 表明供试品溶液的含量在 10h内稳定。
2. 7 回收率测定 精密称取同一批垂盆草胶囊内容物各
1. 5g共 6份, 2份 1组, 各组分别加入了槲皮素对照液
( 1. 01m g /mL ) 1. 28、1. 60、1. 92m L。各份均依样品测定方
法操作。结果槲皮素平均回收率为 100. 6% , RSD =
0. 94%。
2. 8 样品测定 取本品装量差异项下内容物, 研细, 取粉
末 1. 5g, 精密称定, 置 100mL具塞锥形瓶中, 加入 60%甲
醇 50mL,称重, 超声提取 30m in(超声功率为 250W, 频率为
50kH z), 放冷, 补足失重, 摇匀后过滤, 精密量取续滤液
25mL,加入 25%盐酸 ( g /g) 6mL水浴回流水解 60m in, 快速
冷却, 转移至 50mL量瓶中,加入 25%氢氧化钠 4mL,冷却,
60%甲醇定容至刻度, 摇匀,取样过膜 ,即得。
精密吸取槲皮素对照品溶液、供试品溶液各 5LL, 注入
高效液相色谱仪,测定峰面积, 计算结果见表 1。
表 1 样品含量测定结果
批号 槲皮素 ( m g /capsu le)
1 0. 391
2 0. 412
3 0. 397
3 讨 论
3. 1 波长的选择 槲皮素属于黄酮醇类化合物, 在溶剂甲
醇中带Ⅱ苯甲酰系统的吸收峰是 255nm, 带Ⅰ桂皮酰系统
的吸收峰是 371nm,紫外光谱显示在 371nm 处吸收较强,且
在该波长下基线的噪音小、检测灵敏度度高, 因此选择
371nm作为检测波长。
3. 2 流动相的选择 本实验涉及到的色谱分离主要是一
些黄酮类化合物,因此必须选择酸性流动相, 主要是使被分
离物保持单一的分子态进行色谱分离。酸性试剂的选择
上,采用色谱纯的三氟乙酸, 与常用的磷酸及其缓冲盐比较
存在较大优势。三氟乙酸为中等强度的挥发性有机酸, 可
以适用于较大的酸性范围, 不会在高压输液泵和色谱柱内
残留, 从而延长仪器和色谱柱的使用寿命, 此外还具有一定
的离子对试剂样作用。
3. 3 样品处理方法的选择 实验中, 曾将样品超声提取后
直接过膜进样,发现样品中槲皮素的含量非常的微量, 经酸
水解后,发现槲皮素基本上是以糖苷的形式存在的。因此
样品处理中采用先提取再水解的方式。
参考文献
[ 1 ] 张洪超,兰天,张晓辉,等. 垂盆草化学成分与药理作用研究
进展 [ J].中成药, 2005, 27( 10) : 1201 - 1203
[ 2 ] 魏太明, 阎玉凝, 关昕璐, 等.垂盆草的化学成分研究 (Ⅰ )
[ J ].北京中医药大学学报, 2003, 26( 4) : 59 - 61
[ 3 ] 任风霞,赵毅民.垂盆草化学成分及药理作用研究进展 [ J ].
现代中药研究与实践, 2003, 17 ( 1) : 58 - 60
988