全 文 ：　　
作者简介:肖远灿 ,男 ,硕士研究生　　*通讯作者:胡凤祖 ,副研究员 ,硕士生导师　　Tel:(0971)6132750　　E-m ail:hufz@ nw ipb. ac. cn
RP-HPLC测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯含量
肖远灿 1, 2 ,胡凤祖 1*(1.中国科学院西北高原生物研究所 ,西宁 810001;2.中国科学院研究生院 ,北京 100049)
摘要:目的　建立了反相高效液相色谱法同时测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯的方法。方法　采用 Phenomenex
K romasil C18色谱柱(4. 6 mm ×250 mm, 5.0 μm);流动相为乙腈-0.04%磷酸溶液(50∶50);检测波长:194 nm;流速:1. 0 m L
m in- 1。结果　异构体土木香内酯和异土木香内酯达到基线分离 ,含量测定的线性良好 , 线性范围和相关系数分别为 0. 07 ～
4. 80 μg L - 1(r=0.999 8), 0.07 ～ 4. 85 μg L -1(r=0. 999 8);回收率分别为 97. 5%和 102.1%;方法精密度良好 , RSD分别
为 1. 56%和 1.87%(n=5);方法重现性良好 , RSD分别为 1. 67%和 0. 92%(n=5)。结论　所建立的方法简便 、快捷 、准确 ,重
现性好 , 可用于藏木香药材及其制剂的质量控制。
关键词:反相高效液相色谱法;藏木香;土木香内酯;异土木香内酯;含量测定
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001 -2494(2007)07 - 0491 -003
Determ ination ofA lantolactone and Isoalantolactone in H erb Inula racemosa Hook. f. by RP-HPLC
XIAO Yuan-can1, 2 , HU Feng-zu1*(1.NorthwestP lateau Institute ofB iology, ChineseAcademy of Sciences, X ining 810001, Ch ina;
2. Graduate School, Ch inese Academy of Sciences, B eijing 100049, Ch ina)
ABSTRACT:OBJECTIVE　 To e stab lish a quan tita tive RP-HPLC m ethod fo r the simultaneous de te rm ina tion of alanto lactone and
isoa lantolactone in he rb Inula racem osa H ook. f..METHODS　A co lum n of Phenomenex K rom asil C18(4. 6 mm ×250 mm , 5.0 μm)was
used. The mobile phase consisted o f ace tonitrile and 0. 04% phosphate (50∶50). The flow rate was 1. 0 mL m in- 1 w ith UV detection
w ave leng th a t 194 nm.RESULTS 　 Isome r alanto lactone and isoa lantolactone showed good separab le degree.A good linearity was ob-
tained w ith the co rre la tion coe fficien ts ranged of 0. 07 ～ 4.80 μg L -1(r=0.999 8) and 0.07～ 4.85μg L - 1(r=0.999 8). The ave r-
age recoveries w ere 97.5% and 102. 1%. The prec ision and accuracy of the assay we re 1.56% and 1.87%(n=5). CONCLUSION　
The m ethod is rapid, accu rate, re liab le and can be used to control the qua lity o f herb Inula racem osa H ook. f. and it products.
KEY WORDS:RP-HPLC;Inula racem osa H ook. f.;a lan to lactone;isoa lan to lactone;dete rm ina tion
(C-5″), 62.8(C-6″), 52.4 (COOM e)。以上数据与
文献[ 6]报道的 jasm inoside一致 ,故鉴定为 jasm ino-
side。
化合物 8:白色针晶 (CH3OH), mp 191 ～ 192
℃,体积分数为 5%的硫酸-乙醇溶液显蓝色。 ES I-
MSm /z:395 [M +Na] +, 373 [M +1 ] +;1 H-NMR
(500MH z, CD3OD)δ:3.84(6H , s, 3, 5-OM e), 4.35
(2H , dd, J =5.4, 1.4 H z, H-9), 6.21(1H , d t, J =
15.6, 5.4 Hz, H-8), 6.44(1H , d t, J =15.6 , 1.4 Hz,
H-7), 6.73(2H , s, H-2, 6), 4.83(1H , d, J =7.8 Hz,
H-1′G lc);13 C-NMR(125MH z, CD3OD)δ:134.1(C-
1), 153.6(C-3, 5), 107.4 (C-2, 6), 135.7(C-4),
128.6(C-7), 130.3(C-8), 105.3(C-1′), 75.4(C-
2′), 77.4(C-3′), 71.1(C-4′), 78.4(C-5′), 62.6(C-
6′), 56.5(2, 6-COOM e)。以上数据与文献 [ 7] 报道
的丁香苷一致 ,故鉴定为丁香苷 (sy ring in)。
化合物 2和 6与相应对照品对照 , R f值一致 ,
且混合熔点不下降 ,分别鉴定为 β-谷甾醇 ,胡萝卜
苷。
REFERENCES
[ 1] 　 Jiangsu New M ed ica lCollege.D ictionary of Ch ineseM ateriaM ed i-
ca (中药大辞典) [M ] . Shanghai:Shangh ai Scien tific and
Technica lPublisher, 1977:1825-1826.
[ 2] 　 RIOS M Y, SALINA D, VILLARREAL M L, et a l. Cytotoxic ac-
t ivity ofmoronic acid and iden tification of th e new triterpene 3, 4-
seco-olean-18-ene-3, 28-d ioic acid from Phorad endron reich enba-
ch ianum[ J] .P lantaM ed, 2001, 67(5):443-446.
[ 3] 　 CHEN B, ZHU M , X ING W X , et a l. S tud ies on the chem ical
constituen ts from E uca lyptu s giobulus[ J] .Ch ina J Ch in Ma ter
Med(中国中药杂志), 2002, 27(8):596-597.
[ 4] 　 CHENW S, JIA XM. C hem ica lconst ituen ts ofSa lvia przewa lskii
M axim [ J] .Acta Pharm S in(药学学报), 2003, 38(5):354-
357.
[ 5] 　 SALIMUZZAMAN S, FARRUKH H , SAB IRA B, et a l. O lean-
derd, a new pentacyclic triterp ene f rom the leaves ofN erium ole-
ander[ J] .J Na tP rod, 1988, 51(2):229-233.
[ 6] 　 SHEN Y C, LIN S L. N ew secoiridoid g lucosides from Jasm inum
lanceola rium[ J] .P lan taM ed, 1996, 62:515-518.
[ 7] 　 LI J, J IANG Y, TU P F, et a l. S tud ies on chem ical constituen ts
f rom roots ofP olyga la tricorn is[ J] .Ch ina J Chin MaterM ed(中
国中药杂志), 2006, 31(1):45-47. (收稿日期:2006-06-21)
491 中国药学杂志 2007年 4月第 42卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　 Ch in Pharm J , 2007 Apri l, Vo l. 42 No. 7
　　藏木香为菊科植物藏木香 (Inu la racemosa
Hook. f.)和 Inula helen ium L.的干燥根 ,具有健脾
和胃 ,调气解郁 ,止痛安胎作用 ,用于胸肋 、脘腹胀
痛 ,呕吐泻痢 , 胸肋挫伤 , 岔气作痛 ,胎动不安等
症 [ 1-2] 。现代研究表明 ,土木香内酯和异土木香内酯
是藏木香的主要活性成分 ,具有显著的抗炎 、保肝活
性 ,可抑制感染人型结核杆菌 ,还能清除活性氧自由
基 [ 2-7] 。目前 ,对土木香内酯和异土木香内酯的定量
分析主要有毛细管电泳法 [ 3] ,气相色谱法 [ 4-5] ,薄层
扫描法 [ 6-7] ,单扫示波极谱法 [ 8]等 ,而对它们的高效
液相色谱分析法报道较少 。本实验建立了 HPLC-
PAD同时测定藏木香中土木香内酯和异土木香内
酯含量的方法 ,为更好地控制藏木香药材及其制剂
的质量和相关质量标准的建立提供了依据 。
1　仪器和试药
高效液相色谱仪:W aters 515双泵 、W aters 2996
PAD二级管阵列检测器 、Waters Empow e r色谱工作
站 。
土木香内酯 (110760-200204)和异土木香内酯
(0761-200002)对照品 (中国药品生物制品检定
所 ),藏木香药材 (Inu la racemosa Hook. f.,青海金诃
藏药药业股份有限公司 ),乙腈 (色谱纯 ),甲醇 (分
析纯),磷酸 (分析纯),水为超纯水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件和系统适应性实验
色谱柱:Phenomenex K romasilC18(4.6mm ×250
mm , 5.0 μm)。流动相:乙腈-0.04%磷酸溶液 (50∶
50)。检测波长 194 nm。流速:1.0 mL m in-1。柱
温:30 ℃,进样量 10μL。
在该色谱条件下测定土木香内酯和异土木香内
酯对照品溶液 ,藏木香药材供试品溶液 ,色谱图见图
1。如图 1所示 ,土木香内酯和异土木香内酯达到基
线分离 ,理论塔板数分别为 3 235和 3 619。
2.2　对照品溶液及供试品溶液的制备
2.2.1　对照品储备液的制备　精密称取土木香内
酯 9.6mg,异土木香内酯 9.7 mg用甲醇分别溶于
10 mL量瓶中 ,定容至刻度 ,摇匀 ,得各自的对照品
溶液。精密吸取各对照品溶液 5.0 mL,置于 10.0
mL量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,得土木香内酯
0.48 g L -1 ,异土木香内酯 0.485 g L -1的混合对
照品储备液 。
2.2.2　供试品溶液的制备　取藏木香药材 100 g,
粉碎 ,过 40目筛 ,精确称取该粉末 0.200 g于 100
mL具塞三角瓶中 ,加甲醇 80 mL,超声 40 m in,放
　　
图 1　HPLC色谱图对照品和藏木香药材的色谱图
A -对照品 HPLC色谱图;B -对照品紫外光谱图;C -藏木香制备液 HPLC色
谱图;D -藏木香制备液相关物质紫外光谱图;1 -异土木香内酯;2 -土木香
内酯
Fig 1　Chrom atog ram s o f reference and samp le
A -HPLC o f chem ical re fe rence substance;B - UV spec trum o f reference sub-
stance;C -HPLC of samp le;D -UV spec trum o f re lated substance of sample;1 -
isoa lantocac tone;2 - a lanto lac tone
冷 ,过滤并定容于 100 mL量瓶中 ,摇匀 ,过 0.45 μm
微孔滤膜 ,续滤液作为供试品溶液 。
2.3　线性范围
取 “ 2.2.1”中制备的对照品储备液 1.0mL, 采
用倍比稀释法制成系列质量浓度的溶液 ,在 “2.1”
色谱条件下 ,取 10 μL注入液相色谱仪分析并记录
结果 (色谱峰面积 )。以对照品进样量 (x, μg)为横
坐标 ,峰面积 A为纵坐标 ,进行线性回归 ,得土木香
内酯和异土木香内酯回归方程及相关系数如下:
土木香内酯:A =39 321x - 167 128 , r =
0.999 8;线性范围:0.07 ～ 4.80μg;
异土木 香 内 酯:A =32 234x - 82 248,
r=0.999 8;线性范围:0.07 ～ 4.85μg。
2.4　精密度实验
取混合对照品溶液 (土木香内酯 120.00 mg
L
-1 ,异土木香内酯 121.25 mg L -1),重复进样 5
次 ,每次 10 μL,记录色谱峰面积。结果 ,土木香内
酯和异土木香内酯含量的 RSD分别为 1.56%和
1.87%。
2.5　重复性实验
取同一批藏木香药材 ,按 “ 2.2.2”项下方法 ,重
复 5次取样制备供试品溶液 ,按 “ 2.1”项下方法测
定并计算含量 ,土木香内酯和异土木香内酯含量的
RSD分别为 1.67%和 0.92%。
2.6　回收率实验
取已测知含量的同一批藏木香药材 6份 ,每份
0.100 g,其中 5份按约等含量精密加入土木香内酯
和异土木香内酯对照品 ,另一份不加对照品 ,然后按
“2.2.2”项下方法处理并测定含量 ,求得土木香内
492
Ch in Pha rm J , 2007 April, Vol. 42No. 7　　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2007年 4月第 42卷第 7期
酯和异土木香内酯的回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率结果 .n=5
Tab 1　Recove ry o f the assay.n=5
Components
Backg round
/mg
Added
/mg
D etected
/mg
Recove ry
/%
A ve rage recove ry
/%
RSD
/%
A lantlac tone 2.31 2.25 4.50 97.3
2.31 2.37 4.66 99.2
2.31 2.28 4.51 96.5 98.2 2. 43
2.31 2.02 4.25 96.0
2.31 2.13 4.48 101.9
Isoa lantlac tone 2.66 2.74 5.50 103.6
2.66 2.63 5.33 101.5
2.66 2.69 5.38 101.1 101.4 1. 92
2.66 2.52 5.14 98.4
2.66 2.43 5.15 102.5
2.7　稳定性实验
称取藏木香样品 0.200 g,按 “2.2.2”项下方法
处理 ,得供试品溶液 ,分别于 0, 2, 4, 6, 8, 10 h测定
土木香内酯和异土木香内酯 ,记录相应峰面积 ,计算
6次进样相应物质峰面积的 RSD值。土木香内酯和
异土木香内酯峰面积的 RSD分别为 1.43%和
0.87%,表明供试品溶液在 10 h内含量基本保持稳
定 。
2.8　样品测定
对青海金诃藏药药业股份有限公司提供的 3批
藏木香药材按 “2.2.2”项下方法处理 ,在 “ 2.1”色谱
条件下进样 。测定峰面积 ,按标准曲线法计算其中
土木香内酯和异土木香内酯的含量 ,结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果 .n =4
Tab 2　Results of de te rm ina tion o f samp les.n =4
Components LotN o. Content /mg g - 1
A lantla ctone 050801 22. 82
050802 23. 15
050803 23. 03
Isoalan tlactone 050801 26. 56
050802 25. 92
050803 26. 75
3　讨　论
3.1　提取方法的考察
参考文献 [ 3-7]中对土木香内酯和异土木香内酯
的提取 ,分别采用氯仿冷浸提取 16 h和甲醇超声提
取的方法对同一批样品进行了提取和测定 ,比较了
二者对目标物质土木香内酯和异土木香内酯的提取
率 ,发现该两种方法的提取率差别不大。然而氯仿
冷浸法耗时长 ,操作较繁琐 ,不利于快速 、及时分析 ,
故采用甲醇超声提取法处理样品。比较了超声处理
时间对提取率的影响 ,发现超声 40 m in能较完全的
提取药材中的土木香内酯和异土木香内酯 ,所以采
用甲醇超声处理 40 m in为提取方法 。
3.2　检测波长的选择
选择较高灵敏度的检测波长可以提高分析的精
密度 ,同时也可以降低最小检测量。本实验采用
PAD检测器在 190 ～ 400 nm内对对照品溶液和样品
溶液进行了全波长扫描 。由紫外扫描结果可知 ,土
木香内酯和异土木香内酯分别在 193.9和 195.1
nm有最大吸收 ,故选择 194 nm作为检测波长。
3.3　流动相的选择
分别采用乙腈-水 ,甲醇-水流动相体系进行实
验 ,结果发现 ,乙腈-水体系有更好的色谱表现 ,对目
标峰的干扰较小。经过对乙腈-水比例多次调整 ,在
权衡分离度与分析时间后 ,选择了乙腈-水 (50∶50)
作为流动相。另外 ,为了改善目标物质色谱峰峰形 ,
在流动相体系中还加入的少量磷酸。
3.4　方法的优缺点
与目前土木香内酯和异土木香内酯等定量分析
方法相比 ,本实验建立的反相高效液相色谱分析法
较气相色谱法耗时较长 ,检测限较高 ,但重现性好;
较薄层扫描法定量准确 ,简便;较毛细管电泳法和单
扫示波极谱法更具通用性和实用性。
4　结　论
本实验建立的同时测定藏木香药材中土木香内
酯和异土木香内酯含量的方法 ,样品处理操作简便 ,
精密度高 ,重复性好 ,选择性好 ,干扰较小 ,适合藏木
香药材及其制剂中土木香内酯和异土木香内酯含量
的分析 ,可以作为藏木香药材及其制剂质量控制的
量化方法 。
REFERENCES
[ 1] 　 Ch.P(2005) VolⅠ (中国药典 2005年版 .一部)[ S] .2005:
13.
[ 2] 　 LUO D S.T ibetan Herba l of Ch ina(中华藏本草)[M ] .Beijing:
Nationalit ies Pub lish ing H ou se(民族出版社), 1997:254-255.
[ 3] 　 WANG K T , LIU H T, ZHAO Y K , et a l. S eparation and determ i-
nation of alantolactone and isoalan tolactone in trad itionalCh inese
herbs by capi llary electrophores is [ J] .Ta lanta, 2000, (52):
1001-1005.
[ 4] 　 WANG X L, LUAN Y, LIU Y J, et a l. GC determ ination alanto-
lactone in herb Inu la helen ium L [ J] .J Shandong U niv Trad it
Ch in(山东中医药大学学报), 2005, 29 (4):322-323.
[ 5] 　 X IA J, JI S. D eterm ination of isom ers in Radix Inu lae byGC[ J] .
Ch in Pha rm J(中国药学杂志), 2005, 40 (24):1895-1896.
[ 6] 　 LIG L,WANG H L, LIAN R Q. A ssay alantolactone in herb In-
u la helenium L. by th in layer scanning [ J] .Ch in J E xp Trad it
M ed F orm(中国实验方剂学杂志), 2002, 8(6):62-63.
[ 7] 　 YAN Z J, GAO L,WANG H Y, et a l. A ssay isoalantolactone in
herb Inu la helenium L. by th in layer scanning[ J] .Ch in J E th-
nom ed E thnopha tm(中国民族医药杂志) , 1999, 12 (5):132.
[ 8] 　 YUAN Z B, ZOU H. O n the elect roch em ical behavior of alanto-
lactone[ J] .J In strum Ana l(分析测试学报), 1998, 17(2):47-
49.
(收稿日期:2006-06-20)
493 中国药学杂志 2007年 4月第 42卷第 7期　　　　　　　　　　　　　　　 Ch in Pharm J , 2007 Apri l, Vo l. 42 No. 7