全 文 ：HPLC法测定3种杂交翠菊花色苷的含量
陈亮1，3，李公斌2，辛秀兰3，袁其朋1，*
（1．北京化工大学生命科学与技术学院，北京 100029；2.淄博职业学院，山东淄博 255314；
3.北京电子科技职业学院，北京 100029）
摘 要：采用高效液相色谱法（HPLC）对 3种不同颜色的杂交翠菊花色苷含量进行测定。使用 1 %盐酸甲醇溶液分别
对 3种不同颜色翠菊花色苷进行提取,以矢车菊-3-O-葡萄糖苷为对照品,使用 Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），以甲醇-5 %甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为 1 mL/min，检测波长为 520 nm。结果表明，粉红色、
紫红色、蓝紫色 3种杂交翠菊花色苷含量分别为 168.15、614.89、193.89 mg/100 g，紫红色杂交翠菊具有较好的应用开
发价值。
关键词：翠菊；花色苷；高效液相色谱法
Determination of Anthocyanin Content in Hybrid Callistephus Chinensis by HPLC
CHEN Liang1, 3, LI Gong-bin 2, XIN Xiu-lan 3, YUAN Qi-peng1, *
（1．College of Life Science and Technology, Beijing University of Chemical Technology, Beijing 100029, China; 2.Zibo
Vocational College, Zibo 255314, Shandong, China; 3. Beijing Vocational College of Electronic Science, Beijing 100029,
China）
Abstract：To determine the content of anthocyanins in three hybrid callistephus chinensis with different colors.
The sample was extracted with methanol of 1 % HCl, the content of anthocyanins in three hybrid callistephus
chinensis has been detected by HPLC using cyanidin-3-O-glucoside (cy-3-O-glu)as standard. The analysis was
carried on Zorbax SB-C18 column (250 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase was methanol-5 % formic acid-
water at the flow rate of 1 mL/min, the detection wavelength was 520 nm. Results and conclusion were that the
anthocyanins contents in three callistephus chinensis with pink, purple and blue-violet colors were 168.15mg/100 g,
614.89 mg/100 g and 193.89 mg/100 g, respectively. It was valuable to exploit the hybrid callistephus chinensis
with purple color.
Key words：hybrid callistephus chinensis; anthocyanin; HPLC
基金项目：北京市属高等学校人才强教深化计划资助项目；山东省高
等学校优秀青年教师国内访问学者项目；科研基地-生物技术在制
药和农产品加工中的应用平台建设（PXM2010_014306_109857）
作者简介：陈亮（1986—），男（汉），博士研究生，研究方向：天然产物
分离。
*通信作者
翠菊 [Callistephus chinensis（Linn．）Nees]属于菊科
（Compositae）翠菊属（Callistephus）的单型种，一年生草
本植物、浅根性、茎直立、多分枝、叶互生、头状花序、舌
状花。生长于山坡抛荒地、山坡草丛、水边或疏林荫处。
主产于我国吉林、辽宁、河北、山西、山东、云南及四川
等省。翠菊是重要的露地绿化用花卉，同时也是重要
的盆栽观赏花卉[1]。
翠菊色彩丰富艳丽，有紫红、桃红、蓝紫等色,尤其
是 2000年刘振廷先生发现翠菊雄性不育株，并在世界
上首先培育出翠菊的杂交品种，翠菊的颜色愈发的多
样化，且易于人工控制，为翠菊市场的开拓与发展提
供了有效的途径。同时，花色的不同，其所含的天然水
溶性色素花色苷成分的种类和含量亦有很大的不同，
目前天然食用色素因其良好的安全性、天然着色效果
以及抗氧化、抗衰老、抗突变等优良生理活性[2-3]，颇受
人们青睐，而人工合成色素日益暴露出诸多弊病，因此，
研究开发翠菊花色苷具有很重要的发展应用前景。
目前，测定花色苷的含量主要有 pH示差法、直接
测定法和 HPLC法，pH示差法是传统的、经典的、无需
检测分析
食品研究与开发
Food Research And Development
2012年 8月
第 33卷第 8期
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对照品的测定方法。而直接测定法和 HPLC法需要对
照品，且对照品不易获得、较为昂贵，一度限制了方法
的广泛应用，但是 HPLC法可以获得更多的样品信息，
除了可以测定总的花色苷含量，还可根据色谱峰的个
数推断花色苷种类的数量以及相对含量，能够更为直
观、快速、简便的了解样品，同时也为翠菊品种的质量
控制（如：采收期、品种、储藏、加工等）提供了有效的借
鉴[4-6]。
对 3种不同颜色杂交翠菊花色苷的提取及测定进
行了研究，为其开发利用提供科学参考。
1 仪器与材料
1.1 主要仪器
Agilent-1100高效液相色谱仪（DAD）：美国安捷
伦公司；冷冻高速离心机：Sigma 3K15；HZQ-Q振荡
器：哈尔滨东联电子技术开发有限公司。
1.2 主要材料
新鲜盛花期杂交翠菊（Callistephus chinensis 表观
颜色：Ⅰ粉红色；Ⅱ紫红色；Ⅲ蓝紫色）：湖北富程生物
技术有限公司提供；花色苷对照品（矢车菊-3-O-葡萄
糖苷，纯度>98 %）：成都曼思特生物科技有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件的选择
色谱柱：ZorbaxSB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流
动相：溶剂 A为甲醇；溶剂 B为 5 %甲酸水溶液；梯度
洗脱条件：0～10 min，5 %～24 %甲醇（A）；10 min～15 min，
24 %；15 min～30 min，24 %～35 %；30 min～35 min，35 %；
35 min～50 min，35 %～50 %；流速：1.0 mL/min；检测波
长 520 nm；扫描波长：260 nm～600 nm；柱温 30℃。
2.2 标准品溶液的制备及线性关系考察
精确称取矢车菊-3-O-葡萄糖苷对照品 10 mg
溶于 10 mL 1 %盐酸甲醇溶液，进样 0.2、0.4、0.8、1.6、
3.2、6.4 μL，各重复进样 3次，计算 3次平均峰面积。将
峰面积 Y与进样量 X进行直线回归分析，对照品在
0～6.4 μg范围内有良好的线性关系，回归方程为：Y=
1 561.1X-7.3，相关系数 R2=0.999 8，见图 1。
2.3 样品的制备
称取 3种不同颜色样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，捣碎，分别溶于
1 %（体积比）HCl甲醇溶液中，振荡器低速低温振荡提
取 2 h，静置过夜，7 000 r/min高速离心 10 min，残渣再
另加提取溶剂，振荡浸提离心洗涤至无色，合并 3次上
清液，分别定容至 25 mL，备用。
2.4 精密度试验
吸取一定量矢车菊-3-O-葡萄糖苷溶液，连续进
样 5次，测定峰面积。测得 RSD为 1.27 %，表明进样精
密度良好。
2.5 稳定性试验
吸取一定量矢车菊-3-O-葡萄糖苷溶液，隔 4 h
进样测 5次，测定峰面积。测得 RSD为 1.46 %，表明方
法的稳定性良好。
2.6 样品花色苷含量的测定
取 1mL提取液，过 0.45 μm滤膜后吸取一定量续
滤液进样，测定峰面积，按照色谱条件进行测定并根
据外标法计算出花色苷的总含量，见表 1。
由测定峰面积及公式计算出 3种不同颜色翠菊的
花色苷含量，此外，通过 3次重复试验，表明试验的重
现性良好。
2.7 回收率试验
取 3种不同颜色样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各 3份，精密吸取
矢车菊-3-O-葡萄糖苷对照品溶液 1 mL，按照 2.3的
步骤制样，测定峰面积。结果表明：对照品的平均回收
率分别为 98.37%、96.85%、99.01%，RSD分别为 2.33%、
2.26 %、2.51 %，由此建立了 HPLC测定翠菊花色苷含
量的方法，此方法快速、简便、可靠。
3 结论
3.1 HPLC测定方法的探讨
运用 HPLC法测定总花色苷的含量应注意几点问
题：1.选择合适的色谱条件，色谱条件应最大限度的使
各个色谱峰实现基线的分离，色谱峰的重叠将导致总
花色苷的含量降低；2.选择合适的色谱柱，一般的色谱
柱测定的 pH范围在 2～8，SB-C18色谱柱的 pH范围
在 1～9，可以有效地避免 5 %的甲酸水溶液对色谱柱
表 1 3种不同颜色翠菊花色苷含量
Table 1 The anthocyanin content of three hybrid callistephus
chinensis with different colors
序号 表观颜色 含量/（mg/100 g） RSD/%（n＝3）
Ⅰ 粉红色 168.15 2.20
Ⅱ 紫红色 614.89 2.18
Ⅲ 蓝紫色 193.89 1.83
30
20
10
0
mAU
0 10 20 30 40
时间/min
图 1 对照品的 HPLC色谱图
Fig.1 HPLC of the standard (cyn-3-O-glu)
检测分析陈亮，等：HPLC法测定3种杂交翠菊花色苷的含量
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的损害；3. 保证对照品和供试品的测定条件相同，如
pH、温度，在不同的 pH下，花色苷的最大吸收波长和
峰面积会发生变化；4. 花色苷提取液经过树脂纯化将
会导致花色苷含量不同程度的降低；5. 根据不同的标
准品计算的总花色苷结果会有差异。
3.2 杂交翠菊花色苷的研究开发意义
杂交翠菊生态适应性和传统翠菊无异，栽培要求
条件不高，我国北方大部分地区均可种植，其亩产量
可达 2 000 kg，本文通过对 HPLC测定发现紫红色杂
交翠菊花色苷含量较高，为 614.89 mg/100 g鲜重，对
开发高产、高效、高附加值的天然色素具有重要的意
义，因此，研究杂交翠菊天然色素具有广阔的前景和
重要的意义。
参考文献：
[1] 傅壮.中国农业百科全书:观赏园艺卷[M].北京:中国农业出版社,
1996:347
[2] Bridle P,Timberlake C F.Anthocyanins as natural food colours -
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[5] Luigi Mondello, Antonella Cotroneo, Giacinto Errante,et al. Deter－
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(7):2589-2599
收稿日期：2011-12-14
检测分析
微波消解皂化HPLC法测定熏制食品中的
PAHs
黄东萍，陆叶，黄明立，蒋贵发
（广西医科大学公共卫生学院，广西南宁 530021）
摘 要：利用微波消解皂化熏肉、熏鱼和熏肠 3种熏制食品，并经萃取、净化、浓缩后用 SUPELCOSIL LC-PAH色谱柱
进行分离，采用梯度洗脱方法，用紫外检测器检测，从而建立微波消解皂化前处理法高效液相色谱检测熏制食品中多
环芳烃（PAHs）的方法。结果表明，微波消解在 0.5 MPa压力下加热 5 min可以取得较好的皂化效果，梯度洗脱能有效
分离 16种 PAHs，各组分校正曲线线性关系良好，相关系数在 0.993 7～0.999 5之间，加标回收率为 52.36％～118.39％，
精密度变异系数为 2.29％～10.13％。
关键词：微波消解皂化；高效液相色谱（HPLC）；多环芳烃；熏制食品
Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Smoked Foods by Microwave Digestion Saponification
and HPLC
HUANG Dong-ping, LU Ye, HUANG Ming-li, JIANG Gui-fa
(Public Health School of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi, China)
Abstract：Three kinds of sample such as smoked meat, fish and sausage , were saponified by microwave
digestion. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in them were extracted, purified, condensed and separated
基金项目：广西青年科学基金（桂科青 0832048）
作者简介：黄东萍（1971—），女（汉），副教授，硕士研究生，研究方向：色谱分析。
食品研究与开发
Food Research And Development
2012年 8月
第 33卷第 8期
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