全 文 ：核 农 学 报　 ２０１４，２８（１２）：２２００ ～ ２２０７
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期：２０１４⁃０２⁃２５　 接受日期：２０１４⁃０７⁃２２
基金项目：国家质检总局公益性行业专项子项目（２０１２１０４００２ － ４）
作者简介：蔡欣，女，主要从事食品安全与检测的研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｃａｉｘｉｎｄｒａｇｏｎ＠ １６３． ｃｏｍ
通讯作者：刘睿，男，副教授，主要从事天然产物化学与功能食品的研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｉｕｒｕｉ＠ ｍａｉｌ． ｈｚａｕ． ｅｄｕ． ｃｎ
文章编号：１０００⁃８５５１（２０１４）１２⁃２２００⁃０８
纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分离鉴定
蔡　 欣１ 　 李宝丽１ 　 玉佳男１ 　 刘　 睿１ 　 周胜银２ 　 王　 红２ 　 李　 涛２
（ １ 华中农业大学食品科技学院教育部环境食品学重点实验室，湖北 武汉　 ４３００７０；
２湖北省产品质量监督检验研究院，湖北 武汉　 ４３００６１）
摘　 要：为了建立纯橙汁中类黄酮的快速、灵敏的反相高效液相色谱 －电喷雾电离质谱法（ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃
ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２）分离鉴定方法。 本试验通过对反相高效液相色谱法（ＲＰ⁃ＨＰＬＣ）分离条件进行优化，建立
了纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ分离方法。 结果显示：６ 种类黄酮对照品可以在 ４０ ｍｉｎ 内全部检
出，其检出限达到 ０􀆰 ０２ ～ ０􀆰 １７μｇ·ｍＬ － １；方法的精密度和稳定性检验显示 ６ 种类黄酮对照品保留时间和
峰面积的相对标准偏差（ＲＳＤ）均≤４􀆰 ２３％ ，加标回收率为 ８９􀆰 ９０％ ～ １０５􀆰 ９０％ ，且 ＲＳＤ 均小于 ５％ 。 在
此基础上，采用 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 法对纯橙汁样品进行分析，并与对照品进行比较，结果显示：纯
橙汁样品中除含有柚皮素 － ７ － β －芸香糖苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、橘皮素外，可能还
含有槲皮素 － ３，７ －三葡糖甙、新橙皮苷、芹菜素 － ６，８ －二 － Ｃ －吡喃葡萄糖苷、香叶木素 － ６，８ －二 －
Ｃ －葡萄糖苷、二 － Ｃ －葡萄糖基黄酮、香叶木素 － ６ － Ｃ － β －葡萄糖苷、柚皮素、橙皮素等 ８ 种类黄酮
成分。 运用此方法可以建立橙汁类黄酮指纹图谱，并为橙汁鉴伪提供借鉴。
关键词：橙汁；高效液相色谱；高效液相色谱 －质谱；类黄酮；橙皮苷
ＤＯＩ：１０􀆰 １１８６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００⁃８５５１􀆰 ２０１４􀆰 １２． ２２００
　 　 橙汁是国际果汁市场上消费量最大的果汁，不仅
因为它具有宜人的色泽以及浓郁的风味，更因为其含
有丰富的营养成分［１］，如维生素 Ｃ、类胡萝卜素、叶酸
和类黄酮等。 橙汁中的类黄酮不仅能赋予果汁重要的
营养和功效，更因为可以作为橙汁质量监管依据受到
研究者的广泛关注。 高效液相色谱法是橙汁中类黄酮
成分分离和鉴定的重要技术手段［２ － ５］，研究表明橙皮
苷、柚皮苷一类的类黄酮是不同柑橘属果汁中特有或
含量异常的类黄酮成分［６］。 柑橘汁与橙汁相比，川皮
苷和橘皮素含量较高，而七甲氧基黄酮、黄岑素苷、甜
橙黄酮的含量较低［７ － ８］。 当橙汁产品中柚皮素芸香糖
苷 ／橙皮苷的比率增大、ＰＭＦｓ含量基本不变，则表示橙
汁掺假有柑橘汁［９］。 鉴于目前市场上已经出现了在
橙汁中掺杂其他低价果汁等掺杂使假的现象，因此许
多研究者开始关注并研究橙及其制品中类黄酮种类和
特异性及其分离鉴定方法，探讨通过建立橙及其制品
中类黄酮指纹图谱及特征黄酮进行橙汁质量监管、甚
至将之应用于打击橙汁掺杂使假现象的可行性［１０ － １２］。
刘世尧［１３］构建了原产地奉节脐橙果实黄酮类特征性
成分的 ＨＰＬＣ指纹图谱，并利用 ５ 种常见市售甜橙品
种对奉节脐橙果实进行真伪鉴定验证，为果实品质评
价与真伪鉴定提供了科学依据。
本研究旨在建立纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃
ＤＡＤ的分析方法，并结合 ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 对橙汁类黄酮进行
鉴定，为后期建立橙汁中类黄酮成分的 ＨＰＬＣ 指纹图
谱与鉴伪研究提供研究方法。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 研究材料
纯橙汁样品：汇源 １００％橙汁（生产日期：２０１３ 年
９ 月 ８ 日；产地：北京）。
００２２
　 １２ 期 纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分离鉴定
对照品与试剂：柚皮素 － ７ － β － 芸香糖苷
［ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ ７ － β － ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ，≥９８％ （ＨＰＬＣ）］、橙皮
苷［ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ，≥９８％ （ＨＰＬＣ）］、香蜂草苷［ ｄｉｄｙｍｉｎ，
≥９８％ （ＨＰＬＣ）］购自上海纯优生物科技有限公司，甜
橙黄酮［ ｓｉｎｅｎｓｅｔｉｎ，９８％ （ＨＰＬＣ）］、川皮苷［ ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ，
９８％ （ＨＰＬＣ）］、橘皮素［ ｔａｎｇｅｒｅｔｉｎ，９８％ （ＨＰＬＣ）］购自
芜湖甙尔塔医药科技有限公司。 色谱级甲醇，美国
Ｆｉｓｈｅｒ公司产品。
仪器：ＧＬ － ８８Ｂ 旋涡混合器，海门市其林贝尔仪
器制造有限公司产品； ＡｖａｎｔｉＪ⁃Ｅ 超速冷冻离心机
（ＢＥＣＫＭＡＮ公司，美国）；ＫＱ － １００ＤＥ 型数控超声清
洗器，昆山市超声仪器有限公司产品，Ｗａｔｅｒｓ ｅ２６９５ 高
效液相仪（配有可变波长紫外检测器和 Ｅｍｐｏｗｅｒ 色谱
工作站） （Ｗａｔｅｒｓ 中国有限公司产品）；Ａｇｉｌｅｎｔ １１００
ＬＣ ／ ＭＳＤ Ｔｒａｐ液质联用仪（安捷伦科技有限公司，美
国）；Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８柱 （２５０ × ４􀆰 ６ｍｍ，５μｍ），
Ｗａｔｅｒｓ中国有限公司产品。
１􀆰 ２　 研究方法
１􀆰 ２􀆰 １　 纯橙汁中类黄酮成分的提取溶剂筛选 　 以
７０％乙醇、无水乙醇、７０％甲醇、甲醇（色谱级）为提取
溶剂，比较其对橙汁中类黄酮的提取效果。 取 ４ 份纯
橙汁 ５􀆰 ０ ｍＬ置于 ５０ ｍＬ离心管中，分别加入 １０ ｍＬ 不
同提取溶剂涡旋 ３ｍｉｎ 后，以 ５ ０００ ｒ·ｍｉｎ － １离心 １５
ｍｉｎ，收集上清液，重复 １ 次后将上清液定容至 ２５ｍＬ，
取 １ｍＬ溶液过 ０􀆰 ４５μｍ微孔滤膜过滤得到不同提取剂
提取的样品，待测。
图 １　 不同溶剂对橙汁中类黄酮提取效果的比较
Ｆｉｇ． １　 Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ｏｎ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ
１􀆰 ２􀆰 ２　 纯橙汁类黄酮 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 分析方法的建
立 　 以 Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８柱 （２５０ ｍｍ × ４􀆰 ６ｍｍ，
５μｍ）为分析柱，进样量 ２０μＬ，０􀆰 ２％乙酸水溶液（Ａ）
和甲醇（Ｂ）作为流动相，流速为 １􀆰 ０ ｍＬ·ｍｉｎ － １，梯度
洗脱条件为：０ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；１０ ｍｉｎ，２５％ Ｂ；２０ ｍｉｎ，
４０％ Ｂ；３０ ｍｉｎ，５０％ Ｂ；３５ ｍｉｎ，１００％ Ｂ；４０ ｍｉｎ，
１００％ Ｂ；４５ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；５０ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；固定柱温
３０℃，二极管阵列检测器 ２８７ｎｍ，３３０ｎｍ 处同时检测
类黄酮成分。
１􀆰 ２􀆰 ３　 纯橙汁类黄酮 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 分析方法的考
察　 ６ 种类黄酮对照品为：柚皮素 － ７ － β －芸香糖苷、
橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、橘皮素，将以上
６ 种对照品分别配制成一系列浓度，浓度范围为 ０􀆰 ０６
～ ０􀆰 ３０ｍｇ·ｍＬ － １。 将上述对照品溶液各吸取 ２００μＬ配
成混和对照品溶液，用 ０􀆰 ４５μｍ微孔滤膜滤过，作为储
备液，于 ４℃条件下保存。
在建立的最佳色谱条件下，绘制类黄酮样品的标
准曲线，进行精密度、稳定性以及加标回收率实验，对
该液相方法进行考察。
１􀆰 ２􀆰 ４　 纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分
离、鉴定方法　 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 分析：采用 １􀆰 ２􀆰 ２ 建立
的方法。
ＥＳＩ⁃ＭＳ及 ＭＳ２ 条件：电喷雾离子化电离源，正离
子模式检测，离子源喷射电压为 ３􀆰 ５ｋＶ；毛细管加热温
度 ３５０℃，喷雾电压 ４０ｐｓｉ；雾化气（Ｎ２）流速为 ８０ｋＰａ；
干燥气（Ｎ２）流速为 １０ Ｌ·ｍｉｎ － １；碰撞气体为氦气；全
离子扫描方式，扫描范围 ｍ ／ ｚ １００ ～ １ ０００。
橙汁中类黄酮鉴定：分别对类黄酮对照品以及橙
汁中类黄酮提取物经过 ＨＰＬＣ分离的每一个色谱峰进
行一级质谱和二级质谱分析，将橙汁样品中色谱峰的
保留时间、紫外图谱、分子离子、碎片离子峰质荷比与
对照品相比较，结合并参考相关的文献，对橙汁类黄酮
提取物中的物质进行鉴定。
１０２２
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
２　 结果与分析
２􀆰 １　 纯橙汁中类黄酮提取溶剂的筛选
橙汁中类黄酮物质的提取剂多采用醇类有机溶
剂［１４ － １６］，本研究分别采用 ７０％乙醇、无水乙醇、７０％
甲醇、甲醇进行提取，离心分离得到纯橙汁中类黄酮提
取物，比较 ４ 种提取溶剂的提取效果（图 １）：
由图 １ 可知，纯橙汁的甲醇提取物中无论是类黄
酮成分总量，还是主要的类黄酮成分橙皮苷、柚皮素 －
７ － β －芸香糖苷的含量，以及其余 ４ 种类黄酮含量，
皆比用 ７０％乙醇、无水乙醇以及 ７０％甲醇作提取溶剂
时的提取含量高，因此最终选择了甲醇作为纯橙汁中
类黄酮成分的提取溶剂。
注： Ａ：ａ：０􀆰 ０２％ 乙酸水溶液； ｂ： 乙腈。 Ｂｕ：０􀆰 ２％乙酸水溶液；ｂ：甲醇。
Ｎｏｔｅ： Ａ： ａ：０􀆰 ２％Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｗｅｎｔ； ｂ： Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ． Ｂ： ａ． ｂ： Ｍｅｔｈａｎｏｌ．
图 ２　 不同流动相对样品分离效果的影响
Ｆｉｇ． ２　 Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｉｍｐａｃｔｅｄ ｏｎ ｓａｍｐｌｅ
２􀆰 ２　 纯橙汁类黄酮 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ分析方法的建立
２􀆰 ２􀆰 １　 流动相及柱温对分离效果的影响　 付陈梅［１４］
在以 ＨＰＬＣ对橙汁中的类黄酮分离鉴定时采用乙腈和
０􀆰 ２％乙酸水溶液作为流动相，研究发现乙腈和 ０􀆰 ２％
乙酸水溶液作为流动相时，纯橙汁样品中类黄酮在
１５ｍｉｎ之内几乎全部洗脱，但 ７ｍｉｎ 之内多数峰明显叠
加，无法完全分离。 故尝试将乙腈改用甲醇作为流动
相，发现橙汁样品中的类黄酮在 ３９ｍｉｎ 之内被完全洗
脱，并且色谱峰分离均匀，峰形较好。 这是由于乙腈与
甲醇的洗脱能力相比较强，相同梯度条件下，出峰时间
太快使峰与峰之间不能完全分离，并且乙腈和甲醇分
子的化学性质（甲醇是质子性，乙腈是非质子性）不
同，因此在分离的选择性上不同，结合纯橙汁样品图
谱，最终选择甲醇作为有机相。 在流动相中加入酸性
抑制剂可使酚羟基的解离被抑制，使其在固定相表面
有双重保留机制，在反相色谱条件下，成为中性疏水缔
合物，从而改善分离效果和峰形。 结合色谱柱的耐酸
范围，因此最终选用了甲醇 － ０􀆰 ２％乙酸水溶液作为流
动相，结果见图 ２。
同时考察了柱温对分离条件的影响，比较了在
２５℃、３０℃和 ３５℃这 ３ 个温度条件下类黄酮混合对照
品和纯橙汁样品中类黄酮色谱峰的分离情况，结果显
示，３０℃的条件下色谱分离效果最好。 因此，最终确定
的 ＨＰＬＣ 色谱条件为：以 Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８柱（２５０
ｍｍ × ４􀆰 ６ｍｍ，５μｍ）为分析柱，进样量 ２０μＬ，０􀆰 ２％乙
酸水溶液和甲醇作为流动相，流速为 １􀆰 ０ ｍＬ·ｍｉｎ － １，
梯度洗脱条件为：０ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；１０ ｍｉｎ，２５％ Ｂ；２０
ｍｉｎ，４０％ Ｂ；３０ ｍｉｎ，５０％ Ｂ；３５ ｍｉｎ，１００％ Ｂ；４０ ｍｉｎ，
２０２２
　 １２ 期 纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分离鉴定
１００％ Ｂ；４５ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；５０ ｍｉｎ，１５％ Ｂ；固定柱温
３０℃，二极管阵列检测器 ２８７、３３０ｎｍ 处同时检测黄酮
成分。 ２􀆰 ２􀆰 ２　 类黄酮标准曲线的绘制　 在建立的最
佳色谱条件下，取类黄酮混合对照品，分别稀释至 ０、
２、４、８、１６、３２ 倍，进行色谱分离，以各组分的峰面积
（ｙ）对浓度（ｘ）绘制标准曲线，计算线性范围，得到回
归方程、相关系数，以信噪比（Ｓ ／ Ｎ）为 ３ 确定各类黄酮
化合物的检出限（表 １）。 结果表明 ６ 种类黄酮对照品
均能得到很好地分离，在各自的线形范围内相关系数
满足试验要求，相关系数最低的是川皮苷，也达到
０􀆰 ９９５３，检出限范围 ０􀆰 ０２ ～ ０􀆰 １７μｇ·ｍＬ － １，此方法与付
陈梅［１４］建立的液相方法相比较，得到的检出限更低，
说明本方法更为灵敏。
表 １　 ６ 种类黄酮物质的线性范围、回归方程、相关系数、检出限
Ｔａｂｌｅ １　 Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ，ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎｓ， ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ６ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
化合物
Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
线性范围
Ｌｉｎｅｒ ｒａｎｇｅ ／
（μｇ·ｍＬ － １）
回归方程
Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ
相关系数
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ
检出限
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ／
（ × １０ － ４ｍｇ·ｍＬ － １）
柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷 １􀆰 ５６２５ ～ ５０􀆰 ００００ ｙ ＝ ３３７５５６１１􀆰 ４２８６ ｘ ＋ ４１５９􀆰 ６６６７ ０􀆰 ９９９０ １􀆰 ５０００
橙皮苷 １􀆰 ５６２５ ～ ５０􀆰 ００００ ｙ ＝ ２７７２１５６９􀆰 ５２３８ ｘ ＋ ３１８２６􀆰 ３３３３ ０􀆰 ９９８９ １􀆰 ７１４３
香蜂草苷 ０􀆰 ７８１３ ～ ２５􀆰 ００００ ｙ ＝ ４０３７７３２４􀆰 ３４９７ ｘ ＋ ４１２１􀆰 ０９４５ ０􀆰 ９９９１ ０􀆰 ７５００
甜橙黄酮 ０􀆰 ５２１０ ～ １６􀆰 ６６７０ ｙ ＝ ３４０４７１７０􀆰 ８８４９ ｘ － ９６３􀆰 ７４６２ ０􀆰 ９９８１ ０􀆰 ６６６７
川皮苷 ０􀆰 ５２１０ ～ １６􀆰 ６６７０ ｙ ＝ ３０６８９７７２􀆰 ６１１３ ｘ － ２０８􀆰 ８２９４ ０􀆰 ９９５３ ０􀆰 ２０００
橘皮素 ０􀆰 ３１２５ ～ １０􀆰 ００００ ｙ ＝ ５３９６７２６７􀆰 ６６１７ ｘ ＋ ３０５􀆰 ７３６３ ０􀆰 ９９８３ ０􀆰 ３０００
　 　 注：ｘ －浓度，μｇ·ｍＬ － １；ｙ －色谱峰面积。
Ｎｏｔｅ： ｘ⁃Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， μｇ·ｍＬ － １； ｙ⁃Ｐｅａｋ ａｒｅａ．
表 ２　 ６ 种类黄酮物质的回收率
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ６ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
化合物
Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
样品中的含量
Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ／ μｇ
加入量
Ａｄｄｉｔｉｏｎ ／ μｇ
测得量
Ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｍｏｕｎｔ ／
μｇ
回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ／ ％
相对标准偏差
ＲＳＤ ／ ％
柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷 ０􀆰 ２４４２７ ０􀆰 １６７００ ０􀆰 ３８２７４ ９３􀆰 １０ ０􀆰 ７１
橙皮苷 １􀆰 ００５６３ ０􀆰 １６７００ １􀆰 ０９０６８ ９３􀆰 ００ ０􀆰 ５０
香蜂草苷 ０􀆰 ０４０２７ ０􀆰 ０８３５０ ０􀆰 １１７２９ ９４􀆰 ８０ ４􀆰 ９５
甜橙黄酮 ０􀆰 ００８１８ ０􀆰 ０５５６７ ０􀆰 ０５７４０ ８９􀆰 ９０ ０􀆰 ７４
川皮苷 ０􀆰 ０２５９５ ０􀆰 ０５５６７ ０􀆰 ０８６５０ １０５􀆰 ９０ ２􀆰 ０５
橘皮素 ０􀆰 ００２９０ ０􀆰 ０３３４０ ０􀆰 ０３４８０ ９５􀆰 ８０ ３􀆰 ８７
２􀆰 ２􀆰 ３　 精密度试验 　 用确定后的液相色谱条件对 ６
种类黄酮混合对照品溶液平行连续测定 ６ 次，测定其
保留时间与峰面积，进行统计分析，计算相对标准偏
差，以考察精密度。 结果显示，柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷、
橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、橘皮素的保留时
间相对标准偏差依次为 ０􀆰 ３１％ 、 ０􀆰 ３１％ 、 ０􀆰 １８％ 、
０􀆰 ０７％ 、０􀆰 ０５％ 、０􀆰 ０４％ ，峰面积相对标准偏差依次为
２􀆰 ９０％ 、２􀆰 ７０％ 、２􀆰 ６０％ 、３􀆰 ５０％ 、２􀆰 ３０％ 、２􀆰 ８０％ 。 ６ 种
类黄酮对照品的保留时间和峰面积积分的 ＲＳＤ 值均
小于 ５％ ，结果无明显变化，表明样品精密度良好。
２􀆰 ２􀆰 ４　 稳定性试验　 将 ６ 种类黄酮混合对照品溶液
分别放置 ０、４、８、１２、１８、２４ｈ后进样考察。 在 ２４ｈ 内测
定 ６ 种类黄酮物质的峰面积积分值有无明显变化。 结
果显示，柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜
橙黄酮、川皮苷、橘皮素的保留时间相对标准偏差依次
为 １􀆰 １２％ 、１􀆰 １０％ 、０􀆰 ５８％ 、０􀆰 １９％ 、０􀆰 １４％ 、０􀆰 １０％ ，峰
面积相对标准偏差依次为 ３􀆰 ９５％ 、４􀆰 ２３％ 、２􀆰 ６７％ 、
２􀆰 ７１％ 、２􀆰 ０１％ 、２􀆰 ８０％ 。 ６ 种类黄酮物质的保留时间
和峰面积积分的 ＲＳＤ值均小于 ５％ ，结果无明显变化，
表明样品稳定性良好。
２􀆰 ２􀆰 ５　 加标回收率试验　 取同一橙汁样品 ２ 份，其中
一份作为本底，另一份添加一定量的类黄酮混合对照
品溶液后测定各成分含量，每份样品进行 ３ 次重复测
定，计算回收率和相对标准偏差（表 ２）。 ６ 种类黄酮
的回收率为 ８９􀆰 ９０％ ～ １０５􀆰 ９０％ ，回收率高，且相对标
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准偏差均小于 ５％ ，满足纯橙汁样品中类黄酮化合物
分析的要求。
２􀆰 ３　 纯橙汁样品中类黄酮的测定
用本研究所建立的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 条件对 ６ 种类
黄酮物质的混合对照品以及橙汁样品进行分析，见图
３，无论是类黄酮对照品还是纯橙汁样品中的类黄酮都
能在所建立的分析条件下得到较好的分离。
表 ３　 橙汁类黄酮提取物中色谱峰的紫外光谱和碎片离子鉴定参数
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｔｈｅ ＭＳ（ｎ） ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ
编号
Ｎｏ．
保留时间
Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ ／ ｍｉｎ
ＵＶ⁃光谱带
λ ／ ｎｍ
质荷比［Ｍ ＋ Ｈ］ ＋
（ｍ ／ ｚ）
二级碎片离子
ＭＳ２（ｍ ／ ｚ）
物质
Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
鉴定方法
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｓ
１ １７􀆰 ７ ２８５􀆰 ２，３３２􀆰 ９ ７７３􀆰 １ ６２６􀆰 ９，６１１，４６４􀆰 ９ 槲皮素⁃３，７⁃三葡糖甙
Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ３，７⁃ｔｒｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ
ｂ
２ １８􀆰 ５ ２７３􀆰 ４，３３４􀆰 １ ６１１􀆰 ０ ５９３，５７５， ５２７， ４７３ 新橙皮苷
Ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ
ｂ
３ ２０􀆰 ６ ２３９􀆰 ２，２７０􀆰 ４，３３５􀆰 ８ ５９５􀆰 １ ５７７􀆰 １，５５９，５１１，４７５，４５７􀆰 １，４２７􀆰 １ 芹菜素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃吡喃葡萄糖苷
６，８⁃ｄｉ⁃Ｃ⁃ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ ｓｙｌａｐｉｇｅｎｉｎ
ｂ
４ ２１􀆰 ６ ２５５􀆰 ３，２６９􀆰 ５，３４８􀆰 ６ ６２５􀆰 １ ６０７􀆰 １，５８９􀆰 １，５５９􀆰 ３，５２８􀆰 ８，５０４􀆰 ９，４８７ 香叶木素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃葡萄糖苷
６，８⁃ｄｉ⁃Ｃ⁃β⁃ｇｌｕｃｏｓｙｌ ｄｉｏｓｍｉｎ
ｂ
５ ２５􀆰 ９ ２８２􀆰 ９，３２４􀆰 ６ ５６５􀆰 １ ４３３，４１５，３６７􀆰 １，３１３􀆰 １ 二⁃Ｃ⁃葡萄糖基黄酮
Ｄｉ⁃Ｃ⁃ｇｌｕｃｏｓｙｌｆｌａｖｏｎｅ
ｂ
６ ２６􀆰 ８ ２５１􀆰 ５，２６５􀆰 ４，３４５􀆰 ５ ４６３􀆰 ０ ４４５􀆰 １，４２７，３９７，３４３􀆰 １ 香叶木素⁃６⁃Ｃ⁃β⁃葡萄糖苷
６⁃Ｃ⁃β⁃ｇｌｕｃｏｓｙｌ ｄｉｏｓｍｉｎ
ｂ
７ ２７􀆰 ２ ２８５􀆰 ２，３１９􀆰 ８ ２７３􀆰 １ ２３０􀆰 ９，１７０􀆰 ９，１５２􀆰 ９ 柚皮素
Ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ
ｂ
８ ２７􀆰 ４ ２８２􀆰 ９，３３０􀆰 ５ ５８１􀆰 １ ５４５，５２６􀆰 ９，４３５，４１９，４０１， ３１５，２７３ 柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷
Ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ⁃７⁃β⁃ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ
ａ
９ ２８􀆰 ７ ２８４􀆰 ０ ６１１􀆰 ０ ５９３􀆰 １，５７５，４８８􀆰 ９，４４７，３６８􀆰 ９，３４５，３０３ 橙皮苷
Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ
ａ
１０ ２９􀆰 １ ２８０􀆰 ４，３３０􀆰 ５ ３０３􀆰 １ ２８５􀆰 １，１７７，１５１ 橙皮素
Ｈｅｓｐｅｒｉｔｉｎ
ｂ
１１ ３５􀆰 ６ ２８４􀆰 ０，３２９􀆰 ３ ５９５􀆰 １ ４４８􀆰 ９，４３３􀆰 １，２８７􀆰 １ 香蜂草苷
Ｄｉｄｙｍｉｎ
ａ
１２ ３８􀆰 ３ ２３９􀆰 ０，３３０􀆰 ５ ３７３􀆰 １ ３５８􀆰 １，３２９􀆰 １，３１２􀆰 １ 甜橙黄酮
Ｓｉｎｅｎｓｅｔｉｎ
ａ
１３ ３８􀆰 ７ ２６６􀆰 ３，３２８􀆰 １ ４０３􀆰 １ ３８８􀆰 １，３７３􀆰 １，３４２􀆰 １ 川皮苷
Ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ
ａ
１４ ３９􀆰 ５ ２７２􀆰 ２，３２３􀆰 ４ ３７３􀆰 １ ３５８􀆰 １，３４３􀆰 １，３１２􀆰 １ 橘皮素
Ｔａｎｇｅｒｅｔｉｎ
ａ
　 　 注：ａ －通过与对照品比较；ｂ －通过参考文献。
Ｎｏｔｅ：ａ⁃Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ； ｂ⁃Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ．
２􀆰 ４　 纯橙汁中类黄酮的分析与鉴定
根据橙汁中类黄酮提取物的色谱保留时间、紫外
图谱、分子离子、碎片离子质荷比与对照品相比较，并
结合参考相关文献［１７ － ２４］，对橙汁中类黄酮提取物中的
物质进行分析和鉴定（表 ３）。
　 　 由图 ３ 可见，混合对照品溶液和橙汁中类黄酮提
取物样品中的成分基本达到基线分离，通过与对照品
色谱峰的保留时间、紫外图谱和质谱信息进行比较，发
现纯橙汁样品中含有全部 ６ 种对照品，即柚皮素⁃７⁃β⁃
芸香糖苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、橘皮
素。 由表 ３ 可知，橙汁样品中除了含有上述 ６ 种类黄
酮外，通过色谱峰对应 ＵＶ⁃光谱信息、一级质谱和二级
质谱信息与文献进行比对［１７ － ２４］，橙汁中可能还含有槲
皮素⁃３，７⁃三葡糖甙、新橙皮苷、芹菜素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃吡喃
葡萄糖苷、香叶木素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃葡萄糖苷、二⁃Ｃ⁃葡萄糖
４０２２
　 １２ 期 纯橙汁中类黄酮的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分离鉴定
注：１．柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷；２．橙皮苷；３．香蜂草苷；４．甜橙黄酮；５．川皮苷；６．橘皮素。
Ｎｏｔｅ：１． Ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ ７⁃β⁃ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ； ２． Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ； ３． Ｄｉｄｙｍｉｎ； ４． Ｓｉｎｅｎｓｅｔｉｎ； ５． Ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ； ６． Ｔａｎｇｅｒｅｔｉｎ．
图 ３　 对照品（Ａ）与样品（Ｂ）的液相色谱图
Ｆｉｇ． ３　 ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ （Ａ） ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ （Ｂ）
５０２２
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
基黄酮、香叶木素⁃６⁃Ｃ⁃β⁃葡萄糖苷、柚皮素、橙皮素等
８ 种类黄酮物质。
３　 讨论
试验确定了以甲醇为提取溶剂并结合离心分离得
到纯橙汁中类黄酮物质的样品前处理方法，该方法简
便、快速、能同时处理大量样品、操作性强，而且对其中
主要类黄酮和特征黄酮成分的提取效率高。 同时，建
立了纯橙汁中类黄酮提取物的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 分析方
法，该方法可使分析对象达到基线分离，且 ６ 种类黄酮
混合对照品的检出限达到 ０􀆰 ０２ ～ ０􀆰 １７μｇ·ｍＬ － １；精密
度、稳定性和加标回收率中保留时间和峰面积的相对
标准偏差均小于 ５％ ，加标回收率在 ８９􀆰 ９０％ ～
１０５􀆰 ９０％之间，说明此方法较稳定、重现性好，且回收
率和灵敏度高，适用于纯橙汁样品类黄酮的分离检测。
试验通过 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 对样品进行分析，将
橙汁类黄酮提取物的色谱峰与对照品进行比对、分析
其 ＵＶ⁃光谱以及一级质谱和二级质谱信息，与相关文
献［１７ － ２４］进行比对，分析出纯橙汁样品中含有柚皮素⁃
７⁃β⁃芸香糖苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、
橘皮素以及槲皮素⁃３，７⁃三葡糖甙、新橙皮苷、芹菜素⁃
６，８⁃二⁃Ｃ⁃吡喃葡萄糖苷、香叶木素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃葡萄糖
苷、二⁃Ｃ⁃葡萄糖基黄酮、香叶木素⁃６⁃Ｃ⁃β⁃葡萄糖苷、柚
皮素、橙皮素等 １４ 种类黄酮，这与 Ｚｈａｎｇ 等［１８］ 和
Ａｎａｇｎｏｓｔｏｐｏｕｌｏｕ等［１９］的结果基本相符，但仍然有物质
的二级质谱信息不够全面，因此还需要更多其他手段
进行进一步解析，从而使试验结果更加全面可靠。 进
一步将通过查询大量文献购买橙汁中可能含有的类黄
酮标准品，通过本文中确定的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２
法对样品及标准品进行试验分析，更为全面的完善橙
汁中类黄酮成分。 同时测得结果显示橙皮苷的含量最
高，这与 Ｍｏｕｌｙ等［２５］在分离测定橙汁中多甲氧基黄酮
时的结果一致。
４　 结论
本试验以甲醇作为橙汁中类黄酮物质的提取溶
剂，建立了准确、灵敏的 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ 橙汁类黄酮分
析方法，通过 ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ 分离鉴定方法，
确定了纯橙汁样品中含有柚皮素⁃７⁃β⁃芸香糖苷、橙皮
苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川皮苷、橘皮素等 ６ 种类黄酮
成分，并结合与文献进行比对，结果表明纯橙汁样品中
可能还含有槲皮素⁃３，７⁃三葡糖甙、新橙皮苷、芹菜素⁃
６，８⁃二⁃Ｃ⁃吡喃葡萄糖苷、香叶木素⁃６，８⁃二⁃Ｃ⁃葡萄糖
苷、二⁃Ｃ⁃葡萄糖基黄酮、香叶木素⁃６⁃Ｃ⁃β⁃葡萄糖苷、柚
皮素、橙皮素等 ８ 种类黄酮。
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［１７］ 　 Ｄｕｇｏ Ｐ， Ｐｒｅｓｔｉ Ｍ， Ｏｈｍａｎ Ｍ， Ｆａｚｉｏ Ａ， Ｄｕｇｏ Ｇ， Ｍｏｎｄｅｌｌｏ Ｌ．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ ｊｕｉｃｅｓ ｂｙ ｍｉｃｒｏ⁃ＨＰＬＣ⁃ＥＳＩ ／ ＭＳ
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ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｅｄｏ ａｎｄ ｊｕｉｃｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｕｍｍｅｌｏ ｃｕｌｔｉｖａｒ
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６０２２
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
２０１４，２８（１２）：２２００ ～ ２２０７
ｐａｒａｄｉｓｉ） ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］ ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２０１１， １２９（４）： １５３０ －
１５３６
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Ｐａｐａｇｅｏｒｇｉｏｕ Ｖ Ｐ． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ｓｗｅｅｔ
ｏｒａｎｇｅ ｐｅｅｌ ｂｙ ＨＰＬＣ － ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ － ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ
ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］ ． Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ２００５， １９（２）：
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ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ － ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｏｕｒ ｏｒａｎｇｅ （ Ｃｉｔｒｕｓ ａｕｒａｎｔｉｕｍＬ． ） ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
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Ｖｉｃｅｎｔｅ Ｆ． Ａ ｇｅｎｅｒａｌ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
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［２２］ 　 Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ Ｃ， Ｄｅ Ｒｏｓｓｉ Ａ， Ｓｉｎｉｂａｌｄｉ Ｍ． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｌａｖａｎｏｎｅ － ７ －
Ｏ⁃ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ ｊｕｉｃｅｓ ｂｙ ｓｈｏｒｔ⁃ｅｎｄ ｃａｐｉｌｌａｒｙ
ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［ Ｊ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ， ２００５， １０８１
（１）： ９９ － １０４．
［２３］ 　 Ｌｉ Ｓ， Ｌｏ Ｃ Ｙ， Ｈｏ Ｃ Ｔ． Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅｓ ａｎｄ
ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｓｗｅｅｔ ｏｒａｎｇｅ （ Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ） ｐｅｅｌ ［ Ｊ］ ．
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６， ５４： ４１７６ － ４１８５．
［２４］ 　 Ｍａｊｏ Ｄ Ｄ， Ｇｉａｍｍａｎｃｏ Ｍ， Ｇｕａｒｄｉａ Ｍ Ｌ， Ｔｒｉｐｏｌｉ Ｅ， Ｇｉａｍｍａｎｃｏ Ｓ，
Ｆｉｎｏｔｔｉ Ｅ． Ｆｌａｖａｎｏｎｅｓ ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ ｆｒｕｉｔ： Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ － ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ
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［２５］ 　 Ｍｏｕｌｙ Ｐ Ｐ， Ｇａｙｄｏｕ Ｅ Ｍ， Ａｒｚｏｕｙａｎ Ｃ． Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ
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ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２
ＣＡＩ Ｘｉｎ１ 　 ＬＩ Ｂａｏ⁃ｌｉ１ 　 ＹＵ Ｊｉａ⁃ｎａｎ１ 　 ＬＩＵ Ｒｕｉ１ 　 ＺＨＯＵ Ｓｈｅｎｇ⁃ｙｉｎ２ 　 ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ２ 　 ＬＩ Ｔａｏ２
（ １ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ Ｄｉｅｔｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ　 ４３００７０；２Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ
ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ　 ４３００６１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ａｎｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ． Ｂｙ ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ＲＰ⁃ＨＰＬＣ， ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａ ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ： ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ
ｔｏｔａｌｌｙ ｉｎ ４０ ｍｉｎｕｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ ｗｅｒｅ ０􀆰 ０２ ｔｏ ０􀆰 １７ μｇ·ｍＬ － １ ． Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ
ｓｈｏｗｅｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ） ｏｆ ｒｅｔａｉｎｅｄ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｏｆ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ
ｂｅｌｏｗ ４􀆰 ２３％ ． Ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ８９􀆰 ９０％ ｔｏ １０５􀆰 ９０％ ａｎｄ ＲＳＤ ｗｅｒｅ ｂｅｌｏｗ ５％ ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｉｓ， ｔｈｅ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ ｗａｓ
ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ＲＰ⁃ＨＰＬＣ⁃ＤＡＤ⁃ＥＳＩ⁃ＭＳ２ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ， ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ
ｍａｙ ｃｏｎｔａｉｎ ａｎｏｔｈｅｒ ｅｉｇｈｔ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ３，７ － ｔｒｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ，ｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ， ６，８ － ｄｉ⁃Ｃ⁃
ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏ ｓｙｌａｐｉｇｅｎｉｎ， ６，８ － ｄｉ⁃Ｃ － β － ｇｌｕｃｏｓｙｌ ｄｉｏｓｍｉｎ， ｄｉ⁃Ｃ⁃ｇｌｕｃｏｓｙｌｆｌａｖｏｎｅ， ６ － Ｃ － β － ｇｌｕｃｏｓｙｌ ｄｉｏｓｍｉｎ，
ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ， ｈｅｓｐｅｒｉｔｉｎ ｂｅｓｉｄｅｓ ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ － ７ － β － ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ， ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ， ｄｉｄｙｍｉｎ， ｓｉｎｅｎｓｅｔｉｎ， ｎｏｂｉｌｅｔｉｎ， ｔａｎｇｅｒｅｔｉｎ．
Ｗｅ ｃａｎ ｂｕｉｌｄ ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｒａｎｇｅ
ｊｕｉｃｅ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｏｒａｎｇｅ ｊｕｉｃｅ； ＨＰＬＣ； ＨＰＬＣ⁃ＭＳ； Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； Ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ
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