全 文 ：植物保护学报 !"#$%&"()&%*)$"*+,*-"%! ./01! 2."2#$ 1E2 415/ 678$ 0/90:3/.;<=,%>-=?@ABCA=./019/29/0:
基金项目$ 新疆维吾尔自治区自然科学基金"./0..00W.1#
!通讯作者"F#*B"$("$,"$+GH"%I+%,+#! JKL&-$ #"L-%MC<&#NG-%&=,"L
收稿日期$ ./02 4/5 4:/
李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白
基因片段的克隆与序列分析
韩O剑0O罗O明0!O殷智婷0O周国辉.O张祥林:
"0=新疆农业大学农学院! 乌鲁木齐 3://1. .=华南农业大学资源与环境学院! 广州 10/E2.
:=新疆出入境检验检疫局! 乌鲁木齐 3://1.#
摘要! 为进一步揭示李属坏死环斑病毒$!.#3#*3%4.)$/4./30*,)$B/.#*!)bZ[g&新疆巴旦木分离物的
分子特征遗传变异及其与宿主之间的相互关系!采用 ZYK)TZ方法扩增并克隆了 2 个 )bZ[g新
疆巴旦木分离物运动蛋白$L"V+H$"*+-%!a)&基因片段!并进行了测序及序列同源性分析" 结果表
明!2 个新疆巴旦木)bZ[g分离物;!基因片段分别为 .1D.13.12.E/ AH#其核苷酸和氨基酸序
列与已报道的)bZ[g分离物的同源性分别为 5.95e D^095e和 519Ee D^.9De!表现出明显差
异!其中与美国分离物 TXD 同源性最高!分别达 3393e D^095e和 3.9Ee D^.9De#而与同属 /:
亚组的苹果花叶病毒$?,,"%9)*&/4B/.#*!FHag&同源性较低!仅为 109.e 1^390e和1.9:e ^
E09De#新疆)bZ[g各分离株之间;!基因核苷酸序列同源性较高" 系统发育树显示!2 个新疆巴
旦木)bZ[g分离物与#组代表毒株)g:. 的核苷酸序列同源性达 3392e D^09:e!并与#组分离
物聚集成簇!表明)bZ[g新疆巴旦木分离物属于引起严重症状的#组株系!且#组中各分离物之
间表现出一定的寄主相关性!而$组和组中各分离物之间未表现出明显的寄主相关性"
关键词! 李属坏死环斑病毒# 巴旦木# ZYK)TZ# ;!基因
@B.*+*A $*(#"T:"*&"$*$B4#+#./=!A"*"./!+121$2.-+&0(-+(2>$)&05(+1$
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"0=T"+M+"(FM$-,#*#$+! Q-%<-&%MFM$-,#*#$&U%-V+$G-*S! U$#Lh-3://1.! Q-%<-&%MUSM#$F#*"%"L"#G
Z+M-"%! TB-%& .=T"+M+"(b&*#$&Z+G"#$,+G&%I J%V-$"%L+%*! ["#*B TB-%&FM$-,#*#$&U%-V+$G-*S!
R#&%M?B"# 10/E2.! R#&%MI"%M)$"V-%,+! TB-%& :=Q-%<-&%MJ%*$S&%I JC-*8%GH+,*-"% &%I
d#&$&%*-%+)"$*&! U$#Lh-3://1.! Q-%<-&%MUSM#$F#*"%"L"#GZ+M-"%! TB-%&#
12#,%$&,$ 8% "$I+$*"$+V+&L"+,#&$,B&$&,*+$-G*-,G! M+%+*-,V&$-&*-"% "(!.#3#*3%4.)$/4./30*,)$B/.#*
")bZ[g# &%I *B+-%*+$&,*-"% A+*@++% *B+V-$#G&%I -*GB"G*! *B+L"V+L+%*H$"*+-% "a)# M+%+G"(("#$
-G"&*+G"(("#$)bZ[g@+$+&LH-(-+I ($"L&L"%I H&%*G-% Q-%<-&%MAS#G-%M*B+ZYK)TZL+*B"I!
G+h#+%,-%M&%I G+h#+%,+B"L""MS&%&SG-G=YB+G+h#+%,-%M$+G#*GGB"@+I *B&**B++%M*BG"(;!M+%+
"(("#$)bZ[gKQ-%<-&%M-G"&*+G@+$+.1D! .13! .12 &%I .E/ AH! $+GH+,*-V+S=YB+G-L-&$-*S&%&SG-G"(
*B+%#,+"*-I+G+h#+%,+G&%I I+I#,+I &L-%"&,-IG"(;!M+%+GGB"@+I $+L&$>&A+I-(+$+%,+GA+*@++%
)bZ[gKQ-%<-&%M-G"&*+G&%I *B"G+($"LG+V+$&I-(+$+%*,"#%*$-+G! GB&$-%M-I+%*-*-+G"(5.95e *"
D095e &%I 519Ee *"D.9De! $+GH+,*-V+S=YB+SGB&$+I *B+B-MB+G*-I+%*-*S@-*B )bZ[gKFL+$-,&
-G"&*+GTXD! @-*B &B"L""MS$&*+"(3393e 4D095e &%I 3.9Ee 4D.9De ("$%#,+"*-I+G+h#+%,+G
&%I &L-%"&,-IG! $+GH+,*-V+S! A#*+GG*B&% 109.e 41390e &%I 1.9:e 4E09De @-*B ?,,"%9)*&/4
B/.#*"FHag# *B&*A+"%MG*"*B+G&L+G#AM$"#H "(D"&.B/.#*=X-MB G+h#+%,+-I+%*-*-+G"(;!M+%+G@+$+
GB"@% &L"%MQ-%<-&%M-G"&*+G=)BS"M+%+*-,&%&SG-GGB"@+I *B&**B+("#$Q-%<-&%M-G"&*+GGB&$+I *B+
B-MB+G*B"L""MS"3392e 4D09:e# @-*B M$"#H # $+H$+G+%*&*-V+G*$&-% )g:.=W+G-I+G! )bZ[gK
Q-%<-&%M-G"&*+G,#G*+$+I *"M+*B+$@-*B -G"&*+G-% M$"#H#=8*@&GV+$-(-+I *B&*)bZ[gKQ-%<-&%M-G"&*+G
A+"%M+I *"M$"#H # "*B+G+$-"#GH&*B"*SH+# &%I *B+$+@+$+L"$+I-G*-%,*B"G*$+&*-"%GB-HG&L"%MM$"#H
# -G"&*+G&%&S?+I B"@+V+$! *B+$+@&G%""AV-"#GB"G*$+&*-"%GB-HGA+*@++% V&$-"#G-G"&*+G-% M$"#H
$ &%I M$"#H =
3"4 5.%(#$ !.#3#*3%4.)$/4./30*,)$B/.#*")bZ[g# &L"%I ZYK)TZ ;!M+%+
OO巴旦木!又名扁桃 ?9(0-&"#*4)99#3/*!有%圣
果&之称!味道香美!营养丰富!还具药用价值!其贸
易量以及生产量在世界 2 大干果中居首位) 巴旦木
主产于中亚细亚至地中海地区!在我国主要集中在
新疆南部喀什(和田等地) 近年来新疆林果业发展
迅速!巴旦木种植规模扩大!在苗木嫁接(扩繁和引
种过程中极易感染和传播病毒) 国外已报道危害巴
旦木的病毒主要有苹果褪绿叶斑病毒"?,,"%42").)$7
/4"%&<*,)$B/.#*!FTP[g#"Z&%&+*&=!.//3#(苹果花
叶病毒"?,,"%9)*&/4B/.#*!FHag# "P&>GBL-+*&=!
./00#(李痘病毒 "!"#9,)B/.#*!))g# ")$-A+> `
R&A"$<&%S-!0DD5#(李属坏死环斑病毒"!.#3#*3%47
.)$/4./30*,)$B/.#*!)bZ[g#"W"#-&+*&=!./0:#(李
矮缩病毒"!.#3%-@&..//3#等 00 种病毒和 0 种类病毒!国内仅见啤酒花
矮化类病毒 "N),*$#3$B/.)/-!X[gI# "赵晓丽等!
./0:#的报道) 殷智婷等"./0.#对喀什地区的巴旦
木果园进行了调查和病毒病疑似样品采集!采用双
抗体夹心酶联免疫吸附法"I"#A+&%*-A"ISG&%I@-,B
+%?SL+K-%>+I -LL#%"G"$A+%*&GG&S!6F[KJP8[F#和
反转录 )TZ"$+V+$G+*$&%G,$-H*-"% )TZ!ZYK)TZ#进
行检测!首次确定了 )bZ[g侵染危害新疆巴旦木!
造成树体衰弱(叶芽枯萎(新梢坏死等症状)
)bZ[g属于雀麦花叶病毒科等轴不稳环斑病
毒属 D"&.B/.#*!基因组由 : 条正义单链 ZbF构成)
其中 ZbF0 和 ZbF. 分别编码复制酶蛋白 )0 和
).!ZbF: 含有 . 个开放阅读框!分别编码 1m端运动
蛋白"L"V+L+%*H$"*+-%!a)#和 :m端外壳蛋白","&*
H$"*+-%!T)#!a)由正义基因组 ZbF: 直接编码
"\-"$++*&=!.//3#) a)的 T端部分与 T)相互作
用!对病毒在细胞间的运动起着关键作用"Y&>+I&+*
&=!.//2#) ;!基因决定着病毒在植物细胞间的运
动!从而决定病毒对植物的侵染性!如果干扰或者抑
制 a)的功能就可抑制病毒向整个植株扩散) 因
此!运动蛋白与病毒的寄主范围(介导寄主植物的抗
病性相关"张振臣等!.///#) FH&$-,-"+*&="./0/#
通过双分子荧光互补试验证实了 )bZ[g的 a)的
T端 :3 个氨基酸与 T)相互作用!突变分析表明这
:3 个氨基酸对)bZ[g的细胞间运动必不可少) 目
前!国内对 )bZ[g;!基因的研究较少!而对于不
同地理株系及不同寄主来源的 )bZ[g;!基因片
段的分析则十分必要) 为此!本研究对)bZ[g新疆
分离物;!基因进行克隆(测序及序列分析!以期进
一步揭示其分子特征和遗传变异!为探求病毒病害
防治策略和功能基因研究提供基础依据)
6 材料与方法
686 材料
供试病毒材料$带病毒材料采集自新疆喀什
地区部分巴旦木果园中已通过 6F[KJP8[F和 ZYK
)TZ检测确定带有李属坏死环斑病毒的巴旦木
树!以当年生的幼嫩叶片和枝条为试材!样品采集
后保存于液氮中) 同时以健康巴旦木枝叶作为
对照)
培养基$PWF培养基"#$-&KA+$*&%-&LH-,--%#$
胰蛋白胨 0/ M;P(酵母提取物 1 M;P(b&T0/ M;P!
使用前加入氨苄青霉素"&LH-,--%#!使氨苄青霉素
终浓度为 0// LM;P)
试剂及仪器$植物总 ZbF提取试剂盒 ZbFK
H&%*)#GZ+&M+%(琼脂糖凝胶 6bF回收试剂盒
Y8FbM+a-I-)#$-(-,&*-"% f-*(HRaKY克隆试剂盒(
U*42%./42/& 4)"/Y7)0/ 感受态细胞( IbY)G(H&M
6bF聚合酶!天根生化科技"北京#有限公司反
转录试剂盒W-"Y+>+[#H+$ZYf-*!北京百泰克生物
技术有限公司限制性内切酶 U4)Z#!)$"L+M&"北
京#生物技术有限公司) YFb7b20// 凝胶成像系
统!上海天能公司aSTS,+$)TZ仪!美国 W-"KZ&I
公司)
1E12 期 韩O剑等$ 李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白基因片段的克隆与序列分析
687 方法
68786 巴旦木样品总ZbF的提取
取 /90 M新鲜供试巴旦木叶片和幼嫩枝条在液
氮中研磨至粉末!采用植物总ZbF提取试剂盒提取
样品总ZbF) 抽提 ZbF产物加入 6J)TKIIX.7溶
解!45/p保存备用)
68787 ;!基因的ZYK)TZ扩增
参照W"#-&".//.#的报道设计 )bZ[g;!基
因的引物并进行 ZYK)TZ扩增!上游引物为 1mK
FRFTRYTRYRFTFRFTRYTRFFRK:m!下游引物为
1mKTYYTRRFTTFYFRFTFYTK:m!预期产物长度为
.E/ AH) 以提取的巴旦木样品总 ZbF为模板!反转
录合成 ,6bF第 0 条链) ./ "P反转录体系$ZbF
模板 . "P(0/ LL";PIbY)G0 "P(1/ "L";P7-M"
"IY#0 "P(6J)TKIIX.70/ "P!E1p下 1 L-%!冰上
放置 1 L-%!加入 1 u\-$G*K[*$&%I W#(+$2 "P(.// U;
"PaKaPg反转录酶 0 "P(2/ U;"PZbF酶抑制剂
0 "P) 反应条件$:/p 0/ L-%2.p E/ L-%D1p
1 L-%)
以上述合成的 ,6bF为模板!./ "P)TZ反应
体系$模板 09/ "P(0/ "L";P上下游引物各 09/
"P(.91 LL";PIbY)G.9/ "P(0/ u)TZW#(+$".91
LL";PaMT.#.9/ "P(.91 U;"PH&M6bF聚合酶
/91 "P(IIX.70.91 "P) 反应条件$31p预变性 1
L-%D2p变性 :/ G!1/p复性 :/ G!5.p延伸 21 G!:1
个循环5.p延伸 1 L-%) 取 1 "P)TZ产物在浓度
为 0/ M;P的琼脂糖 0 uYFJ缓冲系统中电泳!溴化
乙锭染色后!使用凝胶成像系统观察并摄影记录
结果)
68789 )TZ产物的回收与克隆
将)TZ扩增产物中的特异性条带切胶!用琼脂
糖凝胶6bF回收试剂盒回收(纯化) 回收的 )TZ
产物与载体按 HRaKY反应体系在 0Ep下过夜连接)
取连接产物转化U=4)"/Y7)0/ 感受态细胞!涂布于
含 1K溴K2K氯K:K吲哚K6K半乳糖苷"1KA$"L"K2K,B"$"K
:K-%I"S(K6KM&&,*"G-I+!QKR&#和异丙基K(K6K硫代
半乳 糖 苷 " -G"H$"HS(K6K0K*B-"M&&,*"HS$&%"G-I+!
8)YR#的PWF平板上!:5p培养 02 0^E B) 2p放置
0. B后进行蓝白斑筛选) 利用 )TZ反应和酶切鉴
定(筛选阳性克隆)
6878; 序列测定与分析
将筛选获得的含有目的片段的重组质粒进行序
列测定!测序由生工生物工程"上海#股份有限公司
完成) 对所得序列在 R+%W&%> 数据库中进行
WPF[Y相似性检索!从 bTW8数据库选取 :2 个
)bZ[g分离物与本研究克隆的 2 个 )bZ[g分离物
通过 6bF[*&$和 T#G*&Q进行多重序列比对!以
)bZ[g不同组群代表性分离物#组")g:.#($组
")gDE#(组 ")J1# "g&G>"V&+*&=!.///X&LK
L"%I!.//:#和同属苹果花叶病毒作为参照) 利用
a+M&290 软件以邻接法构建系统发育树)
7 结果与分析
786 =!基因的!MHD@!扩增结果
带毒样品经)TZ扩增均获得 0 条约 .E/ AH 的
特异性片段!与预期目标片段大小相符!而作为阴性
对照的健康植株样品和空白对照均未出现特异性条
带"图 0#!说明所用引物具有特异性!)TZ扩增体系
及反应条件适合于)bZ[g;!基因的扩增)
图 6 李属坏死环斑病毒=!基因的!MHD@!扩增结果
\-M=0 FLH-(-,&*-"% $+G#*G"()bZ[g;!M+%+ASZYK)TZ
a$ 0// AH 6bF分子量标准 0 .^$ 感病植株样品
:$ 双蒸水空白对照 2$ 健康巴旦木) a$ 0// AH 6bF
L&$>+$ 0 4.$ )bZ[gK-%(+,*+I G&LH+G :$ A&%> ,"%*$"
"IIX.7# 2$ ,"%*$"=
O
787 DX!NO=!基因的克隆及序列分析
新疆喀什地区 2 个带毒样品获得基因克隆片段
分别为 .1D(.13(.12(.E/ AH!且 2 个分离物 ;!基
因之间具有较高的同源性!核苷酸同源性在
D/9De D^29Ee之间!氨基酸同源性在 3.90e ^
3390e之间) 2 个分离物与已报道的)bZ[g;!基
因序列的核苷酸同源性在 5.95e D^095e之间!氨
基酸同源性在 519Ee D^.9De之间"表 0#) 其中与
)bZ[g美国分离物 TXD"F\/:2DD.#核苷酸及氨基
酸同源性最高!分别达 3393e D^095e和 3.9Ee ^
D.9De与美国分离物 TX:/"F\/:2DD2#同源性最
低为 5.95e 3^091e和 559De 3^392e与)bZ[g
中国分离物 Z"GTB"\!E0/:22#同源性为 359:e ^
D/9:e和 3/9.e D^095e而与 FHag"\b1D5/1.#
同源性较低!仅为 109.e 1^390e和 1.9:e ^
EE1 植O物O保O护O学O报 2. 卷
E09De) 因此确定它们为侵染新疆巴旦木 )bZ[g
分离物的;!基因!分别命名为 WK:E(WK:D(WK25 和
WK1/!将序列提交至 R+%W&%>!获得登陆号分别为
!d.252::(!d.252:2(!d.252:1 和!d.252:E)
表 6 新疆巴旦木李属坏死环斑病毒分离物=!基因核苷酸和氨基酸同源性比较
Y&A+0 X"L""MS,"LH&$-G"% "(%#,+"*-I+G+h#+%,+&%I I+I#,+I &L-%"&,-I -I+%*-*-+G"(
;!M+%+($&ML+%*G($"L)bZ[gKQ-%<-&%M-G"&*+G
分离物
8G"&*+
登录号
F,,+GG-"% b"=
分离寄主
X"G*
毒株来源
7$-M-%
同源性 "e#
[+h#+%,+B"L""MS
核苷酸
b#,+"*-I+
氨基酸
FL-%"&,-I
F:2:/FH$8*=,&(0 F!:/E30/ 杏FH$-,"* 意大利8*&S 329. 3^59E 5D90 D^095
)321/),B8*=L&S0 F!:/E301 桃)+&,B 意大利8*&S 3:91 3^E93 5D90 D^095
T3../TB$8*=&L0 F!:/E30D 樱桃TB+$S 意大利8*&S 3/93 3^E9/ 559D D^/91
[E:2/)L8*=,(0 F!:/E3.: 李树)#L 意大利8*&S 329. 3^59E 3/9. D^.9D
Y#%+?K000),BY#=#%>0 F!:/E30E 桃)+&,B 突尼斯Y#%-G-& 3E91 D^/9: 5D90 D^095
)P00)LF=#%>0 F!:/E3.. 李树)#L 阿尔巴尼亚FA&%-& 339/ D^090 3/9. D^.9D
FLT=,&$0 J\1E1..2 巴旦木FL"%I 智利TB-+ 329E 3^39/ 3/9. D^.9D
TB$T=,"$0 J\1E1..1 樱桃TB+$S 智利TB-+ 359E D^/95 5D90 D^095
b,*T=&#M0 J\1E1.:/ 油桃b+,*&$-%+ 智利TB-+ 5D9. 3^09D 539. 43D90
),BT=H"L0 J\1E1.:0 桃)+&,B 智利TB-+ 3:90 3^E92 559D D^/91
)LT=L$A0 J\1E1.:5 李树)#L 智利TB-+ 3:93 3^E93 5D90 D^095
),BW$=#%>0 J\1E1.20 桃)+&,B 巴西W$&?- 339/ D^090 3/9. D^.9D
)LUS=M"0 J\1E1.22 李树)#L 乌拉圭U$#M#&S 329D D^09E 3/9. D^.9D
),BUS=+&$0 J\1E1.21 桃)+&,B 乌拉圭U$#M#&S 359: D^/9: 5D90 D^095
8K.: 6d//:132 玫瑰Z"G+ 波兰)"&%I 359E D^/95 3/9. D^.9D
Z"G8% F!DED/D1 玫瑰Z"G+ 印度8%I-& 359E D^/95 5D90 D^095
Z"GTB \!E0/:22 玫瑰Z"G+ 中国TB-%& 359: D^/9: 3/9. D^095
),BaC=#%>0 \!12E/D. 桃)+&,B 墨西哥a+C-," 359E D^/95 3/9. D^.9D
TB$0 !d//1/:/ 樱桃TB+$S 加拿大T&%&I& 329E 3^39/ 3/9. D^.9D
),B0. !b20E55E 桃)+&,B 加拿大T&%&I& 339/ D^090 3/9. D^.9D
)gDE [53:0. 马哈利樱桃a&B&+A 德国 R+$L&%S 329D 3^59E 5D90 D^095
)J1 P:33.: 桃)+&,B 德国R+$L&%S 5D9. 3^09D 5D90 D^095
)g:. c/51E3 苹果FHH+ 西班牙 [H&-% 3392 D^09: 3/9. D^.9D
b,a0b,*[H=L#$0 F!:/E303 油桃b+,*&$-%+ 西班牙 [H&-% 3:91 3^E93 559D D^/91
TXE0 F\/:2D3D 樱桃TB+$S 美国U[F 329E 3^39/ 3.9. D^.9D
TX:D F\/:2DD/ 樱桃TB+$S 美国U[F 329. 3^59. 3092 D^095
TX:3 F\/:2DD0 樱桃TB+$S 美国U[F 3E9D 3^D9D 5D90 3^D9:
TX15 F\/:2DD: 樱桃TB+$S 美国U[F 3392 D^091 3/9. D^.9D
TX:/ F\/:2DD2 樱桃TB+$S 美国U[F 5.95 3^091 559D 3^392
TXD F\/:2DD. 樱桃TB+$S 美国U[F 3393 D^095 3.9E D^.9D
6FD J\2D10ED 酸樱桃 ["#$TB+$S 美国U[F 3392 D^09: 3/9. D^/9.
a-GG-"% F\/0:.31 巴旦木FL"%I 美国U[F 3:93 3^59. 559D 3^195
)$#%+ F\/0:.3E 李树)#L 美国U[F 3.95 3^E9/ 519E 3^390
:/K2 U15/2E 桃)+&,B 美国U[F 339/ D^090 3/9. D^.9D
FHag \b1D5/1. 苹果FHH+ 印度8%I-& 109. 1^390 1.9: E^09D
789 系统发育树构建与分析
2 个新疆巴旦木 )bZ[g分离物与#组代表毒
株)g:."c/51E3#的核苷酸序列同源性达 3392e ^
D09:e!与#组其它分离物聚在一个大分支上!且与
)bZ[g皱缩花叶型分离物"TXD(TX:3 和TX15#亲
缘关系最近!形成 0 个亚簇"图 .#而与$组代表毒
株)gDE"[53:0.#和组代表毒株 )J1"P:33.:#的
核苷酸同源性只有 329De 3^59Ee和 5D9.e ^
309De!初步确定新疆喀什地区巴旦木)bZ[g分离
物属于引起严重症状的#组株系)
#组中各分离物;!基因核苷酸序列同源性为
3E91e D^D9/e!表现出一定的差异!并表现一定的
5E12 期 韩O剑等$ 李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白基因片段的克隆与序列分析
图 7 基于李属坏死环斑病毒=!基因核苷酸序列构建的系统发育树
\-M=. )BS"M+%+*-,*$++A&G+I "% *B+%#,+"*-I+G+h#+%,+G"(;!M+%+G($"LI-(+$+%*)bZ[g-G"&*+G
)bZ[g三大组群代表性分离物")g:.()gDE()J1#以$表示!2 个 )bZ[g新疆分离物以%表示) YB$++)bZ[g-G"&*+G
$+H$+G+%*-%MHBS"M$"#HG)gDE! )g:. &%I )J1 &$+L&$>+I AS$ &("#$)bZ[gKQ-%<-&%M-G"&*+G&$+L&$>+I AS%=
O
寄主相关性!除阿尔巴尼亚李树分离物 )P00)LF=
#%>0 "F!:/E3.. #(智利樱桃分离物 TB$T=,"$0
"J\1E1..1#和突尼斯桃树分离物 Y#%+?K000),BY#=
#%>0"F!:/E30E#分别独立形成 0 个小分支!以及西
班牙苹果分离物和美国酸樱桃分离物聚为 0 个小分
支之外!2 个新疆巴旦木分离物聚为一簇!同源性为
D/9De D^29Ee1 个不同美洲国家的桃树分离物
聚为一簇!同源性达到 D59Ee D^39:e美国 : 个
樱桃分离物聚为一簇! 同源性达到 D59De ^
DD9/e中国(印度(巴拿马的 : 个玫瑰分离物聚为
一簇!同源性达到 D59:e D^39De而$组和组
中各分离物之间 ;!基因相对比较保守!核苷酸同
源性分别为 DE9De D^D90e和 D/90e D^39De!并
未表现出明显的寄主相关性)
9Y讨论
)bZ[g分离物株系繁多!来源广泛!不同来源
及寄主的 )bZ[g分离物在致病力上表现出明显差
3E1 植O物O保O护O学O报 2. 卷
异!有的株系不引起明显症状!有的株系表现花叶(
环斑等明显症状) T$"GG-% `a-%>"0DD.#根据其在
樱桃上是引起温和的斑驳还是造成粗缩花叶的症
状!将)bZ[g株系分为a和Z两种致病型而根据
)bZ[g血清反应可以分为TX:(TXD 和TX:/"a-%>
+*&=!0D35#X&LL"%I".//:#通过对分离物的 ;!
和1!基因序列比对及系统发育关系研究!将其株
系分为 : 个不同组即# ")g:.#($ ")gDE#和
")J1#组!主要表现为致病力及症状差异) 黄冲等
".//1#研究发现北京怀柔樱桃分离物属于引起温
和症状的$组!而)bZ[g北京平谷樱桃分离物属于
引起严重症状的#组!表明北京地区)bZ[g樱桃分
离物分别属于 . 个不同的组!说明其不是同源!极有
可能来自不同引种地朱良俊等".//D#从北京(昆
明(西安(海宁的樱桃和月季罹病叶片中检测到
)bZ[g!发现北京樱桃分离物属于$组!西安樱桃(
昆明月季(海宁月季分离物属于引起严重症状的#
组!并推测)bZ[g分离物可能由美洲和欧洲引种樱
桃和月季传入我国) 本研究通过对 )bZ[g新疆巴
旦木分离物 ;!基因片段核苷酸序列的同源性比
较!发现 2 个分离物相似性较高!与 )bZ[g皱缩花
叶型美国樱桃分离物 TXD 的同源性最高!达到
3393e ^D095e! 与 )bZ[g中国玫瑰分离物
"\!E0/:22#同源性为 359:e D^/9:e!均属于引起
严重症状的#组而已报道的美国巴旦木分离物
"F\/0:.31#和智利巴旦木分离物"J\1E1..2#均属
于引起温和症状的$组!与本研究获得的 2 个
)bZ[g巴旦木分离物的同源性仅为 3:93e ^
359.e和 329Ee 3^39/e) 结合此前本课题组对
)bZ[g新疆巴旦木分离物1!基因片段的同源性分
析结果"殷智婷等!./0.#!即新疆巴旦木 )bZ[g分
离物 1!基因核苷酸序列与阿根廷桃树分离物
Fc.05 的同源性最高达到 D1911e!由此推测新疆
巴旦木 )bZ[g新疆分离物可能是由美洲国家引种
樱桃或桃树传入我国的一种严重致病性株系!进而
随种苗的频繁调运传入新疆!在环境条件和寄主种
类发生改变的情况下!该病毒株系发生了一定程度
的适应性变异) 此外本研究获得的 2 个 )bZ[g新
疆巴旦木分离物均属于#组!这与该组病毒表现症
状易于发现有一定的关系!因此不能排除新疆巴旦
木存在其它组群分离物的可能性) 在今后的研究中
有必要进一步扩大样品的检测数量!进行跟踪调查!
为其检疫及防治奠定基础)
)bZ[g在世界各地均有分布!寄主范围广泛!
能够侵染 .0 科 25 属 03D 种植物) XL&L"%I".//:#
发现不同地理来源(不同寄主中的 )bZ[g株系 1!
基因非常保守!其核苷酸序列不表现明显的地域相
关性和寄主相关性) 因此推测 )bZ[g不同株系与
寄主的相关性是由1!基因以外的基因决定的) 已
有研究结果表明病毒在植物细胞间的移动需要病毒
基因编码的a)参与!其可与寄主胞间连丝相互作
用!并引起胞间连丝通透能力的改变!从而协助病毒
完成细胞间运动"F*&A+>"V`Y&-&%G>S!0DD/P#,&G
`R-A+$*G"%!0DD2#) FH&$-,-"+*&="./00#通过双
分子荧光互补试验也证实 )bZ[g的 a)对 )bZ[g
的细胞间运动必不可少) 由此推断!)bZ[ga)与
寄主成分间的相互识别与作用!可能影响了病毒的
寄主范围) 本研究中!#组中各分离物的 ;!基因
核苷酸序列差异比较明显!表现出相对较高的寄主
相关性!其中 2 个新疆巴旦木分离物聚为一簇!1 个
不同国家的桃树分离物聚为一簇!美国的 : 个樱桃
分离物聚为一簇!以及来自中国(印度(巴拿马的 :
个玫瑰分离物聚为一簇而$组和组中各分离物
核苷酸序列相对比较保守!并未表现出明显的寄主
相关性) 这在一定程度上说明 )bZ[g作为单链
ZbF病毒!在长期的进化过程中为了适应不同的寄
主!通过基因组序列的突变和群体的筛选!产生了寄
主适应性变异的可能性) 另外也反映出能够引起严
重症状的)bZ[g#组株系!在不同寄主的选择压力
下!其基因组序列更容易发生突变!因此可能有着更
广泛的寄主范围!是一类具有选择性优势的病毒
组群)
参 考 文 献 "Z+(+$+%,+G#
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DE12 期 韩O剑等$ 李属坏死环斑病毒新疆分离物运动蛋白基因片段的克隆与序列分析
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隆与序列分析=果树学报! .D"1#$ 52/ 452E,
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病性研究进展=农业生物技术学报! 3"2#$ 2/: 42/3,
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宁! 邓丛良=./0:=啤酒花矮化类病毒实时荧光定量ZYK)TZ
检测方法的建立与应用=植物保护学报! 2/"2#$ :/D 4:02,
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商晗武! 姜永厚! 周京花=.//D=四个李属坏死环斑病毒分
离物的检测鉴定及 T)基因序列分析=植物保护学报! :E
"1#$ 2/: 42/D,
$责任编辑%李美娟&
/51 植O物O保O护O学O报 2. 卷