全 文 ：林业科学研究 ２０１６，２９（２）：１６７ １７５
ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ
文章编号：１００１１４９８（２０１６）０２０１６６０９
苦楝 ＳＳＲＰＣＲ反应体系优化及引物筛选
王 芳１，廖柏勇１，李 培１，２，刘明骞１，李俊成１，
吴琳瑛１，林 玮１，陈晓阳１
（１．华南农业大学林学与风景园林学院／广东省森林植物种质创新与利用重点实验室／亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，
广东 广州 ５１０６４２；２．北京林业大学生物科学与技术学院，北京 １０００８３）
收稿日期：２０１５０３２０
基金项目：广东省林业科技创新项目（２０１１ＫＪＣＸ００２）
作者简介：王 芳（１９９２— ），女（汉族），在读硕士生，主要从事植物遗传学研究，电话：１５０８８０７６４５０Ｅｍａｉｌ：１５０８８０７６４５０＠１６３．ｃｏｍ．
通讯作者：陈晓阳，男，博士，教授，Ｅｍａｉｌ：ｘｙｃｈｅｎ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
摘要：［目的］借鉴以往楝属文献报道的ＳＳＲ引物，筛选高度多态性、稳定性高、重复性好的苦楝ＳＳＲ引物，为苦楝遗
传图谱构建、ＱＴＬ定位和分子标记辅助选择育种等研究领域应用奠定基础。［方法］本研究采用单因素法和正交试
验设计进行ＳＳＲＰＣＲ反应体系优化，并利用该体系以８个不同种源的苦楝基因组 ＤＮＡ为模板，从１３５对候选 ＳＳＲ
引物中进行引物筛选。［结果］苦楝ＳＳＲＰＣＲ最优反应体系为：１．０μＬ５０ｎｇ·μＬ－１模板 ＤＮＡ，１．２μＬ１００μｍｏｌ·
Ｌ－１引物，１．０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ，０．８μＬ２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｍｇ２＋，０．１５μＬ５Ｕ·μＬ－１Ｔａｑ酶，１．５μＬ１０×Ｂｕｆｅｒ，
补ｄｄＨ２Ｏ至１５μＬ；最终筛选出１５对具有高度多态性、稳定性高、重复性好的ＳＳＲ引物。［结论］本研究成功优化了
苦楝ＳＳＲＰＣＲ反应体系，并成功筛选出１５对适用于苦楝的ＳＳＲ引物。
关键词：苦楝；ＳＳＲＰＣＲ；体系优化；引物筛选
中图分类号：Ｓ７９２．３３ 文献标识码：Ａ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＳＳＲＰＣＲＲｅａｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍａｎｄＰｒｉｍｅｒＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆ
Ｍｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈ
ＷＡＮＧＦａｎｇ１，ＬＩＡＯＢｏｙｏｎｇ１，ＬＩＰｅｉ１，２，ＬＩＵＭｉｎｇｑｉａｎ１，ＬＩＪｕｎｃｈｅｎｇ１，ＷＵＬｉｎｙｉｎｇ１，ＬＩＮＷｅｉ１，ＣＨＥＮＸｉａｏｙａｎｇ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄｌａｎｄｓｃａｐｅＡｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔＰｌａｎｔＧｅｒｍｐｌａｓｍ
ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ／ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｏｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２，
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＢａｓｅｄｏｎｐｒｅｖｉｏｕｓａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｏｎＭｅｌｉａＳＳＲｐｒｉｍｅｒｔｏｓｅｌｅｃｔｈｉｇｈｌｙｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ，ｈｉｇｈｓｔａ
ｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙＭｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈｐｒｉｍｅｒｓ，ａｎｄｔｏｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇＭ．ａｚｅｄａｒａｃｈｇｅｎｅｔｉｃｍａｐ，
ＱＴＬｍａｐｐｉｎｇａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄｂｒｅｅｄｉｎｇ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＴｈｅＳＳＲ－ＰＣＲｓｙｓｔｅｍｗａｓｏｐｔｉ
ｍｉｚｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ，ａｎｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｓｏｆＭ．ａｚｅｄａｒａｃｈ
ｆｒｏｍ８ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓａｓｔｅｍｐｌａｔｅｓ，ｔｈｅＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒＭ．ａｚｅｄａｒａｃｈｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍ１３５ｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍ
ｅｒｓ．［Ｒｅｓｕｌｔ］ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌＳＳＲ－ＰＣＲｓｙｓｔｅｍｉｓａｓｆｏｌｏｗｓ：１０μＬ５０ｎｇｏμＬ－１ｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ，１２μＬ１００μｍｏｌ
·Ｌ－１ｏｆｅａｃｈｐｒｉｍｅｒ，１０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ，０８μＬ２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｍｇ２＋，０１５μＬ５Ｕ·μＬ－１Ｔａｑｐｏｌ
ｙｍｅｒａｓｅ，１５μＬ１０×Ｂｕｆｅｒ（Ｍｇ２＋ｆｒｅｅ），ａｎｄｒｅｐｌｅｎｉｓｈｉｎｇｄｄＨ２Ｏｔｏ１５μＬ．Ａｎｄ，１５ｐａｉｒｓｏｆＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓｗｉｔｈ
ｈｉｇｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｈｉｇｈｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄｇｏｏｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｗｅｒｅｆｉｎａｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ＴｈｅＳＳＲＰＣＲ
ｓｙｓｔｅｍｏｆＭ．ａｚｅｄａｒａｃｈｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙｏｐｔｉｍｉｚｅｄ，ａｎｄ１５ｐａｉｒｓｏｆＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓａｐｐｌｉｃａｂｌｅｔｏｎｅｅｍｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈ；ＳＳＲ－ＰＣＲ；ｓｙｓｔｅｍｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ；ｐｒｉｍｅｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇ
林 业 科 学 研 究 第２９卷
苦楝（ＭｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈＬｉｎｎ．）是楝科、楝属落叶
乔木，生长速度快、材质软硬适中、心材红褐色，且纹
理美观、有香气、耐腐、抗虫蛀、干缩小、干燥性好，是
理想的家具用材［１］；苦楝生长对土壤要求不严，在酸
性土、中性土与石灰岩地区均能生长，耐干旱、瘠薄，
是优良的农林间作和盐碱土植被恢复树种［２］；其根、
皮、花、果均可入药，亦能驱虫，具有安全高效、无毒
无污染、残效期短等优点，且施用浓度低、对人畜无
害，是一种理想的的广谱生物农药原料，从其各营养
器官提取物中发现多种药用成分，作用多样［３－６］；花
呈淡紫色，形成密集圆锥花序，鲜艳夺目，极具观赏
性［７－８］。苦楝分布广泛，已开展种源试验，研究了种
苗性状的地理变异［９－１４］，但利用分子标记研究苦楝
遗传多样性还不够深入。
有学者采用简单重复序列区间（ＩＳＳＲ）分析、随
机扩增多态性ＤＮＡ标记（ＲＡＰＤ）分析以及扩增片段
长度多态性（ＡＦＬＰ）分析等方法对苦楝进行遗传多
样性分析研究［１５－１７］，但国内外尚未有将简单重复序
列（ＳＳＲ）分子标记技术应用于苦楝辅助育种的研究
报道。ＳＳＲ分子标记也称微卫星分子标记，标记多
态性极其丰富，且呈共显性遗传，符合孟德尔遗传模
式，可鉴别杂合子和纯合子，ＳＳＲ序列广泛存在，覆
盖整个基因组，同时 ＤＮＡ样品用量少，引物在同种
和近缘物种间通用性好、特异性强，重复性好、可信
度高［１８－２１］，因而在动植物遗传多样性分析、遗传图
谱的构建、数量遗传基因座（ＱＴＬ）定位和分子标记
辅助选择育种等研究中广泛应用。本研究旨在通过
建立稳定的 ＳＳＲＰＣＲ反应体系和条件，借鉴以往楝
属文献报道的 ＳＳＲ引物，筛选高度多态性、稳定性
高、重复性好的苦楝 ＳＳＲ引物，为苦楝遗传图谱构
建、ＱＴＬ定位和分子标记辅助选择育种等研究领域
应用奠定基础。
１ 材料和方法
１．１ 实验材料
１．１．１ ＳＳＲ引物 本研究所用１３５对微卫星候选
引物来自楝科微卫星分子标记相关文献［２２－３６］，由生
工生物工程（上海）股份有限公司合成，其详细信息
参见表１。
１．１．２ 实验试剂 １０×ＴＢＥ电泳缓冲液、１×ＴＢＥ
溶液、无水乙醇、冰乙酸、琼脂糖、丙烯酰胺、甲叉丙
烯酰胺、溴酚蓝、１０×Ｂｕｆｅｒ（Ｍｇ２＋ Ｆｒｅｅ）、ｄＮＴＰｓ、
Ｍｇ２＋、Ｔａｑ酶、ｄｄＨ２Ｏ、ＤＬ１５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、ＤＬ２０００
ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、１００ｂｐＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ等，以上试验材
料均购自ＴＡＫＡＲＡＢＩＯ公司。
表１ 引物信息及其来源
编号 名称 来源 引用文献
１ ＨＭ０４１０３３ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
２ ＨＭ０４１０３４ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
３ ＨＭ０４１０３５ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
４ ＨＭ０４１０３８ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
５ ＨＭ０４１０３９ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
６ ＨＭ０４１０４６ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
７ ＨＭ０４１０４０ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
８ ＨＭ０４１０４１ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
９ ＨＭ０４１０４２ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
１０ ＨＭ０４１０４３ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
１１ ＨＭ０４１０４４ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
１２ ＨＭ０４１０４５ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２２］
１３ －－－ Ｃａｒａｐａｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ ［２３］
１４ －－－ Ｃａｒａｐａｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ ［２３］
１５ －－－ Ｃａｒａｐａｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ ［２３］
１６ －－－ Ｃａｒａｐａｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ ［２３］
１７ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
１８ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
１９ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２０ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２１ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２２ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２３ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２４ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２５ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２６ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２７ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２８ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
２９ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３０ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３１ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３２ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３３ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３４ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２４］
３５ －－－ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２５］
３６ ＡＪ０００４０５ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２５］
３７ ＡＪ０００４０７ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２５］
３８ ＡＪ０００４１０ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２５］
３９ ＡＪ０００３８９ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［２５］
４０ ＡＦ４２８１１５ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４１ ＨＱ２００１８０ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４２ ＨＱ２００１８１ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４３ ＨＱ２００１８２ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４４ ＨＱ２００１８３ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４５ ＨＱ２００１８４ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４６ ＨＱ２００１８５ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４７ ＨＱ２００１８６ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４８ ＨＱ２００１８７ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
４９ ＨＱ２００１８８ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
５０ ＨＱ２００１８９ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
５１ ＨＱ２００１９０ Ｋｈａｙａｓｅｎｅｇａｌｅｎｓｉｓ ［２６］
８６１
第２期 王 芳，等：苦楝ＳＳＲＰＣＲ反应体系优化及引物筛选
续表１
编号 名称 来源 引用文献
５２ ＧＱ２５４８２０ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５３ ＧＱ２５４８２７ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５４ ＧＱ２５４８３３ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５５ ＧＱ２５４８３４ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５６ ＧＱ２５４８３８ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５７ ＧＱ２５４８４１ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５８ ＧＱ２５４８４５ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
５９ ＧＱ２５４８４７ Ｃａｂｒａｌｅａｃａｎｊｅｒａｎａ ［２７］
６０ ＡＪ０００４０４ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［２８］
６１ －－－ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［２８］
６２ ＡＪ０００４０６ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［２８］
６３ ＡＪ０００４０８ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［２８］
６４ ＡＪ０００４０９ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［２８］
６５ ＤＱ７７８３０３ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２９］
６６ ＤＱ４５３９０３ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２９］
６７ ＤＱ４５３９０４ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２９］
６８ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２９］
６９ －－－ Ｔｏｏｎａｃｉｌｉａｔａｖａｒ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ ［２９］
７０ ＦＭ１６１９０７ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７１ ＦＭ１６１９０８ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７２ ＦＭ１６１９０９ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７３ ＦＭ１６１９１１ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７４ ＦＭ１６１９１２ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７５ ＦＭ１６１９１３ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７６ ＦＭ１６１９１４ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
７７ ＥＦ４１３９６２ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
７８ ＥＦ４１３９６３ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
７９ ＥＦ４１３９６４ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８０ ＥＦ４１３９６５ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８１ ＥＦ４１３９６６ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８２ ＥＦ４１３９６７ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８３ ＥＦ４１３９６８ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８４ ＥＦ４１３９６９ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８５ ＥＦ４１３９７０ Ｃｅｄｒｅｌａｏｄｏｒａｔａ ［３１］
８６ ＪＦ４２３３０５ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
８７ ＪＦ４２３３０６ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
８８ ＪＦ４２３３０７ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
８９ ＪＦ４２３３０８ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９０ ＪＦ４２３３０９ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９１ ＪＦ４２３３１０ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９２ ＪＦ４２３３１１ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９３ ＪＦ４２３３１２ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９４ ＪＦ４２３３１３ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９５ ＪＦ４２３３１４ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９６ ＪＦ４２３３１５ Ａｆｒｉｃａｎｍａｈｏｇａｎｙ ［３２］
９７ ＡＪ０００４０２ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［３３］
９８ ＡＪ０００４１１ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［３３］
９９ ＡＪ０００４０３ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｈｕｍｉｌｉｓ ［３３］
１００ ＦＭ１６１９１０ Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ ［３０］
１０１ ＡＦ４２８１１６ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０２ ＡＦ４２８１１７ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０３ ＡＦ４２８１１８ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０４ ＡＦ４２８１１９ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０５ ＡＦ４２８１２０ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
续表１
编号 名称 来源 引用文献
１０６ ＡＦ４２８１２１ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０７ ＡＦ４２８１２２ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０８ ＡＦ４２８１２３ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１０９ ＡＦ４２８１２４ Ｓｗｉｅｔｅｎｉａｍａｃｒｏｐｈｙｌａ ［３４］
１１０ ＡＢ６７４４７２ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１１ ＡＢ６７４４７３ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１２ ＡＢ６７４４７４ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１３ ＡＢ６７４４７５ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１４ ＡＢ６７４４７６ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１５ ＡＢ６７４４７７ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１６ ＡＢ６７４４７８ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１７ ＡＢ６７４４７９ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１８ ＡＢ６７４４８０ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１１９ ＡＢ６７４４８１ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２０ ＡＢ６７４４８２ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２１ ＡＢ６７４４８３ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２２ ＡＢ６７４４８４ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２３ ＡＢ６７４４８５ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２４ ＡＢ６７４４８６ Ｍｅｌｉａｖｏｌｋｅｎｓｉ ［３５］
１２５ ＢＶ７２５３９８ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１２６ ＢＶ７２５３９７ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１２７ ＢＶ７２５３９９ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１２８ ＢＶ７２５４００ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１２９ ＢＶ７２５４０１ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３０ ＢＶ７２５３９２ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３１ ＢＶ７２５３９３ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３２ ＢＶ７２５３９４ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３３ ＢＶ７２５３９５ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３４ ＢＶ７２５３９６ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
１３５ ＢＶ７２５４０２ Ｇｕａｒｅａｇｕｉｄｏｎｉａ ［３６］
－－－：无名称
１．２ 实验方法
１．２．１ ＤＮＡ的提取及检测 本研究从海南、云南、
甘肃、广东、广西、福建、四川和贵州８个不同苦楝种
源中分别选取一株无病害的植株，采集足够的新鲜
叶片，提取其苦楝基因组ＤＮＡ作为引物筛选的ＤＮＡ
材料。提取的 ＤＮＡ经质量检测后，用 ＴＥ溶液将浓
度稀释到 ５０ｎｇ·μＬ－１，分装成 １００μＬ·管 －１，－
２０℃保存备用。
ＤＮＡ提 取 采 用 ＯＭＥＧＡ ＢＩＯＴＥＫ 公 司 的
Ｄ２４８５０４型植物基因组提取试剂盒；以 ＤＬ１５０００
ＤＮＡＭａｒｋｅｒ作对照，通过１％琼脂糖凝胶电泳和紫
外凝胶成像系统检测基因组ＤＮＡ的提取质量，电泳
电压１００Ｖ，电流２００ｍＡ，时间４５ｍｉｎ；然后用Ｎａｎｏ
Ｄｒｏｐ１０００Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ全自动核酸蛋白快速检
测仪检测ＤＮＡ纯度和浓度。
１．２．２ ＰＣＲ扩增及反应体系优化
１．２．２．１ 单因素试验 分别对 ＳＳＲＰＣＲ扩增反应
９６１
林 业 科 学 研 究 第２９卷
体系中的模板 ＤＮＡ、引物、ｄＮＴＰｓ、Ｍｇ２＋和 Ｔａｑ酶的
使用浓度进行单因素试验，具体实验设计参见表２。
如表２所示，以海南、广东、广西和云南４个种源的
ＤＮＡ为模板，用 ９９号引物参与单因素实验，每 １５
μＬ反应体系中除加入该单因素的相应水平外，其它
４个因素的水平均以该因素的中间值进行初始实
验，１０×Ｂｕｆｅｒ缓冲液加入 １．５μＬ，剩余体积用
ｄｄＨ２Ｏ补足。
ＰＣＲ扩增反应在东胜创新生物科技有限公司
ＥＤＣ８１０ＰＣＲ仪中进行，扩增程序设计如下：（１）９４℃
预变性４ｍｉｎ；（２）９４℃变性３０ｓ，６２℃退火３０ｓ，７２℃
延伸１ｍｉｎ，３５个循环；（３）７２℃延伸 １０ｍｉｎ。以
ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ作对照，采用２％琼脂糖凝胶电
泳和紫外凝胶成像系统检测ＰＣＲ扩增产物。
表２ ＳＳＲＰＣＲ体系单因素法试验设计
水平
因素
模板ＤＮＡ／（ｎｇ·μＬ－１） 引物／（μｍｏｌ·Ｌ－１） ｄＮＴＰｓ／（ｍｍｏｌ·Ｌ－１） Ｍｇ２＋／（ｍｍｏｌ·Ｌ－１） Ｔａｑ酶／（Ｕ·μＬ－１）
１ ０．３３ ２．００ ０．１３ ０．６７ ０．０１７
２ １．３３ ３．３３ ０．４０ １．００ ０．０３３
３ ２．３３ ６．００ ０．６７ １．３３ ０．０５０
４ ３．３３ ８．００ ０．９３ １．６７ ０．０６７
１．２．２．２ ＳＳＲＰＣＲ扩增体系正交实验 ＳＳＲＰＣＲ
扩增体系正交实验见表３，ＰＣＲ扩增所用其他试剂
与扩增产物检测同单因素实验一致。为提高实验准
确性，正交实验进行一次重复检验。
ＰＣＲ反应采用以下程序设计：（１）９４℃预变性４
ｍｉｎ；（２）９４℃变性３０ｓ，６２℃退火３０ｓ，７２℃延伸１
ｍｉｎ，２５个循环；（３）９４℃变性３０ｓ，退火温度设置梯
度，第１至第１２竖排由５２℃逐渐升至６２℃，退火３０
ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，２０个循环；（４）７２℃延伸１０ｍｉｎ。
通过分析比较电泳条带亮度、清晰度等确定 ＰＣＲ反
应体系中各试剂最适用量及最适退火温度。
表３ ＳＳＲＰＣＲ体系Ｌ１６（４５）正交试验设计
试验编号
因素
模板ＤＮＡ／（ｎｇ·μＬ－１） 引物／（μｍｏｌ·Ｌ－１） ｄＮＴＰｓ／（ｍｍｏｌ·Ｌ－１） Ｍｇ２＋／（ｍｍｏｌ·Ｌ－１） Ｔａｑ酶／（Ｕ·μＬ－１）
１ ０．３３ ２．００ ０．１３ ０．６７ ０．０１７
２ ０．３３ ３．３３ ０．４０ １．００ ０．０３３
３ ０．３３ ６．００ ０．６７ １．３３ ０．０５０
４ ０．３３ ８．００ ０．９３ １．６７ ０．０６７
５ １．３３ ２．００ ０．４０ １．３３ ０．０６７
６ １．３３ ３．３３ ０．１３ １．６７ ０．０５０
７ １．３３ ６．００ ０．９３ ０．６７ ０．０３３
８ １．３３ ８．００ ０．６７ １．００ ０．０１７
９ ２．３３ ２．００ ０．６７ １．６７ ０．０３３
１０ ２．３３ ３．３３ ０．９３ １．３３ ０．０１７
１１ ２．３３ ６．００ ０．１３ １．００ ０．０６７
１２ ２．３３ ８．００ ０．４０ ０．６７ ０．０５０
１３ ３．３３ ２．００ ０．９３ １．００ ０．０５０
１４ ３．３３ ３．３３ ０．６７ ０．６７ ０．０６７
１５ ３．３３ ６．００ ０．４０ １．６７ ０．０１７
１６ ３．３３ ８．００ ０．１３ １．３３ ０．０３３
１．２．３ ＳＳＲ引物的筛选
１．２．３．１ 初筛 利用优化的 ＰＣＲ反应体系和条
件，以海南、广东、广西和云南４个不同种源的苦楝
基因组 ＤＮＡ为模板，对１３５对候选引物进行初筛，
通过２％琼脂糖凝胶电泳和紫外凝胶成像系统检测
ＰＣＲ扩增产物，筛选出能有效扩增 ＳＳＲ序列的
引物。
１．２．３．２ 复筛 以海南、云南、甘肃、广东、广西、福
建、四川和贵州８个不同种源的苦楝基因组 ＤＮＡ为
模板，对初筛所得的引物进行复筛，对扩增产物进行
６％变性聚丙烯酰胺凝胶（２．４ｇ尿素、１．１４ｇ丙烯酰
胺、０．０６ｇ甲叉丙烯酰胺、２０ｍＬ１×ＴＢＥ溶液、３００
μＬ２０％过硫酸铵、４０μＬＴＥＭＥＤ）电泳，以１００ｂｐ
ＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ作对照，前１５ｍｉｎ电压８０Ｖ，电流２７５
０７１
第２期 王 芳，等：苦楝ＳＳＲＰＣＲ反应体系优化及引物筛选
ｍＡ，后１ｈ１５ｍｉｎ电压１２０Ｖ，电流２７５ｍＡ；然后用
银染法显示扩增条带，将凝胶依次浸入固定液（４７．５
ｍＬ无水乙醇、２．５ｍＬ冰乙酸、４５０ｍＬ蒸馏水）１０
ｍｉｎ、染色液（０．５ｇＡｇＮＯ３、５００ｍＬ蒸馏水）１０ｍｉｎ、
显色液（５ｇＮａＯＨ、０．１ｇ四硼酸钠、１．５ｍＬ甲醛、
５００ｍＬ蒸馏水）１０ｍｉｎ；最后分析扩增条带的多态
性。经反复筛选与比较分析，获得适用于苦楝的多
态性高、重复性好、稳定性好的引物。
２ 结果与分析
２．１ ＤＮＡ提取效果
采用试剂盒提取的８个苦楝基因组ＤＮＡ如图１
所示，琼脂糖凝胶电泳检测，条带比较清晰，没有杂
带，拖尾现象不明显。经全自动核酸蛋白快速检测
仪检测，提取的 ＤＮＡ的纯度和浓度都很高，适用于
ＰＣＲ体系。
图１ ８个种源苦楝基因组ＤＮＡ电泳检测结果
２．２ ＳＳＲＰＣＲ反应体系的优化
２．２．１ 体系单因素实验结果 通过单因素实验，
ＳＳＲＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测（图２～图６），
分析可知：当模板 ＤＮＡ浓度为２．３３ｎｇ·μＬ－１（图
２），引物浓度为８．００μｍｏｌ· Ｌ－１（图３），ｄＮＴＰｓ浓
度为０．６７ｍｍｏｌ· Ｌ－１（图４），Ｔａｑ酶浓度为０．０６７Ｕ
·μＬ－１（图６）时扩增效果最好；而 Ｍｇ２＋浓度达到
１００ｍｍｏｌ· Ｌ－１时（图５）扩增效果较好，且进一步
增加Ｍｇ２＋浓度并未明显改善扩增效果。
２．２．２ 正交设计实验结果 ＳＳＲＰＣＲ产物琼脂糖
凝胶电泳检测结果见图７。由图７可知，两个重复的
电泳结果基本一致。即：第３、４、８、１２、１５个处理的
条带最亮、最清晰，第２、６、１０、１６个处理的条带亮度
和清晰度均相对较低，第１、５、７、９、１１、１３、１４个处理
的条带亮度很低或根本无条带。对比发现，引物、
图２ 单因素实验结果－模板ＤＮＡ浓度电泳图
图３ 单因素实验结果－引物浓度电泳图
图４ 单因素实验结果ｄＮＴＰｓ浓度电泳图
１７１
林 业 科 学 研 究 第２９卷
图５ 单因素实验结果Ｍｇ２＋浓度电泳图
图６ 单因素实验结果Ｔａｑ酶浓度电泳图
Ｍｇ２＋和 Ｔａｑ酶浓度的变化对 ＰＣＲ扩增效果的影响
十分显著，而模板ＤＮＡ和ｄＮＴＰｓ浓度的变化对扩增
效果的影响不显著。此外，ＰＣＲ过程中退火温度设
置递增梯度，但是对扩增效果的影响不显著，退火温
度偏低时扩增效果相对较好。
综合单因素实验和正交设计实验结果，同时考
虑到试剂成本，最终确定苦楝 ＳＳＲＰＣＲ最优体系
为：１．０μＬ５０ｎｇ·μＬ－１模板ＤＮＡ，１．２μＬ１００μｍｏｌ
·Ｌ－１引物，１．０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ，０．８μＬ２５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｍｇ２＋，０．１５μＬ５Ｕ·μＬ－１Ｔａｑ酶，１．５
μＬ１０×Ｂｕｆｅｒ，补 ｄｄＨ２Ｏ至１５μＬ。ＰＣＲ反应退火
温度设置在５６℃为宜。
２．３ ＳＳＲ引物筛选
２．３．１ 初筛结果 利用优化的 ＰＣＲ反应体系和条
件，以４个不同种源的苦楝基因组 ＤＮＡ为模板，对
１３５对候选 ＳＳＲ引物进行初筛，结果如图 ８所示。
第２５、２９、１１３、１１５、１１７、１１９、１２０号引物在４个不同
种源中扩增产物的电泳条带比较清晰明亮，尤其第
２９、１１３、１１５、１１７、１１９、１２０号引物具有明显的多态
性；而第２６、２７、１１２、１１４、１１６号引物条带比较模糊
且不完整；第２８、１１０、１１１、１１８号引物几乎无明显条
带。初筛一共筛选出３６对能有效扩增 ＳＳＲ序列的
引物。
２．３．２ 复筛结果 利用优化的 ＰＣＲ反应体系和条
件，以８个不同种源的苦楝基因组 ＤＮＡ为模板，对
初筛所获得的３６对引物进行复筛，筛选目标是在８
个不同种源的苦楝中均能扩增出清晰明亮的条带且
具有高度多态性、重复性好又比较稳定的引物。通
过反复筛选和分析比较，最终筛选出１５对适用于苦
楝的较为理想的 ＳＳＲ引物（图９），其详细信息参见
表４，筛选效率为１１．１１％。
图７ 正交实验电泳图
３ 讨论与结论
本研究采用单因素法和正交试验设计对苦楝
２７１
第２期 王 芳，等：苦楝ＳＳＲＰＣＲ反应体系优化及引物筛选
图８ 部分引物初筛电泳图
图９ 部分引物复筛电泳图
ＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系进行优化，确定最优反应体系
为：１．０μＬ５０ｎｇ·μＬ－１模板ＤＮＡ，１．２μＬ１００μｍｏｌ
·Ｌ－１引物，１．０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ，０．８μＬ２５
ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｍｇ２＋，０．１５μＬ５Ｕ·μＬ－１Ｔａｑ酶，１．５
μＬ１０×Ｂｕｆｅｒ，补 ｄｄＨ２Ｏ至１５μＬ。扩增反应退火
温度确定为５６℃。利用最优体系，以８个不同种源
的苦楝基因组ＤＮＡ为模板，从１３５对ＳＳＲ引物中筛
选出１５对具有高度多态性、稳定性高、重复性好的
引物。实验结果为今后苦楝遗传多样性分析、地理
种源变异、遗传图谱构建等研究奠定一定的基础。
在ＳＳＲＰＣＲ体系优化实验中，当模板 ＤＮＡ、引
物、ｄＮＴＰｓ和 Ｔａｑ酶分别采用不同浓度时，电泳条
带亮度均大致呈梯度变化，但是不宜采用过高浓
度，否则会导致 ＰＣＲ扩增的重复性下降、非特异性
扩增产物增多；而 Ｍｇ２＋浓度是影响 ＰＣＲ扩增效果
的关键因素，稍低则扩增产物极少，适当则扩增产
率很高，过高并不能提高扩增效率，因为 Ｍｇ２＋在
ＤＮＡ延伸反应中仅仅起到 Ｔａｑ酶激活剂的作
用［３７］；ＰＣＲ反应中退火温度直接影响引物与模板
ＤＮＡ的结合效率，过高则退火反应速率低、准确度
下降，过低则易形成引物二聚体、产生过多杂带；
不同引物的退火温度因为引物自身序列的 ＣＧ含
量、物种差异等不同，允许退火温度在 ±５℃范围内
变化，否则会降低实验的效果［３７］，所以个别的引物
３７１
林 业 科 学 研 究 第２９卷
退火温度需要根据具体的实验效果进行单独的调
整。例如，２号、１２２号、１２３号引物等（表 ４）。体
系优化实验中选用的９９号引物的特异性和稳定性
很好，但是它在８个不同的 ＤＮＡ模板中扩增结果
多态性不明显，所以也不能入选。
表４ 复筛所得引物信息
编号 名称 序列（５′３′） 退火温度／℃
２ ＨＭ０４１０３４
Ｆ：ＧＡＴＡＧＣＧＧＡＧＣＣＧＧＴＧＡＴＴ
６０
Ｒ：ＧＧＡＴＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＧ
２９ －－－
Ｆ：ＡＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＣＧＡＴＡＧＧ
５６
Ｒ：ＴＧＴＧＡＴＧＴＡＧＧＡＧＴＣＴＧＡＡＣ
５４ ＧＱ２５４８３３
Ｆ：ＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣ
５６
Ｒ：ＧＡＡＡＣＣＴＧＡＴＴＣＧＴＣＧＴＣＧＴ
５９ ＧＱ２５４８４７
Ｆ：ＣＴＣＣＴＣＧＴＴＴＧＣＣＡＣＴＣＡＴＴ
５６
Ｒ：ＡＡＡＣＡＧＡＧＧＧＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣ
７４ ＦＭ１６１９１２
Ｆ：ＧＴＣＣＡＣＧＣＡＡＡＣＡＧＡＧＡＣＡＣ
６０
Ｒ：ＴＴＧＧＣＴＴＧＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣ
１１１ ＡＢ６７４４７３
Ｆ：ＣＣＣＴＡＴＴＣＡＴＴＧＴＣＣＣＴＣＣＡ
６０
Ｒ：ＧＴＣＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＣ
１１３ ＡＢ６７４４７５
Ｆ：ＣＡＡＣＣＡＴＧＧＴＧＴＣＧＡＧＡＡＧＡ
５６
Ｒ：ＴＧＣＴＴＡＡＴＴＴＧＣＣＴＧＴＧＣＡＴ
１１４ ＡＢ６７４４７６
Ｆ：ＣＴＡＧＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＧＡＡＣＡ
６０
Ｒ：ＴＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＴＣＴＧＡＡＴＣ
１１６ ＡＢ６７４４７８
Ｆ：ＧＧＡＡＣＣＣＣＡＡＴＴＴＡＧＧＡＡＣＴ
５６
Ｒ：ＴＧＣＴＴＧＧＴＧＡＡＡＡＣＣＡＴＡＧＡ
１１７ ＡＢ６７４４７９
Ｆ：ＣＣＧＴＧＴＡＡＧＡＧＴＧＣＣＡＡＡＴＣ
５６
Ｒ：ＴＣＴＴＧＧＡＧＧＴＧＡＧＡＴＣＡＡＧＴＧ
１１８ ＡＢ６７４４８０
Ｆ：ＴＣＴＧＴＴＧＧＴＧＧＴＧＴＴＧＴＣＡＣ
５８
Ｒ：ＴＡＡＴＧＴＧＧＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＴＧ
１１９ ＡＢ６７４４８１
Ｆ：ＣＡＡＧＣＡＣＡＣＡＣＡＡＧＧＡＴＴＴＧ
５６
Ｒ：ＴＧＧＣＡＡＣＴＣＴＣＡＧＧＴＡＴＣＡＡ
１２０ ＡＢ６７４４８２
Ｆ：ＧＴＴＧＴＴＴＧＴＧＧＧＴＧＴＧＴＧＴＴ
５６
Ｒ：ＧＡＧＡＧＡＧＡＡＣＣＣＡＡＡＧＧＡＡＡＡ
１２２ ＡＢ６７４４８４
Ｆ：ＧＴＧＣＡＧＴＧＴＣＣＡＴＧＴＴＧＡＡＧ
６０
Ｒ：ＧＡＣＡＴＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡ
１２３ ＡＢ６７４４８５
Ｆ：ＴＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＴＴＡＡＧＧＴＧＴ
６０
Ｒ：ＣＡＧＧＣＡＡＡＧＧＡＡＧＧＴＡＧＧＴＡ
－－－：无名称；Ｆ：上游引物序列；Ｒ：下游引物序列
相较于其它植物和作物，林木的基因组更为庞
大，且分子标记技术在林木中的研究和应用起步较
晚，因此，最终筛选得到的适用于林木的理想引物所
占候选引物的比例普遍比其他物种低。例如，马洪
峥等［３８］以能源作物尼泊尔芒（Ｍｉｓｃａｎｔｈｕｓｎｅｐａｌｅｎｓｉｓ
（Ｔｒｉｎｉｕｓ）Ｈａｃｋｅｌ）和双药芒（Ｍ．ｎｕｄｉｐｅｓ（Ｇｒｉｓｅｂａｃｈ）
Ｈａｃｋｅｌ）为试验材料，从４２对 ＳＳＲ候选引物中筛选
得到 １４对理想引物，筛选效率为 ３３．３３％；张龙
等［３７］以８种柱花草属（Ｓｔｙｌｏｓａｎｔｈｅｓ）牧草为试验材
料，从１２３对ＳＳＲ候选引物中筛选得到２６对理想引
物，筛选效率为 ２１．１４％；而李光友等［３９］以尾叶桉
（ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｕｒｏｐｈｙｌａＳ．Ｔ．Ｂｌａｋｅｌｙ）杂种子代为试
验材料，从１００对ＳＳＲ候选引物中筛选得到１７对理
想引物，筛选效率为 １７．００％，明显低于前两组数
据。由此可见，苦楝和其他林木的 ＳＳＲ引物筛选及
ＳＳＲ分子标记技术在苦楝等林木的遗传学研究中的
应用仍然需要进一步加强。本研究最终筛选出来的
１５对ＳＳＲ引物对于庞大的苦楝基因组来说数量甚
少，因此在进行后续的遗传多样性分析时，可能还需
要根据具体的样本进行深入试验。随着ＳＳＲ引物的
进一步筛选，基于ＳＳＲ分子标记技术的苦楝遗传多
样性分析效率可能还有进一步提升的空间。
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（责任编辑：张 研）
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