采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基用4种不同的底物处理方式,对白腐菌偏肿栓菌在28 ℃下进行静止培养,得到不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测在470,420,310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2‘-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶(MnP)、漆酶和木质素过氧化物酶(LiP)产生的依据。结果表明:偏肿栓菌可产生MnP(必须在Mn2+存在的条件下)和漆酶(不依赖于Mn2+),但不产生LiP; 在培养液内添加底物木屑和2,6-DMP后可显著提高2种酶的分泌量。在此基础上,用含Mn2+和青杨木屑的LNAS培养基对偏肿栓菌在30 ℃下静止培养作为初始培养条件,然后采用2次正交试验和多种单因素试验对偏肿栓菌产MnP的培养基组分和培养条件进行优化。结果表明: 在试验设定的因素和水平范围内的最优组合是培养液果糖浓度为5 g ·L-1、酒石酸铵浓度为15 mmol ·L-1、锰离子浓度是 200 μmol ·L-1、吐温-80浓度为0.25 mL ·L-1,MgSO4 ·7H2O浓度为0.35 g ·L-1、矿质元素溶液和维生素溶液加入量分别为10和1 mL ·L-1; 培养液pH值4.5; 培养温度27 ℃; 150 r ·min-1摇瓶培养条件下装液量为110 mL。酶活可达314.52 U ·L-1,比优化前提高8.4倍。
White rot fungus Trametes gibbosa was statically cultured at 28 ℃ in 4 kinds of different LNAS media. The solutions were sampled at different interval, and the optical density of the solutions, representing oxidized products of 2,6-DMP, ABTS and veratryl alcohol (VA) catalyzed by manganese peroxidase (MnP), laccase and lignin peroxidase (LiP), were measured spectrophotometrically at 470 nm at 420 nm at 310 nm, respectively. Results showed that T. gibbosa could synthesize MnP (only when Mn2+is present) and laccase (no matter Mn2+is present or absent) simultaneously, but no LiP. Substrates wood sawdust and 2, 6-DMP could significantly enhance MnP and laccase activities. Furthmore, T. gibbosa was statically cultured at 30 ℃ in LNAS medium containing Mn2+ and wood sawdust added was as initializing culture condition, and then two times orthogonal and several single-factor tests were conducted to optimize medium compositions and culture conditions of T. gibbosa for producing MnP. Results indicated that the most optimal culture condition within the fixed factors and levels was fructose 5 g ·L-1,tartaric acid ammonium 15 mmol ·L-1, Mn2+ 200 μmol ·L-1, Tween -80 0.25 mL ·L-1, MgSO4 ·7H2O 0.35 g ·L-1, mineralt solution 10 mL ·L-1, vitamin solution 1 mL ·L-1 and pH 4.5 in the improved LNAS medium; culture temperature 27 ℃; and 110 mL culture solution volume at 150 r ·min shaking condition, and the produced manganese peroxidase activity could reach to 314.52 U ·L-1, which was 8.4 times higher than that produced at initializing culture condition. MnP yield produced by T. gibbosa could be enhanced in a great deal in the optimizing culture condition.
全 文 ：第 !" 卷 第 # 期
$ % & & 年 # 月
林 业 科 学
’()*+,)- ’)./-* ’)+)(-*
/012!"!+02#
-345!$ % & &
偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化&
张玉龙6池玉杰6闫洪波
"东北林业大学林学院6哈尔滨 &?%%!%$
摘6要!6采用 .+-’"低氮天冬酰胺 @琥珀酸$培养基用 ! 种不同的底物处理方式!对白腐菌偏肿栓菌在 $# c下
进行静止培养!得到不同时间内的培养液!用紫外可见分光光度计分别检测在 !"%!!$%!7&% <8处对于 $!A @二甲
氧基苯酚"$!AULEZ$%$!$0 @连氮 @双"7 @乙基苯并噻唑 @A @磺酸$ " -^ ,’$%藜芦醇"/-$的氧化作用后光密度
值的变化情况!作为其木质素降解酶系统锰过氧化物酶"E
栓菌在 7% c下静止培养作为初始培养条件!然后采用 $ 次正交试验和多种单因素试验对偏肿栓菌产 E
? 4-.@& %酒石酸铵浓度为&? 8801-.@& %锰离子浓度是 $%% %801-.@& %吐温 @#% 浓度为 %2$? 8.-.@& !E4’i!-"e$i
浓度为 %27? 4-.@& %矿质元素溶液和维生素溶液加入量分别为 &% 和 & 8.-.@& # 培养液 Ge值 !2?# 培养温度$" c#
&?% ;-8=< @&摇瓶培养条件下装液量为 &&% 8.& 酶活可达 7&!2?$ q-.@& !比优化前提高 #2! 倍&
关键词’6偏肿栓菌# 木质素降解酶# 锰过氧化物酶# 培养条件# 正交试验
中图分类号! ’"#&666文献标识码!-666文章编号!&%%& @"!##"$%&&#%# @%%## @%"
收稿日期’ $%&% @&& @%"# 修回日期’ $%&% @&$ @$$&
基金项目’ 国家自然科学基金项目"7%A"&"%%$ ! 中国博士后科学基金"$%%B%!A%#AA$ !$%%B 东北林业大学研究生科技创新项目&
&池玉杰为通讯作者&
‘+%&4&W$%&’(’5Q"/4"(%6’(2&%&’()’5:$(I$(")"F"/’L&2$)"F/’201"2,= NKD<4C310<46(K=C3X=F6CD< e0<4J0
"A$%-6-$&9$+-2.+;! C$+.#-/2.9$+-2.+;:(*)-+2*.;6O/+@*( &?%%!%$
;,)%/$1%’6IK=SF;0SP3<43OD+/,-.-26*@@$2/ VDOOSDS=TD1MT31S3;FR DS$# c =< ! ]=
6*@@$2/ T031R OM
@& ! 8=
质素的过氧化物酶!在真菌降解木质素的非特异性细
胞外氧化还原酶中起着至关重要的作用& 由于 E
对木质素和多环芳烃等多种异生物质具有独特和极强
的降解能力!能够有效地降解废水和土壤中很难被降
解的多氯联苯%多环芳烃%LL,%染料%炸药和其他氯化
物等!因此这种酶在生物制浆和漂白%有毒废弃物的脱
除和降解领域极具吸引力& 酶的长期稳定性和大规模
可行性生产是其被有效利用的前提!进一步提高 E
义& 产酶条件的完善和优化是白腐菌"D+/,-.-2$的酶
学研究基础!不同白腐菌的产酶条件具有较大差异&
偏肿栓菌"D+/,-.-26*@@$2/$是我国东北林区常见的多
孔菌科"Z01MG0;DTFDF$白腐菌!也是一种生长速度较快%
对木材和木质素分解能力较强的白腐菌!本文报道了
对该菌种主要木质素降解酶系统的检测及对E
究与商品化生产提供依据&
&6材料与方法
@?@A讨论材料
&2&2&6菌种6试验前在 ZL-"Z0SDS0LFQS;0OF-4D;$
培养基斜面上培育的偏肿栓菌菌种冷藏于 ! c
冰箱&
&2&2$6培养基6综合培养基’ ZL-培养基& 产酶
基础培养基 &’ 低氮天冬酰胺 @琥珀酸培养基
".+-’!.0V+=S;04F< -OGD;D4=
养基为产酶基础培养基 &!改变部分培养基的组成!
主要是对 .+-’ 进行富营养型优化处理!得到产酶
基础培养基 $!用于正交试验& 组分’ je$Zi!
$2% 4! E4’i! - "e$i %2? 4! 琥 珀 酸 &2&# 4!
(D(1$-$e$i%2& 4!8=
碳源种类%碳源浓度%氮源种类%氮源浓度%E<$ p的
浓度可调& 用! 801-.@& +Die调节 Ge值为 !2?&
第 $ 次正交试验吐温 @#% 的浓度%E4’i!-"e$i的
浓度和 Ge值可调&
@?>A试验方法
&2$2&6偏肿栓菌木质素降解酶系统产酶活性的检
测6培养方式’ 用 ? 种不同的底物处理方式进行菌
种培养’ $ .+-’ 培养基不含 E<$ p!即矿物元素溶
液中不添加 E<’i!-e$i# ’ .+-’ 培养基含 E<
$ p
"$2A" %801-.@& $! 即 矿 物 元 素 溶 液 中 添 加
E<’i!-e$i# ( .+-’ 培 养 基 含 E<
$ p " $2A"
%801-.@&$!并加入 $ 4大青杨">$G3%323223+*-(2*2$
木屑为产酶底物# ) .+-’ 培养基含 E<$ p"$2A"
%801-.@&$!并加入 &% 8801-.@& $!A @二甲氧基苯
酚"$!AULEZ$%2& 8.为产酶底物& * 同培养方式
(!但只是在 7% c静止培养!检测 E
试验设 7 次重复& 前 ! 种在 $# c下静止培养& 计
算酶活值后绘制出产酶活h时间曲线图!并利用
Z-’I软件数据处理系统对前 ! 种不同的培养液产
酶的活性进行方差分析&
&2$2$6正交试验6本试验将碳源种类"-$%^碳源浓
度"4-.@&$" $^%氮源种类"($%氮源浓度"8801-.@& $
"L$和 E<$ p的浓度"%801-.@&$"*$等 ? 因素作为首
选试验因素& 选择各因素水平的原则是把参数的水
平区间拉开!尽可能使最佳区域能包含在设定的水平
区间内& 本项正交试验的因素水平为 ! 个等级& 选
用了常用的 ! 种碳源和 ! 种分子质量明确的氮源!对
于碳源和氮源的浓度!主要考察不同碳氮比产 E
计学设计出.&A"!
?$的正交表!在产酶基础培养基 $
的基础上!改变部分培养基的组成进行 &A 组不同配
方培养基的第 & 次正交试验!每组试验 7 次重复!每
次需提取 !# 份酶样测定酶活& 在 $?% 8.三角瓶中
加入 "% 8.产酶基础培养基 $!并加入 $ 4大青杨木
屑为产酶底物& 按照 &2$2& 中的培养方式!将培养液
Ge调整为 !2?!在 7% c%静止的条件下培养!并按照
&2$2& 的 E
情况& 在第 & 次正交试验的基础上!以静止培养时装
液量 "8.$"[$!吐温 @#% 的浓度"8.-.@& $":$!Ge
值!E4’i!-"e$i的浓度 "4-.
@& $")$为因素"表 $$!
设计出 .B"7
!$正交表进行第 $ 次正交试验&
表 @A偏肿栓菌产 :(F第 @ 次正交试验因素水平设计
9$,E@A9*"5$1%’/)$(2#"K"#)’55&/)%%&4"’/%*’I’($#2")&I(5’/<41-88%&( +/’201&(I :(F
水平 .FWF1
因素 [DTS0;
- ^ ( L *
& 葡萄糖 :13T0OF ? 天冬酰胺 -OGD;D4=
7 蔗6糖 ’3T;0OF &? 硝酸铵 -880<=38<=S;DSF &? &772?%
! 可溶性淀粉 ’013J1FOSD;TK $% 硫酸铵 -880<=38O31PDSF $% $%%2%%
66
B#
林 业 科 学 !" 卷6
表 >A偏肿栓菌产 :(F第 > 次正交试验因素水平设计
9$,E>A9*"5$1%’/)$(2#"K"#)’5)"1’(2%&4"’/%*’I’($#
2")&I(5’/<41-88%&( +/’201&(I :(F
水平 .FWF1
因素 [DTS0;
[ : e )
& ?% %2$? 72? %27?
$ "% %2?% !2? %2!?
7 B% %2"? ?2? %2??
66
&2$276单因素试验6根据 $ 次正交试验的结果!进
一步探索最佳产酶条件& 测试最佳组合静止培养时
在不同温度"$!!$"!7%!77!7A c$下的酶活性!得到
最佳温度值& 然后!在 ? 组"D!J!T!R!F$不同矿质元
素与维生素含量组合条件下进行静止培养试验"表
7$!测试酶活性后得到最佳的矿质元素与维生素含量
组合& 然后在 &?% ;-8=< @&下!进行不同装液量"?%!
"%!B%!&&% 8.$的摇瓶体系试验!以静止培养"?% 8.$
为对照!测试酶活以得到最佳的摇瓶装液量!探索营
养物质含量与溶氧量之间的关系和最佳组合&
表 BA矿质元素与维生素组合
9$,EB Q&K"1’4,&($%&’()’54&("/$#$(2K&%$4&()’#0%&’(
试验组 :;03G D J T R F
矿质元素 E=
&2$2!6优化培养6综合上述优化结果!确定偏肿栓
菌产 E
$6结果与分析
>?@A偏肿栓菌木质素降解酶系统产酶活性的检测
在 ! 种不同的培养液中分别对 .=Z的酶活进行
检测!但在 7&% <8处均未检测到吸光值的变化!表
明偏肿栓菌不产生 .=Z&
在 $& 天的培养过程中!偏肿栓菌在不含 E<$ p
的 .+-’ 培养基中不加底物条件下!提取的酶液未
检测到 E
&7 q-.@&&对比$!’ $ 种培养液的检测结果表明’
E<$ p是偏肿栓菌产生E
到 E
$!AULEZ为底物的条件下!提取的酶液也检测到
E
$!AULEZ为底物都可以提高 E
为底物的产量& $& 天内偏肿栓菌在 ! 种培养液中
产生 E
间%不同培养时间之间的 E
E
由此确定培养 &7 天作为正交试验中各影响因素对
酶活力影响的适宜时间& 对比(!* $ 种培养过程
中 E
的 .+-’ 培养基中不加底物条件下!提取的酶液可
以检测到漆酶的活性!在 " 天达到最大分泌量!酶
活力仅为 ?$ q-.@&# 在含 E<$ p的 .+-’ 培养基中
不加底物条件下!提取的酶液可以检测到漆酶的活
性!在 B 天时达最大分泌量!酶活力达 7#q-.@&& 对
比$’ $ 种培养液的检测结果表明’ 漆酶的产生不
受 E<$ p的制约& 在含 E<$ p的 .+-’ 培养基中加入
木屑为底物条件下!提取的酶液检测到漆酶的活性!
漆酶在第 B 和 &7 天具有 $ 个分泌高峰!但第 B 天的
分泌量要高于第 &7 天的分泌量# 在含 E<$ p的
.+-’ 培养基中加入 $!AULEZ为底物的条件下!提
取的酶液也检测到漆酶的活性!漆酶在 ?!&&!&" 天
有 7 个分泌高峰!但以第 && 天分泌量最大!酶活力
为 7#$ q-.@&& 对比(!) $ 种培养过程中漆酶的
产生结果!表明在培养过程中添加木屑和 $!AULEZ
为底物都可以显著提高漆酶的产生量!底物对偏肿
%B
6第 # 期 张玉龙等’ 偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化
栓菌漆酶的产生具有明显的诱导作用& 以木屑为底
物时漆酶的产量要高于以 $!AULEZ为底物时的产
量& $& 天内偏肿栓菌在 ! 种培养液中产生漆酶的
情况见图 $& 方差分析结果表明’培养液与培养时
间的 ’=45值小于 %2%?!表明培养液之间%不同培养
时间之间的漆酶活性差异都显著& ! 种不同的培养
图 $6! 种培养液中漆酶活性随时间的变化
[=45$6.DTTDOFDTS=W=SM0P! ]=
值最大"为 &A%27%A A$!培养液)与’均值差值也
很大"为 &?B2B&A A$# 培养液(随时间的变化!漆酶
在 B 天的均值与 7 天的均值差值最大&
>?>A正交试验结果及分析
第 & 次正交试验的 &A 组试验酶活力分别为
?A2#A! 7B2"B! $A27!! $&2?%! &772!"! !&2B!!
7?2$&!$B2"&!!%2#A!7?2"?!!?2B"!AA2!%!7$2B7!
$#2%B!7"2?%!7B2&& q-.@& !采用直观分析法!比
较各因素水平均值 S=!得到每个因素的最大平均
值!如表 ! 所示& 从而得出培养基的最优配方为
-$ &^($L7*! !即碳源为果糖!浓度为 ? 4-.
@& !氮源
为酒石酸铵!氮源浓度为 &? 8801-.@& !锰离子浓
度是 $%% %801-.@& & 通过极差分析!排列出各因
素对指标影响大小的主次顺序为 1( >1- >1L >
1*>1^ !即说明氮源种类对偏肿栓菌产 E
浓度和碳源浓度&
图 76第 & 次正交试验趋势
[=4576,;F
9$,ECA!")0#%)$($#=)&)’5%*"5&/)%%&4"’/%*’I’($#%")%
因 素 [DTS0;
- ^ ( L *
各因素水平均值
EFD< WD13F0PFDTK
PDTS0;D
S$ #%F&& !#F?$ B$F7B !BF!" ?&FAA
S7 A$FBB !#F7! !&FA" "#F$$ ??F#"
S! !?5## ?$5$! !&5#% !"5$" "A57!
极差 EDQ=8D1;D<4F 1 7!5$7 B5&B ?%5"$ 7%5B? $!5A#
66
图 7 为第 & 次正交试验的趋势图!表明了 ? 种
因素在不同水平下对产酶的贡献& 果糖最有利于产
酶!可溶性淀粉最不利于产酶& 不同的碳源对产酶
的影响比较大!但是碳源的浓度对产酶的影响不大&
不同氮源对产酶的影响最大!氮源为硝酸铵和硫酸
铵时情况不佳!此外氮源浓度对产酶也有一定影响!
所以氮源是影响 E
&B
林 业 科 学 !" 卷6
第 $ 次正交试验的 B 组试验酶活力分别为
$%&2#A! &#&2!?! &$$2?#! &?!2%7! &7$2$A! B"2&#!
&%72%"!&&"2$#!&!$2A" q-.@&& 采用直观分析法!
比较各因素水平均值 S=!求出每个因素的最大平均
值!如表 ? 所示& 可以得出最优方案为[&:&e$)&!即
静止培养时装液量为 ?% 8.!吐温 @#% 浓度为
%2$? 8.-.@&!Ge为 !2?!E4’i!-"e$i浓度为 %27?
4-.@&& 通过极差分析!排列出各因素对指标影响大
小的主次顺序为 1[>1e >1: >1)!即装液量和 Ge
值对 产 酶 影 响 最 大! 其 次 是 吐 温U#% 浓 度 和
E4’i!-"e$i浓度&
表 DA第 > 次正交试验结果分析
9$,EDA!")0#%)$($#=)&)’5%*")"1’(2%&4"’/%*’I’($#%")%
因 素 [DTS0;
[ : e )
各因素水平均值
EFD< WD13F0PFDTK
PDTS0;D
S$ &$"F#$ &!7FAA &?BF7# &$"F$7
S7 &$&5%& &$%5#& &&B57% &7&57%
极差 EDQ=8D1;D<4F 1 !"5A$ 7$5&# !%5%# 7&5"
图 ! 为第 $ 次正交试验趋势图!表明了 ! 种因
素在不同水平下对产酶的贡献& 装液量既反映营养
物质!也反映相对溶氧量!可见偏肿栓菌对溶氧量的
要求很大& 高浓度的吐温 @#% 不利于产酶!Ge过
大过小均不利!E4$ p浓度不宜太高&
图 !6第 $ 次正交试验趋势
[=45!6,;F
[=45?6E
应用最佳组合 -$ &^($L7*! [&:&e$)& 在 ? 种温
度下静止培养时!第 &7 天测定酶活!结果如图 ? 所
示& $" c时产酶量最高!E
几乎不产酶!可知偏肿栓菌对于温度的要求很高!高
温强烈抑制产酶& 不同温度下酶的产量以及达到产
酶高峰时间也不相同!$" c下产酶高峰出现在第 &"
天!为 $7B2?$ q-.@&!时间有滞后!这可能与静止培
养溶氧量达不到要求有关!亦可能与矿质元素和维
生素的含量不适宜有关"高尚等! $%%"$&
>?CA矿质元素与维生素含量对产酶的影响
应用最佳组合 -$ &^($L7*! [&:&e$)& 在 $" c
下!按照表 7 中的 ? 组矿质元素与维生素含量组合
条件下进行静止培养!第 &7 天的产酶结果是 J 组矿
质元素溶液加入 &% 8.-.@&%维生素溶液加入量为
& 8.-.@&时产酶最高!为 $&!2A" q-.@&!各试验组
酶活性差别较小!矿质元素与维生素加入量对产酶
效率影响并不大& 图 A 为各组试验产酶曲线图!不
同试验组产酶高峰时间各不相同!但都集中在 &" b
$% 天左右!时间也滞后!这可能也与静止培养溶氧
量达不到要求有关&
>?DA不同摇瓶装液量对产酶的影响
在 &?% ;-8=< @&的摇床转速下!不同装液量第 &7
天的产酶结果是装液量越高酶活性越高"&&% 8.酶
$B
6第 # 期 张玉龙等’ 偏肿栓菌产锰过氧化物酶条件优化
图 A6不同矿质元素与维生素含量
组合下的产酶结果
[=45A6E
富!又有足够的溶氧量& 装液量少产酶少的原因!除
了营养物质不足外!还可能由于转速高液体少!培养
液扰动剧烈!剪切力过大!干扰了菌丝的正常生长!
从而影响了酶的分泌所致& ?% 8.静止培养酶活性
为 $$A27 q-.@&!与 "% 8.摇瓶培养相接近!静止培
养酶活较低可能是溶氧量达不到要求所致& ? 组试
验的产酶曲线见图 "!装液量 &&% 8.的摇瓶培养在
&? 天产酶达到最高为 7" q-.@&!由于溶氧量充
足!比静止培养提早 ! 天达到产酶高峰& 因此!在
&?% ;-8=< @&转速下!在研究范围内 &&% 8.装液量
为最佳摇瓶培养条件&
图 "6不同摇瓶装液量的产酶结果
[=45"6E
至此得出偏肿栓菌产 E
&? 8801-.@&%锰离子浓度是 $%% %801-.@&% 吐
温 @#%浓度为 %2$? 8.-.@&!E4’i!-"e$i浓度为
%27? 4-.@&%矿质元素溶液加入量为 &% 8.-.@&%维
生素溶液加入量为 & 8.-.@&# 培养液 Ge值 !2?#
培养温度$" c# &?% ;-8=< @&摇瓶培养条件下装液
量为 &&% 8.& 在此条件下通过摇床做 7 组优化培
养的结果如图 # 所示!在 &? 天左右产酶最高达到
7&!2?$ q-.@&!比优化前初始培养条件提高 #2! 倍&
图 #6摇床优化培养产酶结果
[=45#6E
&$ 以往的研究表明’不同的碳源对白腐菌 E
认为最佳碳源为果糖!或作为迟效碳源的木质纤维
素和木聚糖比速效碳源葡萄糖等更加有利于产酶
"官敏! $%%A$& 碳源也存在适宜的浓度范围!一般
浓度过高会抑制 E
$$不同菌种对氮源的敏感程度不一致!多数文
献报道多数白腐菌在限氮的条件下产酶时间长!产
酶量较高"EDQ=80-./%5! $%%7$!但限氮并非 E
">#/(-+$"#/-.-"#+;2$2$G$+*3,$和变色栓菌 "云芝 $
"D+/,-.-2)-+2*-$%$+$一致"浦跃武等! &BB## 张连慧
等! $%%?$!但偏肿栓菌产 E
$%%#$!也表明限氮并非是产 E
产 E
腐菌降解木质素的过程中!E<$ p可以作为 E
E<$ p具有依赖性!即 E<$ p是 E
当 E<$ p浓度到达一定程度后!浓度再增加!产酶能
7B
林 业 科 学 !" 卷6
力基本不再提高 "+3O]F-./%5! $%%$# ’TKFF1-./%5!
$%%%$& 但有些白腐菌产生的是不依赖于 E<$ p的
E
究菌株!E<$ p浓度仅影响菌体自身的生长!对于
E
E
E
产 E
?$ 白腐菌培养环境的 Ge值与其生长有着密
切的联系!Ge值影响细胞膜所带电荷!改变培养基
中化合物的离子化程度!从而影响细胞对营养物质
的吸收与代谢产物的分泌& 黄孢原毛平革菌产
E
A$ 由白腐菌产 E
些醇残基增加了细胞膜的渗透性 " ’SFPF< -./%5!
$%%$$!并解除已合成的锰过氧化物酶在细胞内对
酶基因转录或 8Y+-翻译的阻碍!但是吐温 @#% 并
非越高越有利& 本研究结果表明’偏肿栓菌在测试
的吐温 @#% 浓度范围内!随着吐温 @#% 浓度逐渐升
高酶活性呈降低趋势!今后试验还需测试不添加和
较低浓度的吐温 @#% 对偏肿栓菌产 E
度的少量上下调整对偏肿栓菌产 E
连慧等"$%%?$的研究一致&
#$ 在液体摇瓶培养过程中!溶氧量既与装液量
的多少有关也与摇瓶转速有关!装液量多!营养物质
丰富!但相对溶氧量下降& 本试验目的是探索营养
物质含量与溶氧量之间的关系和最佳组合& 在
&?% ;-8=< @&同样的摇床转速下!产酶结果是装液量
越高酶活性越高!推测原因是营养物质相对丰富!又
有足够的溶氧量& 装液量 &&% 8.的摇瓶培养在 &?
天达到产酶最高为 7" q-.@&!由于溶氧量充足!
比静止培养提早 ! 天达到产酶高峰& 今后试验还需
继续测试在 &?% ;-8=< @&转速下再增加装液量是否
还能提高酶活!以及试验一下在 &&% 8.装液量时改
变摇床转速能否进一步提高 E
E
崔艳红! 张海棠!孟庆辉!等5$%%#2白腐真菌产木质素降解酶的条
件及酶学性质的研究5吉林农业科学!77"$$ ’ !7 @!"5
高6尚!张6晶!黄民生5$%%"2黄孢原毛平革菌摇瓶体系产锰过氧
化物酶优化研究5上海化工!7$"B$ ’ &" @&B5
官6敏5$%%A2好食脉抱菌"CF2*.$G#*%/$产锰过氧化物酶培养条件
的优化%酶的纯化以及酶学性质的分析5暨南大学硕士学位
论文5
浦跃武!甄浩铭!冯书庭!等5&BB#2白腐菌产锰过氧化物酶条件的研
究5菌物系统!&""7$ ’ $?& @$??5
吴会广!蔡宇杰!苑博华!等5$%%#2锰过氧化物酶产生菌的发酵优化
及酶学性质研究5食品与机械!$!"!$ ’ &" @$&5
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