全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2577 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com

收稿日期：2011–08–01
基金项目：国家大宗蔬菜产业技术体系建设项目（nycytx-35-gwzj）；农业部公益性行业（农业）科研专项（200903025）；云南省应用基
础项目（2008CD136，2009CD055）
* 通信作者（E-mail：zou_xuexiao@163.com）
辣椒雄性不育“三系”线粒体 DNA 的 ISSR 检测
赵 凯 1，邓明华 1,2，文锦芬 3，邹学校 2,*，朱海山 1，张竹青 2
（1云南农业大学园林园艺学院，昆明 650201；2湖南省农业科学院蔬菜研究所，长沙 410125；3昆明理工大学现代
农业工程学院，昆明 650224）
以湖南省蔬菜研究所选育的辣椒胞质雄性不育系 9704A、保持系 9704B 和恢复系 9701 为试验
材料，比较“三系”mtDNA的 ISSR多态性，为揭示胞质雄性不育性与 mtDNA之间的关系积累资料。
利用蔗糖衬垫法提取辣椒黄化苗的线粒体 DNA。PCR反应总体积为 25 μL，由 10 × PCR buffer
2.5 μL，Taq酶（1 U · μL-1）1 μL，dNTP（10 μmol · L-1）0.5 μL，引物（8 pmol ·μL-1）2 μL，模板
DNA（25 ng · μL-1）2 μL，灭菌去离子水 18.5 μL组成。扩增程序：95 ℃预变性 2 min，然后 94 ℃
变性 45 s，55 ℃退火 1 min，72 ℃延伸 2 min，40个循环，最后 72 ℃延伸 10 min，4 ℃终止反应。
扩增产物经 1.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外分析仪下观察照相。
比较分析两个材料线粒体 DNA扩增带间的差异百分率 D：D = dxy/（Nx + Ny），其中 dxy为 X材
料和 Y材料间 DNA差异条带数，Nx、Ny分别为 X材料和 Y材料各自具有的 DNA条带数。
共用 ISSR引物 100个，其中 21个引物获得了带型清晰、重复性好的扩增结果，有效引物占 21%。
每个引物可以扩增出 1 ~ 7条较明显的主带，还有若干不很明显的弱带，共检测到 126种扩增片段。
其中 4个引物在不育系与保持系之间扩增出差异条带，11个引物在不育系、保持系与恢复系之间扩
增出差异带，10个引物未能在不育系、保持系和恢复系之间扩增出差异条带。
“三系”间的差异表现为两类：一类是质的差异，表现为带谱在某一系中有或无的差异，另一
类是量的差异，即组织结构和拷贝数的差异，表现为某一位置的带在“三系”中都有，但扩增带谱
的亮度不一致，有的带谱很亮，而其他系的相应带谱的亮度却很弱。
“三系”中质的差异有以下几种表现形式：（1）不育系和保持系具备某条带，而对应的恢复系
不具有；（2）不育系和恢复系具备某条带，对应的保持系不具有；（3）保持系和恢复系具备某条带，
对应的不育系不具有；（4）恢复系具备某条带，对应的不育系和保持系不具有；（5）不育系具备某
条带，对应的保持系和恢复系不具有，这种特异的条带可能与辣椒胞质雄性不育有关；（6）保持系
具备某条带，对应的不育系和恢复系不具有，这种特异的条带可能与辣椒胞质雄性不育的保持有关。
对辣椒“三系”线粒体 DNA的 ISSR扩增后的条带进行差异分析表明：不育系和保持系的差异
较小，差异率为 11.9%；不育系与恢复系的差异为 25.8%；保持系与恢复系的差异为 26.5%。
利用 POPGENE软件对辣椒“三系”线粒体 DNA的 ISSR标记进行分析，结果表明，辣椒不育
系与保持系之间的遗传关系较近，与恢复系之间的遗传距离较远。

关键词：辣椒；雄性不育；ISSR
中图分类号：S 641.3 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2577-01