全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2578 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–09–02
* 通信作者（E-mail：zhangqianah@yahoo.com；Tel：0551-5160817）
二次通用旋转组合设计优化辣椒 SRAP-PCR 反
应体系
谈 敏 1，张其安 2,*，刘童光 1,*，江海坤 2
（1安徽农业大学园艺学院，合肥 230036；2安徽省农业科学院园艺研究所，合肥 230031）
二次通用旋转组合设计是在正交回归组合设计的基础上发展而来，具有旋转性，能使与试验中
心点距离相等的试验点上的预测值方差相等，易于得到组合的最优反应体系。本试验中应用二次通
用旋转组合设计方法，对得到的数学模型进行分析，以期获得最佳的辣椒 SRAP反应体系，为辣椒
的分子研究提供技术参考。
参试辣椒材料均由安徽省农业科学院园艺研究所提供。品种‘H-119’用于 SRAP-PCR 反应体
系的优化研究，18个自交系用于 SRAP-PCR反应体系的检验。PCR反应程序为：94 ℃ 3 min；94 ℃ 1
min，35 ℃ 1 min，72 ℃ 1.5 min，5个循环；94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1.5 min，33个循环；
72 ℃ 7 min，4 ℃保存。PCR产物采用 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳缓冲液为 1 × TBE，100 V恒
电压电泳 2.5 h。按条带数、清晰度及背景对 32个组合设计的电泳条带进行打分，取 2次得分的平
均值，应用 DPS数据处理软件对结果进行分析。
以X1（Taq聚合酶）、X2（Mg2+）、X3（dNTPs）、X4（引物）和X5（模板DNA）为自变量，PCR
电泳产物结果得分为变量Y，得到PCR电泳产物结果得分的回归方程为：Y = 4.622–1.093X1–
0.406X2–0.26X3–0.448X4–0.01X5 + 1.222X12 + 1.472X22 + 0.597X32 + 0.722X42 + 0.409X52–
1.297X1X2–0.453X1X3 + 0.016X1X4–0.016X1X5 + 0.328X2X3–0.141X2X4–0.859X2X5–0.109X3X4 +
0.359X3X5 + 0.203X4X5。
方差分析结果表明，回归方程显著性检验 F2 = 3.39在 0.1水平上差异极显著，但是失拟检验 F1 =
12.17在 0.1水平上差异极显著，说明未控制因素对试验的影响很大，回归模型与实测值不能较好地
拟合，所以不能直接用模型进行优化分析。为此，采用计算机对不同水平的组合进行模拟试验，以
零水平的均值 7.94为临界值，获得大于临界值的方案 2 602个，在 95%的置信区间均值大于 7.94的
优化方案为：Taq聚合酶（X1）用量 0.465 ~ 0.49 U，Mg2+（X2）2.264 ~ 2.298 mmol · L-1，dNTPs（X3）
0.189 ~ 0.211 mmol · L-1，引物（X4）0.789 ~ 0.811 μmol · L-1，模板 DNA（X5）用量 43.59 ~ 45.021 ng。
结合实验室移液枪的实际条件，将优化方案定为：在 10 μL反应体系中 Taq聚合酶用量 0.5 U，Mg2+
浓度 2.3 mmol · L-1，dNTPs浓度 0.2 mmol · L-1，引物浓度 0.8 μmol · L-1，模板 DNA用量 45 ng。进
一步将 18个不同的辣椒材料用不同引物组合对优化体系稳定性检验，结果表明该体系可靠稳定，适
用于辣椒 SRAP分子标记的研究。

关键词：辣椒；二次通用旋转组合设计；SRAP；反应体系
中图分类号：S 641.3 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2578-01