全 文 ：武汉植物学研究 2004，22(6)：551～556
Journal of Wuhan Botanical Research
一 种适用于RT—PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法
李菁芳，黄劭毅，田仁鹏，张珞珍，方呈祥
(武汉大学生命科学学院，武汉 430072)
摘 要：杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质，这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表
性的提取植物总RNA的方法，建立了一种酸酚法和 PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单，
使用的试剂均为常规试剂，成本低，能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质，从而得到高质量的 RNA。
使用这种改 良的方法制备的总 RNA产物对 P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse trans—
criptase．polymerase chain reaction，RT—PCR)，证明此方法是一种适用于 RT—PCR的杉树类植物组织中总 RNA
提取的方法。
关键词：杉树类植物；RNA提取；次生物质；RT—PCR
中图分类号 ：Q943 文献标识码：A 文章编号：1000—470X(2004)06—0551—06
An Improved M ethod Suited to Extract Total RNA
Used to RT—PCR from Fir Plant
LI Jing—Fang，HUANG Shao-Yi，TIAN Ren-Peng，ZHANG Luo-Zhen，FANG Cheng—Xiang’
(Colege of Li Sciences，Wuhan University，Wuhan 430072。China)
Abstract：Fir plants contain plenty of po1ysacchrides and polyphenols．Comparing several stan—
dard methods for extracting total RNA from fir plant，a modified method which can eliminate the
interferences of polysacchrides and polyphenols in the plant tissues was constructed in the present
study．The high—quality RNA sample obtained by the improved CTAB method used to RT-PCR
(reverse transcriptase—polymerase chain reaction)of P45O gene study，and the result indicated
that the method is easier for operation and is at lower cost．
Key words：Fir plants；RNA extraction；Secondary substance；RT-PCR
核糖核酸(RNA)是分子生物学研究的重要材
料之一，无论是 cDNA文库的构建、Northern杂交
分析和分离基因，还是研究基因的转录调控都需要
高纯度且保持完整性的RNA。反转录聚合酶链式反
应 (reverse transcriptase-polymerase chain reac．
tion，RT．PCR)是一种从 RNA扩增 cDNA拷贝的
方法。RT．PCR对于获得与克隆 mRNA的 5’与 3’
末端序列以及用极少量的 mRNA样品构建大容量
的cDNA文库等方面都是极为灵敏的方法。此外，
RT—PCR还易于鉴定已转录的序列是否发生突变
及呈现多肽性；还可用于测定基因表达的强度，尤其
是在可获得的mRNA数量有限以及目的基因表达
水平很低~,-]OIJ用RT．PCR方法来分析L1]。获得高质
量的总 RNA是进行 RT．PCR十分重要的基础步
骤。从植物组织中制备RNA方法已有许多报道，其
中酸性酚一硫氰酸胍．氯仿法[ 、一步法 和苯酚法 。]
等可用于绝大多数动植物组织中RNA的提取。不
过，许多植物包括杉树类植物中含有大量的多糖、胶
质与酚类等次生物质，用传统的方法来提取这些植
物组织中的 RNA，通常获得的 RNA产量低、易降
收稿日期；2004—01—19。修回日期 2004—05—09。
作者简介：李菁芳(1976一)，女，武汉大学生命科学学院硕士。现从事植物 P450基因的研究
· 通讯作者(Author for corTesp0ndence)
I
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武 汉 植 物 学 研 究 第 22卷
解或不宜用于体外翻译。因此如何有效除去多糖、酚
类和胶质等物质，而且尽量减少 RNA的损失是分
离这类植物组织中RNA的关键。
根据现有方法的特点以及杉树类植物材料的特
殊性，我们选用几种不同的方法，从不同来源的杉树
类植物组织中提取总 RNA，并进行 RT—PCR，以摸
索 出一种有效的适宜 于 RT—PCR杉树类植物总
RNA的提取方法。
1 材料和方法
1．1 实验材料
东北红豆杉、水杉和南方红豆杉的幼嫩叶及茎
尖于 2003年 6月中旬分别采 自大连及中国科学院
武汉植物园。采样后立即放入液氮中保藏备用。
1．2 实验方法
(1)TRIZOL法 TRIZOL试剂购 自 Invitro—
gen公司，其 RNA提取方法参照 Invitrogen公司的
试剂说明书，得到的总 RNA溶于 100 L DEPC水
中。
(2)乙二醇丁醚法 参照文献[3]的方法进行。
取 300 mg的叶片，在液氮中迅速研成粉状，转入
10 mL离心管中，加入 3．3 mL抽提缓冲液(Tris·
HC1 3 mL，pH8．0；25％ SDS 300 L；p一巯基 乙醇
6O L)，迅速振荡 1 rain；加入 3．3 mL酚／氯仿／异
戊醇混合液(以0．4 mol／L NaAc，pH4．0饱和苯酚，
然后与氯仿、异戊醇以 25：24：1比例混合)振荡
1 min，收集上层水相，重复此过程，直至界面无白色
蛋白层为止；加入 0．8倍体积的异丙醇，混合均匀后
于 一 20℃放 置 30 min后 ，经 10 000 g 4℃离 心
15 rain；弃上清，沉淀物用 75 乙醇洗 2次，干燥后
加入 300 L DEPC水。待沉淀物溶解完后加入
12 L NaAc(2 mol／L，pH4．0)，再加入 0．4倍体积
乙二醇丁醚，0 C下放置 30 min；10 000 g 4 C离心
10 rain；移上清，弃沉淀，加入 1倍体积乙二醇丁醚，
混匀后 0"C放置 30 rain，10 000 g 4℃离心 15 rain；
弃上清，沉淀物用 75 乙醇淋洗 2次后吹干，溶于
100 L DEPC水中。
(3)普通CTAB法 参照文献[4]的方法。先在
3 mL含 CTAB的 提 取缓 冲液 中 (2 CTAB；
100 mmol／L Tris·HC1，pH8．0；1．4 mol／L NaC1；
20 mmol／L EDTA，pH8．0)加入 60 L巯基乙醇，
置 65℃预热，再将 600 mg经液氮研磨的叶片粉末
放 入其中，用力混匀后，置于 65℃中保温 1 h(每
10 rain摇匀 1次)；然后取出样品，自然冷却至室温，
用等体积氯仿／异戊醇混合液(24：1)抽提至无界面
无白色蛋 白层，室温下 10 000 g离心 20 min；取上
清，加入 10 mol／L LiC1至终浓度 为 3 mol／L；于
一 20℃放 置 4 h(或 过 夜)，经 16 000 g 4℃离 心
20 rain，去上清液，沉淀用 1 mL DEPC水溶解，再用
等体积酚／氯仿／异戊醇(25：24：1)抽提；取上清
液，再经氯仿／异戊醇(24：1)抽提 ；取上清，按 1／30
体积加入 3 mol／L NaAc(pH5．2)以及 1／10体积的
无水 乙醇，混匀后冰浴 30 min，16 000 g 4C离心
20 rain；取上清液，按 1／10体积加入 NaAc(3 tool／
L，pH5．2)以及 3倍体积的无水乙醇，一70℃下放置
4 h；经 16 000 g 4℃离心 20 rain，沉淀物用 75 乙
醇淋洗 2次，干燥后溶于适量体积的 DEPC水中。
(4)改良CTAB法 在 3 mL含CTAB的提取
缓冲液 中 (2％ CTAB；100 mmol／L Tris·HC1，
pH8．0；1．4 mol／L NaC1；20 mmol／L EDTA，
pH8．0)加入 60 L巯基 乙醇，置 65℃预热，再将
600 mg经液氮研磨的叶片粉末放入其中，用力混匀
后，置于 65℃中保温 30 rain(每 10 rain摇匀 1次)；
然后取出样品，自然冷却至室温，用等体积氯仿／异
戊醇混合液(24：1)抽提 2次；加等体积酚／氯仿／异
戊醇混合液(以 0．4 mol／L NaAc，pH4．0来饱和苯
酚，然后与氯仿、异戊醇以 25：24：1比例混合)抽
提至界面无白色蛋白层，4℃ 10 000 g离心 20 rain；
取上清，加入 4／5体积的 13 9／5(m／v)PEG8000以及
8／5O体积的 4 mol／L NaC1，混匀后置冰上 20～
30 rain；于 4℃ 16 000 g离心 15 min，去上清；沉淀
用 75 乙醇淋洗 2次，干燥后溶于适量体积的 DE—
PC水 中。可加步骤：每 20～50 g RNA用 2 L
DNase I(RNase—free，5U／／~L)进行消解，反应体系
为 TaKaRa公司的 DNase I(RNase free)，步骤按
产品说明书进行，以除去在总 RNA 中残余的基因
组 DNA。
(5)抽提上清液粘度的测量及总 RNA提取质
量的检测 分别取 10 mL第一次抽提的上清液，测
量上清液粘度(NDJ一79型旋转式粘度计 ，上海)；用
乙二醛化 RNA的 1．5 琼脂糖凝胶 电泳法检测
RNA的完整性；分别取 60 L总 RNA加入 比色
杯，测定总 RNA分别在 260 nm和 280 nm的紫外
吸收值 (BioMate 5型紫外分 光光 度计 ，Thermo—
Spectronic)，RNA浓度(ug／mL)一OD260×稀释倍
数×37 gg／mL。
(6)cDNA的合成及P450基因的PCR扩增 反
转录按照 Invitrogen公司的产品操作程序进行(反
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蛐 车荷 垮等： ] 川于 RT—PC!R呐q坩娄 拘巾 RNA提 的方陆
鞲 采体 系为 SuperScriptTM I RNase H Reverse
T⋯i／so ipta5c)=将别备的￡J： 杉总 RNA进行反转
录．侍成 cDNA第 链 眨转录所用的铺定引物为
Oigo(dI】1 5 p rimer(Pmmega公司J P(’R 蚺呆
用的 【物为以Genbank所艘表曲 P150簋 cDNA
序列而没i 的 一对互补特 异眭引物 25 L PCR反
应体 系为：Premix Taq(Ex Taq Vcrsion．TaKaRa
登司、】2 5 I．， 朴0I物 芹 0 5 1 ．eDNA 模板
1 5 L．无菌去离子水 10 f止。PCR最 什：9d
)s；52c 怕 s；7：c，2 mia，觚 个循环后 72(延
忡IOmin 扩增产物经 ()? 雅脂槠凝舱电淋． 察
结 果
2 结果
1种下同方法曲粗提被t植物材料与抽楗被直
接接睦的反应)和第一次抽提产物c粗提液与有帆抽
捏试制的反应)的嗍色比较 见 1．圈 2 下同方
法提取的总RNA的相是持眭见丧 1．
采用1RIZO[ 法提取杉忙f粪幢物总 RNA时，
随物组织 与TRIZOI 敢 l反应时颜也呈探稿也t图
1：1)．这是由于植物组织巾的酣娄物质氧 t七所致 加
八氯仿离心后．E清维很粘裥． 帖腰为 4 mp~／s．
异雨 阵沉淀后 出 人 世白垩 色絮状 沉淀物{甩
DEPC水溶解日、』，需存 50～6O(’下才能溶解．且溶解
时『圳长，经 卸～3(I mln 潦锵髓m提粘稠的腔状
物。朋I~Nase对 进行消化，雅状物并无降解；加入
2~；CTAB并在 6j(F扳碰 30 min．产生大量白邑
沉淀．溶液澄肯．尢粘性．由此可以 陟 确定这 脞
状物主薯是多措与授酷的复台半钾 使用 IRIZ{)I_法
能商被地击除多特雀蛳质，册已二孵化RNA的
1 cI，⋯ *‘r ‘⋯h TRI (I tnti}¨I 2 Coa r⋯ x|rn L
I ethyle rteglyeM m0rl c’huI1 lhlf lu hod{ ． 。rlr
星
l【l lh cd is“⋯ ameⅡB g neral(’I^ B “i Ihod。s)
围 I 3种方法获辞的姐提物的颜色比较
Fig j 【 I itparlsoll col,lc { f [}a⋯
I r rn by⋯h rm t h(}d
一●
I Th fl r I xlra hv川{l m 【ncthod】=Thcf【r 【
l⋯ I hy eihylenbglyetll rl1nn【，}¨『 l c1h⋯ 1 tIloll-3 Th
⋯ I r州 b CTA『l n t d(穆 盎【’TAP,『圭浒 一 K抽
摊产蝴 与酱通 (’1AB法的枢同 Tl first cx
【m r(I d fTAB l¨ Lh‘、d⋯ 【I ⋯ _Icr l C【_An
mcthod’s}
圉 2 3种方法获得的第一班抽提产物的颜色比较
Fig ! (’ nr】 r】 rl【，f~olors l he firs,
exl r月 ’v Inr⋯ n _l1l’
表 I 4种不同方法提取杉树粪植物总 RNA特性的比鞍
1 ah】 I (7~znparIs⋯i，『chargel rs‘】fIl¨ I l RNA t xI r ct LI
from lit plam 1I⋯ c by four m 【】1od5『J R A
． ! 冀
⋯ ⋯|I n c Lho
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Note ： Phmt mn r etiala are lit p ： ． det。 ¨h⋯
lv ‘-1 fi．mobutyl th
琼惜惦凝脞电泳法可斟对总RNA的质域进行比较
舒析 厶一醛可 』¨消际单谜RNA的一缎站构 ．在撇
酸的条件下．乙 ．醛的 !个乙醛丛 i 苷的亚氧
}H互 作吊形成环状 化合物．在章温下 日pH≤7 f)
时．这种比台物识稳定．能很好地 『】：电泳时 RNA
的 钟．困而能 好地反映 RNA的提取站粜 如
陛I 3 A h斤示 TRIZOL拦泉的总RNA经己一醛址
理后．用 l 5 96琼脂糨凝脞进阡电诛．结 在凝胶
【芏孔处出蛐荧北．即使 l 样后先用高电压 8 V，rm
电池 ～1 5 min．也难以艟撵孔内岫 RNA迂 F#出
显然这是样品青仃七 多糖所致
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哉 慢 植 物 学 研 充 策 ：2巷
样孔
A B
A TOta【RNA exiliC[ed bv TR1ZO1 n1cthod：B T0tal
R_＼A extt-aeted by cthvlelie lvcol monohtlv【 f2t}icr
nlethod：C．Tolal RNA ex[tacted by geaeral CTAB
method{D．Tota【RNA ex【rac|efl by lreproved CTAB
rilethod{M．Ma rker
图 3 4种不同方法提取总R A的琼脂糖凝腔电泳图谱
Fig．3 Agarose gel eIect㈣ hnresls patern of 1o ral
R A 0xt racted W Lth fou r melhods
在乙二醇丁醚法提取杉绀类植物RNA的过程
中，抽提缓冲液与植物组织反应时，没有出现TRI—
ZOL法提取RNA时的酚氧化现象+组织材料保持
青绿色( 1：2)，但是在用酣／铽仿／异戊醇混合液
进行第一次抽提时，植物材料反应后呈褐色，这是植
物材料被苯酚氧化的结果( 2：2】 第 一次抽提得
到的上清液粘稠．其牯度为 3 mpa／"S．说旧 清液台
有大量的多错物质(表 1)。第一次罔酒精沉淀时．出
现大量的絮状自垩色沉淀物，说}哪多糖并术除尽。乙
二醇丁醚处理后，几手无任何沉淀 其 RNA提取物
用乙二醛处理，再经 1．5 琼脂l槠凝胶电泳后基本
上观察不到任何核酸带(图3：B)
在两种 CTAB法提取 RNA过程中，提取缓冲
液与植物材料反应时，材料仍保持岢绿色(阿 1：3)．
第一次抽提得到的上清液呈淡绿邑且不牯弱，其粘
度为 1．5 mpa／s(表 1)，分别比TRIZOL法干Ⅱ己二
醇丁醚法得到的上清液的粘度下 降 62． 和
5O 说明在提取缓冲液裂解值物组织细胞的同时．
也去除了大量的多糖．而且没有发生酚氧化现象。如
表 l所示，用 I iCl沉淀 RNA或用聚己二醇沉淀
RNA时，两种沉淀过程中无自垩色絮状沉淀，表明
多糖物质基本被去除。离心后得到白色透亮的沉淀
物。改良CTAB法获取的提取洋品较普通 CTAB法
得到的量多，色素等杂质基本被去除。将沉淀物溶解
后，用 DNase I【RNase free)进行消化．去除 RNA
- 残存的DNA．得到纯度较高的 RNA产物 两种
CTAB法制备的杉钟类植物组织总 RNAⅢ 二醛
处理后．经 1．5 琼脂糖凝胶电泳结果见 3：C+D，
从圈 3可知．琼脂错凝胶上显示出两种 CTAB法的
28S rRNA、18S rRNA两条带均报清晰，28S rRNA
的荧光亮度约是 18S rRNA的两倍，而且可以 见到
弥散的mRNA区域 由于LiCI沉淀小分子RNA ：
完全一 ]．而 PEG主要是引起溶液l1】大分子隋顷分
子的聚合 ]，所以两fl,CTAB法所得的 5s、j．8s
RNA∞ 很少
将 4种不同提取方法得到的总 RNA爪紫外分
光觅度计测定RNA的紫外吸I 值表叫(表 2)，改良
[内CTAB法提取的总 RNA的 ： 、质缱都很高，
OD ⋯／OD一 达到 1．8以上．抟境的(：TAB法提
取的RNA 电泳质鼋也很高．怛产节不高(RNA的
得率仅为改良法的 14．d )．且 RNA纯度偏低
‘OD ．／()D 仅为 1．05)，TRIZOI 法提取的总
RNA纯度偏低(OD ／OD! ⋯ 1．04)．产址低
(RNA得率仅为改良法的 1 3．3 )．且电泳质量也
艰低．己二醇丁醚法提取的 RNA鲢太少，这两鲫方
法提取的 R A不能用于 RT—PCR
表 2 4种不同方法提取杉树娄植物总RNA质量的比较
Tal>le! Co rtpi~rison of ill~alilies{ f Iolal RNA xl ratted
irom Iir plam tis sues by fou r methods ol RNA
为 r检验改 良的 (：TAB法圳备总 RNA 用于
RT PCR中的效果， 两种 (7TAB法提 取 的总
RNA怍为模板进行反转录，获得的 cDNA产物再
进行红豆杉 P,t50基因特异性的PCR扩增，均得到
约 1．5 kb的扩增产物(见图 1j，其分子挝与 Tu J
等 在 NCBI上所发表的 cDNA大小一致
由此可见．比较 4种不同的方法获得杉卡叶类试
物组 织总RNA的效 果 明显不 同 ．其 巾改 良的
j Tu J·Cheng K·MuleculR chining—function expres sion and characterization。f H cy：~hronle P150 from r⋯ ^ ， kl~：puhlishud)
[DB，o【，]．NCBI(AF5．158331．2舯2
^ 一
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第 6崩 李 昔等：一种J五 于 RT PCR的 树类简匈1，总RNA提求的方 ：
CTAB洁不仅可 从杉辫类植物中提取高质艟高纯
度的总RNA．而卧提取的 RNA能有效地习十 RT
PCR。
l 2 3
1．R丁一tK：R products ol t’4 50 gene f_ ~mproved( rAI3
metNad；2．RI’。PCR products of I 5n ~t2lit2 by C1’All
method：3．Lambda DNA Tlind II1_一EerlR I nlRrker~
圉 4 R1 一PCR产物 0．7 琼脂糖凝胶电濂图谱
Fig 4 0．7 a~arose gel decI rl}ph~)resis patlern。
RT．PC：R prod_J 1
3 讨论
杉树类植物组织一中含有大量的酚类及其代谢
物．在氧 化条 什下．酚类物质 会产 生榭 化敬 应
(browning efec1)r J+酚类物质氧化后 ：可逆地结
合到核酸上井与 RNA』 沉淀．这导致 RNA产 和
质量均很差 。¨J。防I 酣娄物质醵 化的方法主要有
还原剂法、螯台剂法、Tris一硼瞳浊、BSA法和丙剐法
等，而还原制浩 ‘服足在提取液巾 八 筑基乙醇、
DTT或半胱氨酸等米防治酚类物质做氯化． 筑基
乙醇等还可以打断多酚氧化酶I’日 硫键而使之失
活 j TRIZOI，试制中含有苯酚等强氧化物质，不禽
上述去除酚类物质的组分．所以去除酚类物质的效
果很差．植物组 材料 与TRIZ{】J_反应后生喝色，
使RNA进一步丢失 乙■醇丁醚法采肘 』 一巯基
乙醇来保护 RNA免受多勤类翱质的干扰．正是乙
二醇丁醚法在第 步抽提过 ，1啦!J】r骑 ：瓤f方：
异戊醇混合般．苯酚直接与值物．1哼#}接链，使瞳物组
织漱强氧化，发生倡化效应：为』 防J 喵fE效直的发
生．我们采用 巯基乙醇来防I 断类物质的氧化}而
且在莳两步抽提巾．采用氯竹：异戊舀{【【2{：Ij怍为
抽提剂．使植物材树不与=j}=酚这 强氧化剂白．接接
触．在以后的步骤巾再f!j用苯酚： 仿：异戊 I 25
2d：1)(pH4．0)世行抽提，可 有效地防止描化效
应的产生 同时我们发现如粜第一步就采H1苯酚进
行抽提，以后沉淀得到的产物有目}J显的街化现象
杉射类植物组织中还禽有大 的多精物质 提
取 埘娄植物的 RNA，需张值物组织细咆裂解、内
容韧与抽提缓冲液反应时就去除细咆巾的次生代谢
物如多楷、多酚等物质． 则这些次生代谢劫易与
RNA结合形成粘稠难溶的胶状物．由于多糖可以抑
制许多酶的活性 J． 此污染 r多特的 RNA榉品
无法用于进 步的分子生物学研究 而且此胶状物
一 旦形成，很难用其它试剂使其与RNA分开．这是
为多糖的许多理化}生质 与RNA 1 舟辛日似，去除
多糖的 时 RNA也泼携带走 TRIZOL 含能
有效去除多糖和多酚类物质的组分．提取的 RNA
纯度下高：在讷离子浓度为 8O mmol儿 时．0．4情
体积的乙二醇丁醚能选择性沉淀多精．而且 1倍体
积的乙二醇丁醚能在溶样多酚粪物质的同时沉麓棱
阪。。 l 991年Kenneth等采用 二醇丁醚去除抽提
液：_的多l饴和多酚物质，芹从富等谈生劫质的草蓐
中获得质量较好的 RNAl”。 车大 力改 良Kenneth
的方法．也从草薄中提取 J 纯l蔓较高的RNA J 虽
然乙二醇丁醚可 在不l司浓度下选择l生的沉淀多糖
技多酚类物质，但是由于在己二雕丁辩法酌抽提缓
冲液巾不含能去除多糖等的物质，|1』致在以l 几步
一 H乙 醇丁醚束除去 多糖If1l多骑的同时．损失 r
火部分RNA．其 RNA得率很低．所 这两 方法
均7：宜用于提取含多糖对l多酚类物覆较多的忖料的
RNA．不能用千 RT—PCR荨丹于生物学操作
厢两种CTAB法提取杉坩赉敞翱组织 ∞RNA
转 l：j主另外两利 方法育l1H显放粜 两 I_CTAB 。法
不仅能够去障髓物组 内多糖物质．包能去除酣类
物质，从而获得质鲢较高的总 RNA。阿胂C FAB方
盛世在抽提液巾加入丁一 阳离于去污剂 CTAB．
宅H宵从低离子强度的溶液巾沉淀核脯佃魏慧多聚
髓蛇特性，而在高离子强发的溶橄盟，(_TAB与蛋白
质阳太多数酸性多聚糖以外的多埭储形成复台物，
} 姓不能沉淀核酸 j．所 能够fr救地玄除多特 莆
通 (：TAB法使用一利，强脱水剂 1 作为沉淀剂+
它 以选择性沉淀高分子 的 RNA．沉淀效粜妤．
仨姓其沉淀时间过长。往位需要 1芟沉淀 而且佯品
中 糸的r iCI金干扰 RNA的反转采和体外垂耕译．
所以一般需要再次抽提 ．乙醇沉淀以纯fE佯t 。
而改良的CTAB法中采用 PE(；SHOO n：为沉淀剂，
由1 PEG可 引起水溶液中大丹予溶质丹于的聚
台，可 侬摒其分子大小束沉瞎陵酸 】 实验 州．
PEG沉淀的除杂散架远高于乙孵相异阿醇．儿沉瞎
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556 武 汉 植 物 学 研 究 第 22卷
时间短，仅为 2O～30 min。可用 7o％的酒精漂洗 2
次以除去沉淀中 PEG ，这种方法简便而且效果很
好 ]。而且改 良的 CTAB法利用酸酚进行抽提，
RNA在水相，而 DNA在有机相，去除 DNA彻底，
有效地避免了DNA的污染[1 。]；而且酸性环境能部
分抑制 RNA酶的活性。经 PEG8000沉淀后得到的
RNA 已完全可以用于 RT—PCR等分子生物学操
作。若将得到的 RNA再经过 DNase(RNase—free)
消化去 除残 存 的 DNA 后，即可 得 到高 纯度 的
RNA。改良CTAB法所需时间较短，能有效去除多
糖物质，而且成本低廉，获得的 RNA量较大，且质
量较好，适用于 RT—PCR等分子生物学操作。我们
也曾用此方法有效地提取出如冷杉、三尖杉、花生种
子、玉米种子等植物中的 RNA，所以我们认为改 良
的 CTAB法是一种制备杉树类植物总 RNA的有效
方法，而且可能也适宜于其他含次生代谢物较多的
植物组织的RNA制备。
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