全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

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不同产地加工方法太子参核苷类成分 Q-TRAP-LC-MS/MS 分析
马 阳 1，侯 娅 1，邹立思 1，刘训红 1*，徐 力 2，兰才武 3
1. 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023
2. 扬州市药品检验所，江苏 扬州 225000
3. 贵州昌昊中药发展有限公司，贵州 凯里 556000
摘 要：目的 探讨不同加工方法对太子参核苷类成分量的影响。方法 采用 Q-TRAP-LC-MS/MS 技术同时测定不同加工
太子参药材中 13 种核苷类成分的量。结果 太子参核苷类成分中，以胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷的量较高；不同加工
方法对太子参中核苷的量有一定影响，烘干样品核苷的量普遍高于晒干样品。结论 为揭示加工对太子参化学成分的影响及
优选太子参适宜产地加工方法提供基础资料。
关键词：太子参；加工方法；Q-TRAP-LC-MS/MS；核苷类成分；胞苷；尿苷；肌苷；鸟苷；胸苷
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)01 - 0043 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.01.010
Q-TRAP-LC-MS/MS analysis on nucleosides in Pseudostellariae Radix
with different processing methods
MA Yang1, HOU Ya1, ZOU Li-si1, LIU Xun-hong1, XU Li2, LAN Cai-wu3
1. Nanjing University of Chinese Medicine, Nangjing 210023, China
2. Yangzhou Institute for Drug Control, Yangzhou 225000, China
3. Guizhou Chang Hao Chinese Medicine Co., Ltd., Kaili 556000, China
Abstract: Objective To investigate the influence of different processing methods on the contents of nucleosides in Pseudostellariae
Radix (PR). Methods Q-TRAP-LC-MS/MS method was applied for the analysis on 13 kinds of nucleosides in PR with different
processing methods. Results The contents of cytidine, uridine, inosine, guanosine, and thymidine were higher in PR. The different
processing methods of PR had certain influence on the contents of nucleosides. The amount of nucleosides in PR by oven drying was
higher than that by drying in the sun. Conclusion The paper investigates the influence of processing methods on chemical
composition in PR, and provides the basis for establishing reasonable processing technology.
Key words: Pseudostellariae Radix; processing methods; Q-TRAP-LC-MS/MS; nucleosides; cytidine; uridine; inosine; guanosine;
thymidine

太子参为大宗常用中药材，系石竹科假繁缕属
植物孩儿参 Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax
ex Pax et Hoffm. 的干燥块根，具益气健脾、润肺生
津之传统功效[1]。现代研究表明，太子参水提液具
有保护心肌功能、促进免疫、抗应激、治疗糖尿病、
止咳等药理作用[2]。本课题组曾采用 UPLC-Triple
TOF-MS/MS 技术分析了不同加工方法对太子参化
学成分的影响[3]。
核苷类成分是生物细胞维持生命活动的基本组
成元素，具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、改善脑
细胞代谢、镇静中枢神经、抗血小板凝集、抗心律
失常和抗惊厥等多种生物活性[4-6]，与太子参药效具
有一定关联性，可作为太子参药材的质量评价指标
之一。

收稿日期：2014-08-14
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81274016；81473312）；国家科技支撑计划项目（2011BAI13B04）；江苏高校优势学科建设工程资助
项目（ysxk-2014）
作者简介：马 阳（1990—），女，硕士研究生，主要从事中药品质评价研究。E-mail: nzymayang1990@163.com
*通信作者 刘训红，男，教授，主要从事中药鉴定与品质评价研究。Tel: (025)85811511 E-mail: liuxunh1959@sohu.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

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古代本草中早有关于加工方法对药物性味影响
的论述：“夫药采取不知时节，不以阴干、暴干，虽
有药名，终无药实”。可见，药材产地加工方法是影
响药材品质的关键因素之一。目前太子参产地传统
加工以生晒法与烘干法为主，有关太子参加工方法
及其对药材质量影响的研究还尚未见报道。本实验
以国内主要产区贵州施秉 GAP 基地种植太子参为
研究对象，用 Q-TRAP-LC-MS/MS 技术同时测定不
同加工方法太子参中 13 种核苷类成分的量，探讨加
工方法对太子参中核苷类成分的影响，为优选太子
参适宜产地加工方法提供基础资料，同时为太子参
药材质量的综合评价提供新的方法参考。
1 仪器与材料
岛津液相 UPLC-20ADXR 系列，配有溶剂脱气
装置、自动进样器，日本 Shimadzu 公司；API 4000
四级杆-线性离子阱质谱仪，配有离子喷雾接口，美
国 AB SCIEX 公司；CentriVap 离心浓缩仪，美国
Labconco 公司；KQ-500B 超声波清洗机，昆山超声
仪器有限公司，超声功率 500 W。
对照品尿嘧啶（批号 100469-200401）、鸟嘌呤
（ 批 号 140631-200904 ）、 次 黄 嘌 呤 （ 批 号
140661-200301）、尿苷（批号 887-200202）、腺嘌呤
（批号 110886-200001）、肌苷（批号 40669-201104）、
腺苷（批号 110879-200202）购自中国食品药品检
定研究院，质量分数均＞ 98%；胞苷（批号
100982718）、鸟苷（批号 1001103046）、胸苷（批
号 1001182663）、2′-脱氧肌苷（批号 1000852992）、
2′-脱氧鸟苷（批号 1000943454）购于美国 Sigma
公司，质量分数均＞98%；2′-脱氧胞苷（批号
YSJ-04024）购于上海远慕生物科技有限公司，质
量分数＞98%。水为超纯水，由 Millipore 纯水器制
备；甲醇为色谱纯，德国默克公司；其余试剂均为
分析纯。
太子参样品于 2013 年 7 月下旬（当地传统采收
期）实地采集于贵州施秉太子参规范化种植基地，
块根采挖、洗净后，按不同产地加工方法进行处理：
S1——直接晒干（置日光晾晒至干足），S2——边
晒边搓（置日光下晾晒至半干后搓去须根，再晒至
干足），S3～S5——烘干（置烘箱内分别以 40、50、
60 ℃烘干），均经南京中医药大学刘训红教授鉴定
为石竹科植物孩儿参 Pseudostellaria heterophylla
(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm. 的干燥块根，留样凭证
存放于南京中医药大学中药鉴定实验室。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Waters Atlantis T3 柱（150 mm×2.1
mm，3 μm）；流动相为甲醇-5 mmol/L 醋酸铵水溶
液；梯度洗脱：0～4.5 min，3%～4%甲醇；4.5～8
min，4%～18%甲醇；8～10 min，18%甲醇；柱温
35 ℃；体积流量 0.4 mL/min；检测波长 254 nm；
进样量 5 μL。
2.2 质谱条件
离子源：Turbo V，电离模式：（ESI+）；采集方
式多反应监测（MRM）；离子化温度（TEM）：650
℃；喷雾电压：5 500 V；雾化气（GS1）：448.24 kPa；
辅助气（GS2）：448.24 kPa；气帘气（CUR）：206.88
kPa。各成分具体质谱分析参数见表 1。
2.3 对照品溶液制备
精密称取尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、鸟嘌呤、
尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧
胞苷、2′-脱氧鸟苷、2′-脱氧肌苷对照品适量，加水
配制成质量浓度分别为 1 076、751、500、206、1 048、
964、1 037、972、874、1 094、911、1 016、947 μg/mL
的对照品储备液。取各对照品储备液适量，加水定
容至 10 mL 制成混合对照品溶液，各核苷质量浓度
分别为 2.152、75.100、7.500、1.030、262.000、1.928、
155.550、97.200、131.100、4.376、18.220、40.640、
94.700 μg/mL。并逐级稀释，得到一系列不同质量
浓度的 13 种核苷混合对照品溶液，以 0.22 μm 微孔
滤膜滤过，供分析用。
2.4 供试品溶液制备
取样品 1 g（过 40 目），精密称定，置于 25 mL
具塞锥形瓶中，加入 15 mL 超纯水，室温下超声提
取 45 min 后，滤过，超纯水洗涤 2 次，每次 5 mL，
滤液 10 000 r/min 离心取上清，上清液用离心浓缩
仪浓缩至约 1 mL，浓缩液定容至 2 mL，过 0.22 μm
滤膜，供 UPLC-Q-TRAP 分析。
2.5 标准曲线、检测限和定量限
精密吸取“2.3”项下的不同质量浓度的系列对
照品溶液及混合对照品储备液各 5 μL，在“2.1”
项和“2.2”项条件下测定，以对照品的峰面积（Y）
对相应的质量浓度（X）进行线性回归，得回归方
程、相关系数和线性范围；逐步稀释各对照品溶液，
按信噪比（S/N）约为 3 计算检测限（LOD），以 S/N
约为 10 计算定量限（LOQ），见表 2，13 种核苷提
取离子的 MRM 图见图 1。
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表 1 优化的质谱条件参数
Table 1 Optimized MS/MS parameters
化合物 tR/min 定性离子(m/z) 定量离子(m/z) 去簇电压(DP)/V 碰撞能量(CE)/eV
尿嘧啶 1.57 113.0/96.1 113.0/96.1 68 23
胞苷 1.58 243.9/112.1 243.9/112.1 95 18
次黄嘌呤 2.03 137.0/110.0 137.0/118.9 88 33
鸟嘌呤 1.97 151.8/110.0 151.8/135.0 54 27
尿苷 2.44 244.7/113.1 244.7/113.1 40 12
腺嘌呤 3.07 136.0/92.0 136.0/119.1 66 29
肌苷 4.75 269.0/137.0 269.0/137.0 39 15
鸟苷 5.31 284.3/152.1 284.3/152.1 42 16
胸苷 8.14 243.1/117.1 243.1/127.2 41 12
腺苷 9.27 268.1/136.1 268.1/136.1 73 24
2′-脱氧胞苷 1.88 227.9/112.1 227.9/112.1 87 13
2′-脱氧鸟苷 6.50 268.0/152.3 268.0/152.3 39 13
2′-脱氧肌苷 5.70 253.0/137.0 253.0/137.0 39 10

表 2 13 种核苷标准曲线、检测限和定量限
Table 2 Calibration curves, LODs, and LOQs of 13 nucleosides
化合物 回归方程 r2 线性范围/(μg·mL−1) LOD/(ng·mL−1) LOQ/(ng·mL−1)
尿嘧啶 Y＝1 058.89 X＋3.70×103 0.991 1 0.054～2.152 2.79 9.30
胞苷 Y＝60.78 X＋2.15×103 0.993 6 1.878～75.100 1.30 4.33
次黄嘌呤 Y＝241.29 X－4.28×104 0.995 2 0.187～7.500 5.57 18.57
鸟嘌呤 Y＝1 515.71 X＋5.71×104 0.995 1 0.051～2.060 2.12 7.07
尿苷 Y＝97.73 X＋2.35×105 0.999 9 6.550～262.000 0.48 1.60
腺嘌呤 Y＝4 833.36 X＋3.72×104 0.996 4 0.048～1.928 0.64 2.13
肌苷 Y＝169.70 X＋2.81×105 0.999 0 3.889～155.55 0.37 1.23
鸟苷 Y＝782.33 X＋2.67×106 0.998 5 2.430～97.200 0.29 0.97
胸苷 Y＝15.85 X＋980.87 0.993 9 3.277～131.100 2.66 8.87
腺苷 Y＝2.74×104 X＋1.023×106 0.994 2 0.219～4.376 0.04 0.14
2′-脱氧胞苷 Y＝180.75 X－3.97×103 0.995 1 0.455～18.220 0.39 1.30
2′-脱氧鸟苷 Y＝312.036 X＋8.36×105 0.996 7 1.016～40.640 0.05 0.16
2′-脱氧肌苷 Y＝10.58 X＋1.38×104 0.991 6 2.367～94.700 0.45 1.50

2.6 方法学考察
2.6.1 精密度、重复性、稳定性试验 取一定浓度
的混合对照品溶液，平行 6 次进样，分别计算各核
苷峰面积的 RSD 值；取太子参样品 6 份，依“2.4”
项方法制备供试品溶液，进样测定各核苷质量分数
的 RSD 值；取太子参样品供试液，分别在 0、2、4、
8、12、24 h 进样 6 次，测定 13 个核苷峰面积的 RSD
值，结果见表 3。
2.6.2 回收率试验 取已测定的太子参样品 0.5 g 6
份，精密称定，分别加入一定量的对照品溶液，按
“2.4”项下方法制备加样回收率供试品溶液，在上
述分析条件下进样，计算各核苷的加样回收率和
RSD，结果见表 3。
2.7 样品测定
将供试品溶液注入液相色谱/质谱联用仪，依法
测定。根据相应线性关系计算供试样品中 13 种核苷
的量。不同加工方法处理太子参核苷的量测定结果
见表 4。不同加工太子参样品核苷总量大小顺序为
S4＞S5＞S3＞S1＞S2；除 2′-脱氧胞苷的量晒干样
品（S1、S2）高于烘干样品（S3、S4、S5）外，其
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1-尿嘧啶 2-胞苷 3-次黄嘌呤 4-鸟嘌呤 5-尿苷 6-腺嘌呤 7-肌苷 8-鸟苷 9-胸苷 10-腺苷
11-2′-脱氧胞苷 12-2′-脱氧鸟苷 13-2′-脱氧肌苷
1-uracil 2-cytidine 3-hypoxanthine 4-guanine 5-uridine 6-adenine 7-inosine 8-guanosine
9-thymidine 10-adenosine 11-2′-deoxycytidine 12-2′-deoxyguanosine 13-2′-deoxyinosine

图 1 太子参中 13 种核苷提取离子的 MRM 图
Fig. 1 MRM of 13 nucleosides in Pseudostellariae Radix

表 3 精密度、重复性、稳定性和加样回收率试验结果 (n = 6)
Table 3 Precision, repeatability, stability, and recovery of 13 ingredients (n = 6)
RSD/% 加样回收率 RSD/% 加样回收率 化合物
精密度 重复性 稳定性 平均回收率/% RSD/%
化合物
精密度 重复性 稳定性 平均回收率/% RSD/%
尿嘧啶 2.64 2.07 1.97 101.67 2.65 鸟苷 0.53 0.31 0.25 97.79 0.44
胞苷 2.81 2.11 3.55 105.07 2.86 胸苷 0.58 0.37 0.70 99.19 0.58
次黄嘌呤 0.66 0.47 0.84 98.54 0.48 腺苷 3.36 3.17 4.16 96.46 2.69
鸟嘌呤 2.06 1.04 3.53 104.84 1.51 2′-脱氧胞苷 0.59 0.71 0.48 101.31 0.75
尿苷 1.26 1.93 1.43 104.76 0.90 2′-脱氧鸟苷 0.39 0.43 0.58 102.72 0.21
腺嘌呤 1.11 0.98 0.86 97.58 0.90 2′-脱氧肌苷 2.15 1.62 2.20 95.52 2.80
肌苷 0.54 0.81 0.51 99.10 0.66

余核苷的量均以烘干样品为高。
晒干法：晒干（S1）样品中次黄嘌呤、鸟嘌呤、
腺嘌呤、肌苷、2′-脱氧肌苷的量是晒-搓（S2）样品
的 2～6 倍；而晒-搓样品 2′-脱氧胞苷的量是晒干样
品的 8 倍；其余核苷的量差异不显著。
烘干法：不同烘干温度下尿嘧啶、胞苷、次黄
对照品
尿嘧啶
样品 对照品 样品
尿嘧啶 胞苷
胞苷
次黄嘌呤
次黄嘌呤
鸟嘌呤
鸟嘌呤
尿苷
尿苷 腺嘌呤
腺嘌呤
肌苷 鸟苷
鸟苷 肌苷
胸苷
腺苷
胸苷 腺苷
2′-脱氧胞苷
2′-脱氧胞苷 2′-脱氧鸟苷
2′-脱氧鸟苷
2′-脱氧肌苷 2′-脱氧肌苷
0 6 12 0 6 12
t/min
对照品 样品
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表 4 样品中 13 种核苷的质量分数 (n = 3)
Table 4 Contents of 13 nucleosides in different samples (n = 3)
质量分数/(μg·g−1) 编号
尿嘧啶 胞苷 次黄嘌呤 鸟嘌呤 尿苷 腺嘌呤 肌苷
S1 0.291 22.680 1.609 0.866 313.000 3.330 68.620
S2 0.294 28.240 0.563 0.499 300.200 0.950 23.580
S3 0.404 37.120 2.680 1.332 373.800 0.833 122.440
S4 0.370 25.220 3.782 1.751 379.000 0.748 195.000
S5 0.426 38.940 3.918 1.831 450.400 0.673 161.260
质量分数/(μg·g−1) 编号
鸟苷 胸苷 腺苷 2′-脱氧胞苷 2′-脱氧鸟苷 2′-脱氧肌苷 总量
S1 121.460 85.840 4.286 0.219 42.300 25.040 689.541
S2 111.440 87.720 4.308 1.790 43.680 4.118 607.382
S3 147.980 119.280 5.206 0.253 59.480 51.700 922.508
S4 136.640 148.940 4.790 0.428 54.680 107.620 1 058.969
S5 167.060 121.920 5.336 0.266 48.860 48.260 1 049.150

嘌呤、鸟嘌呤、尿苷、鸟苷、腺苷的量以 60 ℃（S5）
较高，腺嘌呤、2′-脱氧鸟苷的量以 40 ℃（S3）较
高，肌苷、胸苷、2′-脱氧胞苷、2′-脱氧肌苷的量以
50 ℃（S4）较高。不同温度间 2′-脱氧胞苷、2′-脱
氧肌苷的量差异明显，50 ℃下烘干样品的量约为
40、60 ℃下样品的 2 倍，其余核苷的量差异不明显。
3 讨论
从实验结果可以看出，以核苷为评价指标，不
同加工方法对太子参中 13 种核苷的量均有不同程
度的影响，13 种核苷的量烘干样品普遍高于晒干样
品。晒干温度相当于烘干温度 35 ℃左右，药材本
身含有的分解代谢物的相关酶不易失活，植物仍能
进行一些生理活动，不利于有效成分的保留。晒干
法是否搓去须根对核苷的量也有一定影响，小部分
核苷在除去须根后其量有所差异，其余核苷的量差
异不大；不同烘干温度样品核苷总量 40 ℃时最低，
较高温度可以将酶迅速灭活，减弱了药材的一些生
理活动[7]；50、60 ℃烘干的样品仅 2′-脱氧肌苷的
量差异较大。
综上，就核苷而言，烘干法优于晒干法，且以
50 ℃烘干为宜，但烘干法需要花费成本，目前太子
参产地加工仍以《中国药典》记载的除去须根后直
接晒干为主。太子参中核苷类成分与药效的相关性
以及加工对其他多指标成分的综合影响，还有待于
进一步研究。
本实验建立了Q-TRAP-LC-MS/MS技术同时测
定不同产地加工方法太子参中 13 种核苷类成分的
方法，探讨加工方法对太子参中核苷的影响，为优
选太子参适宜产地加工方法提供基础资料，同时为
太子参药材质量的综合评价提供新的方法参考。
参考文献
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