全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 2期 2014年 1月

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不同采收期小叶榕叶 HPLC 指纹图谱研究
黄 洋，邵慧凯，路 丽，赵丽芳，李 康*，刘盛权，谢淑桐，李建炫
广东药学院药科学院，广东 广州 510006
摘 要：目的 研究不同采收期小叶榕叶的 HPLC指纹图谱，为鉴定小叶榕药材提供依据，为确定其最佳采收期提供参考。
方法 以对羟基苯甲酸仲丁酯作为参照峰将指纹图谱分为高极性和低极性 2部分进行表达。Purospher® STAR C18色谱柱（250
mm×4.6 mm，5 μm），Guard色谱柱：XB-C18（Welch Materials，5 μm），流动相为 0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），采用
梯度洗脱；体积流量 1.0 mL/min；柱温 35 ℃；检测波长 270 nm（高极性部位）和 290 nm（低极性部位）。利用 HPLC法测
定不同采收期的 12个样品的色谱图谱。结果 小叶榕叶中所含成分的各色谱峰均得到了有效分离，在测定的 12批药材中，
共有 55个色谱峰，其中图谱显示有 44个峰为 12批样品所共有，确定为特征指纹峰，对其中 10个共有指纹峰进行了标记；
初步发现最佳采收期为秋冬季节。结论 该法建立的 HPLC 指纹图谱具有可靠性，可为进一步研究制定小叶榕叶的质量标
准提供依据。
关键词：小叶榕叶；高效液相色谱法；采收期；指纹图谱；羟基苯甲酸仲丁酯
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)02 - 0271 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.02.022
HPLC fingerprint for leaves of Ficus microcarpa in different harvest periods
HUANG Yang, SHAO Hui-kai, LU Li, ZHAO Li-fang, LI Kang, LIU Sheng-quan, XIE Shu-tong, LI Jian-xuan
School of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China
Abstract: Objective To study the HPLC fingerprint for the leaves of Ficus microcarpa collected in different harvest periods, and to
could provide the basis for the identification of F. microcarpa and the optimization of the best harvest periods. Methods The fingerprint
chromatogram could be divided into high polarity part and low polarity part by the peak No. 29, which was identified as reference peak of
sec-butyl-4-hydroxybenzoate. Analysis was performed on Purospher® STAR C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) and Guard Column
XB-C18 (5 μm, Welch Materials) with the the 0.2% phosphoric acid water solution (A)-acetonitrile (B) as mobile phase. The gradient
elution was carried out. The flow rate was 1.0 mL/min. The column temperature was 35 .℃ The monitoring wavelength of the high
polarity part and low polarity part was at 270 and 290 nm, respectively. The chromatograms of 12 batches of traditional Chinese medicinal
materials in different harvesrt periods were determined by HPLC, which existed a total of about 55 chromatographic peaks. Among them
there were 44 chromatographic peaks in common. The peaks were named as characteristic fingerprint peaks. Results The chemical
components contained in the leaves of F. microcarpa had been effectively separated. Ten common fingerprint peaks were labeled from the
44 common peaks. The optimal harvest periods were winter and autumn. Conclusion The established method has a good reliability,
which could provide the basis for the quality standard for further study on the leaves of F. microcarpa.
Key words: leaves of Ficus microcarpa; HPLC; harvest period; fingerprint chromatogram; sec-butyl-4-hydroxybenzoate

小叶榕叶，来源于桑科榕属植物榕树 Ficus
microcarpa L. f. 的叶[1]，为民间常用中药，味淡、
性凉。小叶榕叶具有抗炎、杀菌、镇痛和止咳平喘
等作用[2]，临床上常将其干浸膏用于咳嗽、哮喘等
多种疾病的治疗[3]。由于不同产地、不同采收期的
小叶榕叶中的成分有一定的变化，从而影响到用药
的疗效[4]，因此需对小叶榕叶的化学成分进行全面
地评价，以保证用药安全及疗效的稳定性。近些年，
指纹图谱技术得到广泛应用[5-8]，本研究采用 HPLC
法建立了小叶榕叶的HPLC指纹图谱，得到能够标示
其特性的共有色谱峰图谱，为小叶榕叶药材的采收及
其内在质量的均一性提供全面的质量控制依据。

收稿日期：2013-09-03
基金项目：教育部留学回国人员科研启动基金（[2011]1139）；国家自然科学基金青年基金资助项目（30801515）
作者简介：黄 洋（1987—），男，硕士研究生，研究方向为中药药效物质基础及其质量评价方法研究。E-mail: hy1987615@163.com
*通信作者 李 康，男，教授，研究方向为中药药效物质基础及其质量评价方法研究。E-mail: likang229@aliyun.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 2期 2014年 1月

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1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪，包括 G1322A在
线真空脱气装置、G1311A四元泵、G1314B检测器、
Agilent 化学色谱工作站（美国安捷伦科技有限公
司）、中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A（国
家药典委员会）；HH—S 型恒温水浴锅（巩义市予
华仪器有限公司）、离心机（Thermo Electron
Corporation）、AUW220D 型十万分之一电子天平
（日本岛津公司）、涡旋混合器（天津药典标准仪器
厂制造）、电热套（海宁市新华医疗器械厂）、旋转
蒸发器（巩义市英峪高科仪器厂）。水为超纯水；甲
醇、乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯。
1.2 药材
小叶榕新鲜叶子采自广州大学城穗石村，经广东
药学院中药学院生药学教研室刘基柱教授鉴定为桑
科榕属植物榕树 Ficus microcarpa L. f. 的叶，从 2012
年 1～12月，每月采收 1批小试样品，标号为 S1～S12。
1.3 对照品
苯甲酸、对羟基苯丙酸、紫丁香酸、对羟基苯
乙酸、水杨酸、3, 5-二甲氧基-4-羟基-苯乙酮（乙酰
丁香酚，acetosyringone）、3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲
酸（丁香酸，syringic acid）、邻羟基苯丙酸、十五烷
酸、2-羟基-3-甲基丁酸、对羟基苯甲酸仲丁酯均为
本课题组从小叶榕叶水提物中分离得到，并经 IR、
NMR等技术鉴定其结构，质量分数均大于 99.0%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
由于小叶榕叶水提物化学成分复杂，在一张图
谱上很难将所有的化学信息全部展示出来，故本实
验以对羟基苯甲酸仲丁酯为分界点将指纹图谱分为
高极性和低极性 2部分进行表达。
2.1.1 高极性指纹图谱色谱条件 Purospher®
STAR C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Guard
色谱柱：XB-C18（Welch Materials，5 μm），流动相
为 0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱 0～
20 min，95% B；20～30 min，95%～93% B；30～
70 min，93% B；70～100 min，93%～90% B；100～
110 min，90%～95% B。体积流量 1.0 mL/min，检
测波长 270 nm；柱温 35 ℃；进样量 20 μL。
2.1.2 低极性指纹图谱色谱条件 Purospher®
STAR C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Guard
色谱柱：XB-C18（Welch Materials，5 μm），流动相
为 0.2%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱：0～
10 min，25% B；10～18 min，25%～30% B；18～
25 min，30%～50% B；25～40 min，50%～90% B；
40～50 min，90%～25% B；体积流量 1.0 mL/min；
检测波长 290 nm；柱温 35 ℃；进样量 20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取苯甲酸 3.1 mg、对羟基苯丙酸 2.2 mg、
3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸 2.1 mg、对羟基苯乙酸
2.2 mg、水杨酸 1.9 mg、3, 5-二甲氧基-4-羟基-苯乙
酮 2.5 mg、邻羟基苯丙酸 3.4 mg、十五烷酸 2.3 mg、
2-羟基-3-甲基丁酸 2.4 mg、对羟基苯甲酸仲丁酯 2.0
mg。用甲醇溶解后，各定容至 2 mL。用 0.22 μm微
孔滤膜滤过后，取续滤液即得。
2.3 供试品溶液的制备
取阴干后小叶榕叶约 100 g，剪碎后，用水提取，
液料比 20∶1，回流提取 3次，每次 2 h，浓缩至适当
的相对密度后，静置冷却。按部颁标准用 95%乙醇醇
沉至含醇量为 80%～85%，慢加快搅，静置 24 h，抽
滤，回收乙醇。加水形成悬浮液定容至 50 mL，即母
液浓度相当于生药量 2 g/mL，取母液 1 mL，加石油醚
3 mL，涡旋 30 s，连续萃取 3次，弃去上清液，后加
醋酸乙酯萃取3次，取有机相，自然挥干，定容至1 mL。
用 0. 22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取同一批小叶榕叶样品，按“2.3”
项下方法进行制备，连续进样 5次，检测指纹图谱。
结果各主要共有峰相对峰面积的 RSD 在 0.054%～
2.45%，相对保留时间的RSD在 0.018%～0.16%，表
明仪器精密度良好，共有峰的相对保留时间和峰面积
比值的 RSD均符合指纹图谱检测要求[7]。
2.4.2 重复性试验 取同一批小叶榕叶样品 5份，
按“2.3”项下方法进行制备，检测指纹图谱，结果
各主要共有峰相对峰面积的 RSD在 0.8%～2.7%，
相对保留时间的 RSD在 0.04%～0.44%，表明方法
重复性较好，共有峰的相对保留时间和峰面积比值
的 RSD均符合指纹图谱检测要求[7]。
2.4.3 稳定性试验 取同一批小叶榕叶样品，按
“2.3”项下方法进行制备，分别在 0、2、4、8、12、
24 h检测指纹图谱。结果各主要共有峰相对峰面积
的 RSD在 0.2%～2.97%，相对保留时间的 RSD在
0.09%～0.29%，供试品溶液在 24 h内稳定性良好，
表明共有峰的相对保留时间和峰面积比值的 RSD
均符合指纹图谱检测要求[7]。
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2.5 不同采收期小叶榕叶 HPLC 指纹图谱的建立
取不同采收期的12批小叶榕叶药材，按照“2.3”
项下方法制备供试品溶液，记录色谱图，并利用中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A（国家药典
委员会）对 12批样品的图谱数据进行分析、比较，
采用均值法，以 12批样品的图谱生成对照图谱，结
果见图 1 和图 2。以对照图谱为基准，对图谱间的
相似度进行评价，见表 1。
2.6 不同采收期各化学成分量的变化
以 12个月份的各样品共有峰的总峰面积作图，
见图 3，比较数据结果可以看出，一年内各成分量
较为稳定。但是各样品共有峰面积又有所不同。通
过比较可以看出，小叶榕叶秋冬季节成分总量较高，
可作为最适采收期参考。
2.7 指纹图谱及技术参数
2.7.1 共有峰的标定及部分共有峰的标识 按照
“2.3”项下方法制备供试品溶液，记录色谱图，对
其 HPLC 指纹图谱做初步考察，以 29 号峰对羟基
苯甲酸仲丁酯作为参照峰将指纹图谱分为高极性和
低极性两部分进行表达，初步确定了 44个分离度较
好且峰面积稳定的峰为共有峰。取各对照品溶液 20
μL，分别注入高效液相色谱仪，其色谱图见图 4～7。
结果确认了以下 10 个共有峰：苯甲酸、对羟基苯丙
酸、3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸、对羟基苯乙酸、水
杨酸、3, 5二甲氧基-4-羟基-苯乙酮、邻羟基苯丙酸、
十五烷酸、2-羟基-3-甲基丁酸、对羟基苯甲酸仲丁酯。
2.7.2 10 个化学成分在不同采收期的峰面积 小
叶榕叶中各成分峰面积随着采收期的不同而不同，
故对 10个已鉴定出的化学成分进行追踪，判断出一

图 1 不同采收期小叶榕叶高极性部位 HPLC 色谱图
Fig. 1 Chromatogram of high polarity part for leaves of F.
microcarpa from different harvest periods

图 2 不同采收期小叶榕叶低极性部位 HPLC 色谱图
Fig. 2 HPLC of low polarity part for leaves of F.
microcarpa from different harvest periods
表 1 12 批不同采收期小叶榕叶的相似度评价结果
Table 1 Similarity evaluation on 12 batches of leaves
of F. microcarpa from different harvest periods
月份 相似度 月份 相似度
1 0.714 7 0.893
2 0.782 8 0.982
3 0.966 9 0.930
4 0.975 10 0.925
5 0.982 11 0.958
6 0.990 12 0.981


图 3 不同采收期各共有峰总峰面积的变化
Fig. 3 Changes of total peak area of each common peak of
leaves of F. microcarpa from different harvest periods
年中这些化学成分的递变规律，为小叶榕药材的质
量控制提供更多的化学信息参考，其结果见表 2。
3 讨论
在本实验条件下，大多数色谱峰都得到了较好地
分离，12批样品中 29号峰（4-羟基苯甲酸仲丁酯）

S12
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 6.52 13.04 19.57 26.09 32.61 39.13 45.65
t / min

S12
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 6.52 13.04 19.57 26.09 32.61 39.13 45.65
t / min
25 000
20 000
15 000
10 000
5 000
0
总
峰
面
积

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
月份
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图 4 高极性部分样品色谱图
Fig. 4 Chromatogram of high polarity part samples

12-邻羟基苯丙酸 14-对羟基苯乙酸 19-3, 5-二甲氧基-4-羟基苯
甲酸 21-对羟基苯丙酸 27-苯甲酸 29-对羟基苯甲酸仲丁酯
12-3-(2-hydroxyphenyl) propanoic acid 14-4-hydroxyphenylacetic acid
19-syringic acid 21-p-hydroxybenzene propanoic acid 27-benzoic
acid 29-sec-butyl-4-hydroxybenzoate
图 5 高极性部分部分共有峰的标识色谱图
Fig. 5 Identification of common peaks from high polarity part

图 6 低极性部分样品色谱图
Fig. 6 Chromatogram of low polarity part samples

27-苯甲酸 29-4 羟基苯甲酸仲丁酯 30-3, 5 二甲氧基-4-羟基-苯
乙酮 34-水杨酸 39-十五烷酸 44-2-羟基-3-甲基丁酸
27-benzoic acid 29-sec-butyl-4-hydr oxybenzoate
30-salicylic acid 34-acetosyringone 39-pentadecylic acid
44-2-hydroxy-3-methylbutyric acid
图 7 低极性部分部分共有峰的标识色谱图
Fig. 7 Identification of common peaks from low polarity part
表 2 10 个化学成分在不同采收期的峰面积
Table 2 Peak areas of 10 chemical constituents in leaves of F. microcarpa from different harvest periods
峰面积
月份
12号峰 14号峰 19号峰 21号峰 27号峰 29号峰 30号峰 34号峰 39号峰 44号峰
1 1 513.7 1 022.4 191.8 71.5 214.2 57.5 76.7 423.0 4.0 342.0
2 2 484.2 88.8 109.3 383.1 135.0 251.8 280.1 213.0 12.1 365.5
3 5 350.1 142.2 279.4 360.0 260.9 123.0 348.2 92.0 20.2 338.8
4 5 235.7 283.1 306.0 358.5 262.0 561.6 454.9 85.2 35.3 330.3
5 3 942.7 150.0 272.6 151.5 167.7 697.4 309.8 86.4 18.2 331.5
6 2 218.0 149.9 137.8 156.7 175.4 320.1 288.4 51.6 23.3 368.1
7 3 070.5 260.6 222.0 319.3 192.2 1 607.6 345.0 78.0 32.6 348.6
8 3 822.4 195.0 342.9 195.4 270.8 914.5 414.7 98.1 22.2 343.0
9 2 084.5 252.5 193.0 279.7 253.8 566.1 326.3 78.8 20.2 351.9
10 2 314.5 300.7 589.8 182.6 535.9 637.1 364.7 30.2 6.4 364.0
11 7 509.9 288.6 440.1 387.8 555.1 95.9 376.1 91.5 56.4 329.9
12 5 044.4 355.6 357.5 320.9 397.8 173.8 460.5 111.3 41.8 329.7

0 20 40 60 80 100
t / min
1
2
3
4
5 6 7
8
9
10
11
12
13 14 15
16 17
18
19
20 21
22
23
24
25
26
2728
29

0 20 40 60 80 100
12
14
19
21
27
29
t / min

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
30
29
31
322733 34
35
36 37 38
39
40 41 42
43 44
t / min

30
29
27 34
39
44
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t / min
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量较为稳定，与其他峰分离度较好，且出峰时间适
中，适合作为参照峰。本实验方法重复性好，可信
度高，可用于小叶榕叶的质量控制，与前人研究报
道[4,10]相比分离更加细致，得到 44个共有峰，结果
符合能够全面反映该中药整体化学特征，体现其内
在的整体质量，而这无疑对小叶榕叶指纹图谱的研
究具有一定参考。此外，通过考察 1年当中各个时
期小叶榕叶中共有峰成分的总量，结果发现，不同
采收期对该药材化学成分的质量分数影响较大，秋
冬季节采收最佳。
根据初步研究，共有峰的总面积约占总峰面积
95%左右，非共有峰面积占总峰面积的量小于 10%，
该结果符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
（暂行）》标准。此外，采用均值法生成对照图谱，
通过相似度软件评价发现，有 9批样品的相似度均
大于 0.9，另外 3批样品相似度位于 0.7～0.9，说明
小叶榕叶药材由于采收期的不同，其所含成分及质
量分数虽然相对稳定，但还是存在一定的差异。文
献报道小叶榕叶水提物中主要含黄酮类、三萜类、
鞣质和酸性树脂等成分[11]，通过采用传统的硅胶柱
色谱手段对小叶榕叶水提物中的化学成分进行分离
鉴定，得到 10个单体化学成分，结果发现其量较大
的多为有机酸、酯类，未见黄酮类成分，故后期有
待进一步分离研究。通过对小叶榕叶 HPLC指纹图
谱研究，初步完成了对其水提物指纹图谱的条件摸
索和 10个共有峰的标定。为小叶榕叶的采收、生产
及用药过程中的质量控制提供了科学依据。
本实验采用二极管阵列检测器，通过对 200～
360 nm 吸收与分离效果的考查，也是为了兼顾其
他峰的吸收和反映药材化学成分的全貌，分别对前
半部分指纹图谱和后半部分指纹图谱进行波长选
择，结果以高、低极性部位吸收波长分别为 270 nm
和 290 nm时最佳。此外，由于小叶榕中有机酸成
分较多，在流动相系统的选择中，分别以乙腈-0.1%
磷酸、乙腈-0.2%磷酸、乙腈-水-冰醋酸、甲醇-0.2%
磷酸、乙腈-甲醇-0.2%磷酸等不同体积分数、不同
比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱实验。结果
表明，用乙腈-0.2%磷酸进行梯度洗脱为佳，此条
件下各峰的保留时间适中，基线较平稳，有利于指
纹图谱的分析。
本研究方法建立的 HPLC指纹图谱可快速鉴别
小叶榕叶药材及其最佳的采收期，通过指纹图谱对
小叶榕叶药材进行综合宏观分析，有利于全面控制
药材质量，促进小叶榕叶药材及其相关制剂研制水
平和质量控制的全面提高。
参考文献
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