全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 6 期 2015 年 3 月

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银杏叶的指纹图谱建立及质量评价研究
丁银花 1, 3，孙永成 2, 3，王振中 2, 3，毕宇安 2, 3，万 琴 2, 3，徐连明 2, 3，萧 伟 2, 3*
1. 北京中医药大学，北京 100020
2. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
3. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 比较不同产地、树龄、采收期银杏 Ginkgo biloba 叶的质量，固定欣脉胶囊处方中银杏叶的来源产地。方法 建
立银杏叶的 HPLC 指纹图谱测定方法，对不同产地、树龄、采收期银杏叶的指纹图谱进行测定，并测定不同产地、树龄、
采收期银杏叶总黄酮醇苷和总萜内酯的量，对各批次银杏叶主要成分的量及指纹图谱进行对比分析。结果 不同产地、树龄、
采收期的银杏叶总黄酮醇苷、萜类内酯量以及指纹图谱均不同。结论 所建立的指纹图谱测定方法为银杏叶的合理采收及质
量评价提供了科学依据；江苏邳州、2～3 年树龄、6～8 月份采集的银杏叶质量较佳，可以作为欣脉胶囊处方中银杏叶的固
定来源产地。
关键词：银杏叶；高效液相色谱法；总黄酮醇苷；总萜内酯；定量测定；指纹图谱
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)06 - 0901 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.06.022
Establishment of fingerprint of Ginkgo biloba leaves and study on its quality
evaluation
DING Yin-hua1, 3, SUN Yong-cheng2, 3, WANG Zhen-zhong2, 3, BI Yu-an2, 3, WAN Qin2, 3, XU Lian-ming2, 3,
XIAO Wei2, 3
1. Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100020, China
2. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
3. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001, China
Abstract: Objective To compare the quality Ginkgo biloba L. leaves collected form various habitats, different tree ages, and different
harvesting times and to confirm the source of G. biloba leave used in Xin Mai Capsule. Methods To establish the HPLC fingerprint of
G. biloba leaves to determine the fingerprint and content of total flavonol glucoside and terpene lactones in G. biloba leaves collected
from various habitats, different tree ages, and different harvesting time, and then to analyze the results. Results The contents of total
flavonol glucoside and terpene lactones and fingerprint similarity in G. biloba leaves from various regions, different tree ages, and
collecting times were different. Conclusion The fingerprint control method has provided the scientific basis for the reasonable
collection and quality evaluation of G. biloba leaves. The G. biloba leaves in June to August, 2—3 year-old from Pizhou, Jiangsu
province are better, which could be considered as the source of G. biloba leaves used in Xin Mai Capsule.
Key words: Ginkgo biloba leaves; HPLC; total flavonol glucoside; terpene lactones; quality determination; fingerprint

银杏叶药材为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.
的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。具有活
血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂的功效[1]。
银杏叶中的主要有效化学成分为黄酮类成分和萜类
内酯成分[2-5]。现代药理研究表明，银杏黄酮和萜类
内酯均具有改善心血管系统、调血脂、抗氧化、抗
衰老等作用[6-7]。
欣脉胶囊是江苏康缘药业股份有限公司正在研

收稿日期：2014-10-11
基金项目：江苏省科技成果转化项目（BA2012020）；创新中药中试放大研究技术平台
作者简介：丁银花（1988—），女，硕士在读，研究方向为中药生药学。Tel: 15150991528 E-mail: dingyinhua0113@163.com
*通信作者 萧 伟，男，研究员级高级工程师，博士，研究方向为中药新药的研究与开发。
Tel: (0518)81152337/13905136437 E-mail: wzhzh-nj@163.net
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 6 期 2015 年 3 月

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发的中药 6 类新药，由山楂、银杏叶等 5 味中药
组成。银杏叶作为欣脉胶囊处方中的主要药材，
其药材的来源产地对于产品的质量至关重要。本
实验利用 HPLC 建立了银杏叶指纹图谱的测定方
法，分别对不同产地、树龄、采集期的银杏叶的
指纹图谱以及总黄酮醇苷、萜类内酯的量进行了
测定，并通过聚类分析，固定了欣脉胶囊处方中
银杏叶的主要来源产地，同时也为银杏叶质量的
全面评价提供依据。
1 仪器与材料
Agilent 1200-UV 高效液相色谱仪（美国安捷伦
公司），Agilent 1200-ELSD 高效液相色谱仪（美国
安捷伦公司），SetraBL-410S 型电子分析天平、
BP211D 型电子分析天平 [梅特勒-托利多仪器（上
海）有限公司]，直立粉碎机（北京环亚天元机械技
术有限公司）。
芦丁（批号 100081-200907）、槲皮素（批号
100080-200707）、山柰素（批号 100861-201209）、
异鼠李素（批号 100860-200608）、银杏叶内酯 A（批
号 110862-201310 ）、 银 杏 叶 内 酯 B （ 批 号
110863-201209 ）、 银 杏 叶 内 酯 C （ 批 号
110865-200605）、白果内酯（批号 110862-201009）
对照品均购自中国食品药品检定研究院。
乙腈（上海星可生化有限公司）、甲醇（美国天
地有限公司）、四氢呋喃（美国天地有限公司）均为
色谱纯，甲醇、石油醚（60～90 ℃）、磷酸、甲酸、
盐酸、三氯甲烷（南京化学试剂有限公司）均为分
析纯，水为超纯水。
银杏叶来自 10 个产地，共 34 批，经江苏康缘
药业股份有限公司执业药师吴舟鉴定均为银杏科植
物银杏 Ginkgo biloba L. 的干燥叶。各药材样品的
来源信息见表 1。
表 1 药材来源信息
Table 1 Sources of G. biloba leaves
编号 来源 树龄 采收时间 编号 来源 树龄 采收时间
S1 江苏邳州 2～3 年 2013-04 S17 河北安国 2～3 年 2013-06
S2 江苏邳州 2～3 年 2013-05 S18 河北安国 2～3 年 2013-06
S3 江苏邳州 2～3 年 2013-06 S19 安徽亳州 2～3 年 2013-06
S4 江苏邳州 2～3 年 2013-07 S20 安徽亳州 2～3 年 2013-06
S5 江苏邳州 2～3 年 2013-08 S21 安徽亳州 2～3 年 2013-06
S6 江苏邳州 2～3 年 2013-09 S22 浙江宁波 2～3 年 2013-06
S7 江苏邳州 2～3 年 2013-10 S23 浙江杭州 2～3 年 2013-06
S8 四川北川 2～3 年 2013-06 S24 广西玉林 2～3 年 2013-06
S9 四川北川 4～5 年 2013-06 S25 广西玉林 2～3 年 2013-06
S10 四川北川 5～6 年 2013-06 S26 广西玉林 2～3 年 2013-06
S11 四川北川 6～7 年 2013-06 S27 重庆 2～3 年 2013-06
S12 四川北川 8～9 年 2013-06 S28 重庆 2～3 年 2013-06
S13 湖北安陆 2～3 年 2013-06 S29 甘肃合水 2～3 年 2013-06
S14 湖北安陆 2～3 年 2013-06 S30 甘肃合水 2～3 年 2013-06
S15 湖北安陆 2～3 年 2013-06 S31 山东焱城 2～3 年 2013-06
S16 河北安国 2～3 年 2013-06 S32 山东焱城 2～3 年 2013-06
S17 河北安国 2～3 年 2013-06 S33 山东焱城 2～3 年 2013-06
S18 河北安国 2～3 年 2013-06 S34 山东焱城 2～3 年 2013-06

2 方法与结果
2.1 色谱条件
经过一系列色谱条件的选择和优化，最终采用
Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色
谱柱；流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），
梯度洗脱条件见表 2；柱温为 30 ℃；进样量 10.0 μL；
检测波长 360 nm。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，加
甲醇制成含 200 μg/mL 芦丁的对照品溶液，即得。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 6 期 2015 年 3 月

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表 2 梯度洗脱比例
Table 2 Proportion of gradient elution
保留时间/min A/% B/%
0 12 88
20 19 81
35 22 78
40 25 75
50 30 70
85 80 20

2.2.2 供试品溶液的制备 取银杏叶粉末（过 80
目筛）约 2.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加氯
仿加热回流提取 2 h，弃去氯仿液，药渣挥干，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，超声提取 40 min
（功率 250 kW，频率 40 kHz），滤过，滤液蒸干，
转移至 20 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，即得。
2.3 方法学试验
2.3.1 精密度试验 取同一份供试品溶液，连续进
样 6 次，以芦丁为参照峰，考察各主要色谱峰相对
保留时间及峰面积的一致性，结果表明，各主要色
谱峰的相对保留时间 RSD 小于 1.3%，相对峰面积
RSD 小于 2.0%，表明精密度良好。
2.3.2 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别在
0、8、16、24、30、36 h 进样，以芦丁为参照峰，
考察各主要色谱峰相对保留时间及峰面积的一致
性，结果表明，各主要色谱峰的相对保留时间 RSD
小于 1.8%，相对峰面积 RSD 小于 2.2%，表明供试
品溶液至少在 36 h 内稳定。
2.3.3 重复性试验 取同一批银杏叶粉末，按上述
“2.2.2”项制备 6 份样品，分别进样，以芦丁为参照
峰，考察各主要色谱峰相对保留时间及峰面积的一
致性，结果表明，各色谱峰的相对保留时间 RSD 小
于 2.1%，相对峰面积 RSD 小于 2.4%。
2.4 结果与分析
2.4.1 指纹图谱共有峰的标定 根据 34 批银杏叶
的 HPLC 图，标定了 28 个色谱峰作为银杏叶的
HPLC 指纹图谱的共有峰，28 个共有峰的面积之和
占总峰面积和 90%以上，符合指纹图谱的技术要求，
见图 1。
2.4.2 样品测定结果 将各批次银杏叶按上述
HPLC 指纹图谱方法测定，采用国家药典会公布的
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 A 版”软件计
算相似度，见图 2；并依照《中国药典》2010 年版
一部中银杏叶项下测定方法测定总黄酮醇苷、萜类
内酯的量，结果见表 3。

7(S)-芦丁
7(S)- rutin
图 1 银杏叶共有峰 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of common peak of G. biloba leaves

图 2 银杏叶 HPLC 指纹图谱
Fig. 2 HPLC fingerprint of G. biloba leaves
2.4.3 产地与银杏叶质量的关系 利用SPSS 16.0版
本软件对以上同一树龄同一采收期分别采自 10 个产
地的银杏叶（编号 S3、S8、S13、S16、S19、S22、
S24、S27、S29、S34）进行聚类分析，以总黄酮醇
苷、萜类内酯的质量分数为变量。结果见图 3。
由图 3 可见，当分类距离为 10 时，可将 10 个
产地的银杏叶分为 3 类，江苏产地的银杏叶聚为第
一类，且为质量分数较高的一类；四川、山东、湖
北、重庆产地的银杏叶聚为第 2 类；其余 5 个产地
的银杏叶为第 3 类。
2.4.4 树龄与银杏叶质量的关系 对四川北川 6 月
份采收的银杏叶（S8～S12）测定结果进行分析，
比较不同树龄银杏叶的主要成分量及指纹图谱相似
度，结果见图 4。
由图 4 可知，随着树龄的增加，银杏叶中的总黄
酮醇苷和萜类内酯的量整体呈下降趋势，以 2～3 年
树龄的银杏叶质量为佳，此结果与钱大玮等[8]的研究
结果基本相一致。此外通过表 3 可知，不同树龄银杏
叶的指纹图谱相似度为 0.84～0.97，变化较大，可知
树龄对银杏叶的化学成分组成和比例有一定的影响。

1
2～ 6
7(S)
8 9
101112
13
14
15
16～21
22
23
24
25
26
27
28
10 20 30 40 50 60 70 80 90
t/min
对照
S34













S1
0 13.04 26.08 39.12 52.17 65.21 78.25 90.29
t/min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 6 期 2015 年 3 月

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表 3 各银杏叶样品总黄酮醇苷、萜类内酯量和相似度测定结果
Table 3 Determination of total flavonol glucoside, terpene lactones, and fingerprint similarity in G. biloba leaves
编号 总黄酮醇苷/% 萜类内酯/% 相似度 编号 总黄酮醇苷/% 萜类内酯/% 相似度
S1 0.338 0.147 0.718 S17 0.440 0.313 0.809
S2 0.984 0.239 0.821 S18 0.520 0.230 0.767
S3 0.980 0.541 0.961 S19 0.479 0.315 0.727
S4 0.913 0.696 0.927 S20 0.330 0.215 0.745
S5 0.799 0.745 0.909 S21 0.451 0.219 0.692
S6 0.510 0.757 0.797 S22 0.482 0.278 0.812
S7 0.400 0.263 0.698 S23 0.492 0.268 0.791
S8 0.892 0.487 0.955 S24 0.260 0.309 0.932
S9 0.710 0.490 0.974 S25 0.360 0.264 0.941
S10 0.575 0.325 0.839 S26 0.290 0.329 0.893
S11 0.510 0.308 0.867 S27 0.602 0.392 0.797
S12 0.460 0.278 0.883 S28 0.682 0.379 0.819
S13 0.842 0.474 0.937 S29 0.402 0.129 0.696
S14 0.702 0.364 0.912 S30 0.412 0.269 0.657
S15 0.592 0.344 0.933 S31 1.040 0.534 0.905
S16 0.410 0.333 0.779 S32 1.053 0.479 0.897
S17 0.440 0.313 0.809 S33 0.693 0.387 0.944
S18 0.520 0.230 0.767 S34 0.574 0.493 0.912


图 3 10 个产地银杏叶聚类分析树状图
Fig. 3 Dendrogram of cluster analysis on G. biloba leaves
from 10 habitats
2.4.5 采收期与银杏叶质量的关系 对江苏邳州
2～3 年生的银杏叶（编号 S1～S7）测定结果进行
分析，比较不同采收期银杏叶的主要成分含量及指
纹图谱相似度，结果见图 5。
由图 5 可知，不同采收时期银杏叶成分量变
化较大，总黄酮醇苷量在 5 月份达到了最高峰，
而银杏叶萜类内酯在 8～9 月份量较高。由表 3 中不
同采收期银杏叶的指纹图谱相似度可以看出，6～8
月份银杏叶的指纹图谱相似度变化范围较小，均大

图 4 不同树龄银杏叶总黄酮醇苷、萜类内酯量变化
Fig. 4 Variation of total flavonol glucoside and terpene
lactones in G. biloba leaves at different tree ages
于 0.90，表明 6～8 月份银杏叶的化学成分组成和比
例较一致，质量稳定。综合比较可知，6～8 月份采
收的银杏叶主要成分量较高，质量也较稳定。
3 讨论
不同产地、树龄、采收期银杏叶的指纹图谱相
似度变化较大，表明产地、树龄、采收期对银杏叶
的化学成分均有影响。通过上述结果分析，可以得
出结论，江苏邳州、2～3 年树龄、6～8 月份采集的
银杏叶质量尚佳，可以考虑作为作为欣脉胶囊处方
S16
S29
S22
S19
S24
S8
S34
S13
S27
S3
总黄酮醇苷
萜类内酯
2～3 4～5 5～6 6～7 8～9
0.9

0.7

0.5

0.3
质
量
分
数
/%

0 5 10 15 20 25
树龄/年
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 6 期 2015 年 3 月

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图 5 不同采收期银杏叶总黄酮醇苷、萜类内酯量变化
Fig. 5 Variation of total flavonol glucoside and terpene lactones
in G. biloba leaves at different harvesting times
银杏叶药材的固定来源产地。
此外，本实验为控制银杏叶内在质量所建立的
指纹图谱测定方法，为银杏叶的合理采收及质量评
价提供了科学依据。
参考文献
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季节中总黄酮和总内酯的含量变化 [J]. 中草药, 2002,
33(11): 1025-1026.


4 月 5 月 6 月 7 月 8 月 9 月 10 月
总黄酮醇苷
萜类内酯
采收期
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
质
量
分
数
/%