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Quality evaluation of rust rot red ginseng and injured red gingseng

锈腐病和受伤原料参对红参品质的影响研究



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

• 1042 •
锈腐病和受伤原料参对红参品质的影响研究
朱丽娟 1,叶正良 2*,郭巧生 1*,路政民 3
1. 南京农业大学中药材研究所,江苏 南京 210095
2. 天津天士力之骄药业有限公司,天津 300402
3. 集安人参研究所,吉林 集安 134200
摘 要:目的 比较锈腐病鲜参、受伤鲜参与正常鲜参加工而成的红参品质,为人参加工利用提供依据。方法 测定锈腐病
鲜参、受伤鲜参和正常鲜参加工而成的红参中 10 种人参皂苷、总灰分、酸不溶性灰分、挥发性醚浸出物和总蛋白、糖类成
分的量。结果 锈腐病鲜参、受伤鲜参加工而成的红参中的总灰分、酸不溶性灰分、挥发性醚浸出物、蔗糖量都显著高于正
常鲜参加工而成的红参,而 10 种人参皂苷量均显著低于正常鲜参加工而成的红参。结论 锈腐病、受伤原料参对其加工后
红参质量有显著影响。
关键词:红参;锈腐病;受伤鲜参;品质;人参皂苷;蔗糖;麦芽糖
中图分类号:R286.01 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2015)07 - 1042 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.07.019
Quality evaluation of rust rot red ginseng and injured red gingseng
ZHU Li-juan1, YE Zheng-liang2, GUO Qiao-sheng1, LU Zheng-min3
1. Institute of Chinese Medicinal Materials, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China
2. Tianjin Tasly Pride Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 300402, China
3. Ji’an Ginseng Research Institute, Ji’an 134200, China
Abstract: Objective To compare the quality of rust rot red ginseng and injured red ginseng, and thus provide the basis for ginseng
cultivation and processing. Methods Based on Chinese Pharmacopoeia and literature related to red ginseng, ten ginsenosides, total
ash, acid-insoluble ash, ether extract, carbohydrate, and total protein of red ginseng in different transplanting systems were studied or
determined. Results The contents of total ash, acid-insoluble ash, volatile ether extract, and sucrose in rust rot red ginseng are
significantly higher than those in normal red ginseng. The contents of ginsenoside Rg1, Rb1, Rc, Rb2, Re, Rf, Rb3, Rd, Rg2, and Rg3 in
rust rot red ginseng and injured red gingseng are significantly lower than those in normal red ginseng. Conclusion The raw materials
of rust rot red ginseng and injured red ginseng have a significant effect on the quality of the processed red ginseng.
Key words: red ginseng; rust rot; injured red ginseng; quality; ginsenoside; sucrose; maltose

红参为五加科植物人参 Panax ginseng C. A.
Mey. 的栽培品经蒸制干燥加工而成。具有大补元
气、复脉固脱、益气摄血等功效[1]。人参在栽培过
程中,锈腐病是最普遍、危害最大的病害之一[2],不
仅降低人参的产量,还会影响参根的品质。白容霖
等[3]研究发现,锈腐病参根体内的总皂苷、粗淀粉、
总糖量减少,而木质素、脂肪酸和还原糖量增加。
人参移栽和采挖时,由于人为原因会造成参根受伤
而形成烂疤。受伤后的人参品质会受到严重影响,
参场同时会受到严重经济损失。红参是人参重要的
加工品之一,其原料鲜参质量对红参品质具有重要
影响。本实验以锈腐病鲜参和受伤鲜参为原料进行
红参加工,比较研究锈腐病鲜参、受伤鲜参与正常
鲜参加工而成的红参的内在质量,为红参科学化、
规范化加工提供理论依据。
1 材料与仪器
1.1 材料
人参为 6 年生鲜人参,采自吉林省长白县,经

收稿日期:2014-10-16
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项(2010ZX09502-004)
*通信作者 郭巧生 Tel: (025)84395980 E-mail: gqs@njau.edu.cn
叶正良 Tel: (022)86342066 E-mail: yezl@tasly.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

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南京农业大学郭巧生教授鉴定为人参 Panax
ginseng C. A. Mey.。锈腐病鲜参(参体有明显的红
褐色病变)、受伤鲜参(参体有明显的烂疤,无红褐
色病变)及正常鲜参(参体无红褐色病变,无烂疤)
均于 2011 年 9 月 25 日采自东北泥粒河参场,栽培
类型为二马牙类型。
人参皂苷 Rg1(批号 110703-200726)、Re(批
号 110754-200822)、Rf(批号 111719-200703)、
Rb3(批号 111686-200501)、Rg3(批号 110804-
200402)、Rb1(批号 110704-200420),Rb2(批号
111715-200501)、Rg2(批号 111779-200801)对照
品购自中国食品药品检定研究院;人参皂苷 Rd、
Rc 对照品购自南京泽朗医药科技有限公司,质量分
数均大于 98%;蔗糖(批号 111507-200302)、麦芽
糖(批号 100287-200701)购自中国食品药品检定
研究院。
1.2 仪器
高效液相色谱仪(Waters 2695);紫外检测器
(2489);Dismonsil C18 色谱柱(200 mm×4.6 mm,
5 μm);4001 型旋转蒸发仪(Heidolph 公司);紫外
可见光分光光度计(Hach DR 5000)。
2 方法
2.1 红参加工
采用多指标正交试验法[4]优选的红参加工方
法,将鲜人参洗净下须后,按正常鲜参、锈腐病
鲜参、受伤鲜参分批放在蒸架上,缓缓加热,在
加热蒸制 3.5 h 后,再小火加热 30 min。取出样品,
65 ℃烘 10 h 取出样品,然后在 50 ℃下烘至完
全干。
2.2 灰分和挥发性醚浸出物的测定[1]
按照《中国药典》2010 年版一部附录的方法进
行测定。
2.3 蔗糖和麦芽糖的测定
2.3.1 色谱条件 PrevailTM Carbohydrate ES(250
mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;柱温 30 ℃;以乙腈-
四氢呋喃(100∶2)为流动相 A,0.1%乙酸水溶液
为流动相 B,按表 1 进行梯度洗脱,体积流量 0.8
mL/min。以 ELSD 检测器进行检测,参数设置为增
益 10,气压 137.9 kPa,漂移管 65 ℃,Neb heater:
60%。理论板数按果糖色谱峰计算应不低于 10 000。
分别取对照品溶液和供试品溶液各 10 μL,注入色
谱仪,测定。该色谱条件下,蔗糖和麦芽糖得到较
好分离,见图 1。
表 1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program
tR/min A/% B/%
0 83 17
22 83 17
26 75 25
33 75 25
34 72 28
48 72 28
49 83 17
60 83 17

1-蔗糖 2-麦芽糖
1-sucrose 2-maltose
图 1 人参药材样品 (A) 和混合对照品 (B) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of Ginseng Radix samples (A) and mixed
reference substances (B)
2.3.2 供试品制备 将红参干燥、粉碎,过四号
筛,精密称取 2 g,置于 100 mL 圆底烧瓶中,加
水 50 mL,加热回流提取 3 h,于 3 000 r/min 离心
20 min,弃去药渣,浓缩至干,放冷后加水 5 mL
溶解,上样至已处理好的固相萃取柱,再用水分
次洗涤,收集上样液和洗涤流出液于 50 mL 量瓶
中,加水定容至刻度,摇匀。取上述溶液 1 mL
于 10 mL 量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,过 0.45
μm 滤膜即得。
2.3.3 对照品溶液制备 精密称取经五氧化二磷干
燥过的蔗糖、麦芽糖各适量,置于 10 mL 量瓶中,
加水溶解定容,制得含蔗糖 0.541 mg/mL 和麦芽糖
1.025 mg/mL 的混合对照品溶液。取混合对照品溶
液 2、4、6、8 mL,分别置于 10 mL 量瓶中,加水
溶解,定容备用。
2.3.4 线性关系考察 将“2.3.3”项制备的 5 个系
列质量浓度混合对照品溶液,按照“2.3.1”项下的
色谱条件注入高效液相色谱仪,得到液相色谱图,
t/min
A
B
1
2
1
2
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 60
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

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积分,以质量浓度的自然对数值(X)与测得峰面
积的自然对数值(Y)进行线性回归,回归方程为
蔗糖 Y=1.514 9 X-12.436,r=0.999 6,线性范围为
0.108~0.541 mg/mL;麦芽糖 Y=1.615 2 X-11.643,
r=0.999 8,线性范围为 0.205~1.025 mg/mL。
2.3.5 精密度试验 取“2.3.3”混合对照品溶液,
在“2.3.1”项色谱条件下,连续进 5 针,得到液相
色谱图,得到蔗糖和麦芽糖的峰面积积分值。蔗糖
峰面积积分值的 RSD 为 1.52%,麦芽糖峰面积积分
值的 RSD 为 1.83%,表明仪器精密度良好。
2.3.6 稳定性试验 取按“2.3.2”项制备好的红参
供试品溶液,在“2.3.1”项色谱条件下,分别在 1、
6、12、18、24 h 测定,蔗糖峰面积积分值的 RSD
为 1.71%,麦芽糖峰面积积分值的 RSD 为 1.36%。
2.3.7 重复性试验 取同一批红参药材粉末,按
“2.3.2”项方法平行制备 6 份供试品溶液,按“2.3.1”
项色谱条件进行测定,计算蔗糖和麦芽糖的质量分
数的 RSD 分别为 3.16%和 3.08%。
2.3.8 加样回收率试验 取与重复性试验同一批的
红参药材粉末 1 g,共 6 份,分别精密加入蔗糖、麦
芽糖对照品,按“2.3.2”项方法制备供试品溶液,
按“2.3.1”项色谱条件进行测定,并计算加样回收
率,蔗糖和麦芽糖的平均加样回收率分别为
100.80%和 102.93%,RSD 分别为 2.74%和 2.90%。
2.4 红参中总蛋白的测定[5]
2.4.1 供试品溶液制备 取不同原料制得的红参,
粉碎过 4 号筛,混匀,分别精密称取 2.0 g 红参粉于
试管中,按料液比 1∶15加入Tris缓冲溶液(pH 7.0,
10 mmol/L),4 ℃浸提 18 h,将提取液 6 000 r/min
离心 30 min,浸提次数为 2 次,合并 2 次上清液,
即得供试品溶液。
2.4.2 标准曲线绘制 将 0、40、80、160、240、
320、400 μL 牛血清蛋白(BSA)溶液(0.25 mg/mL)
分别加入到试管中,加入蒸馏水补足到 400 μL 混
匀,加碱性铜溶液 2 mL,摇匀,室温静置 10 min,
快速加入 Folin-酚试剂 200 μL 摇匀,室温静置 30
min,显色后,在波长 700 nm 处测定吸光度(A)
值。以不含 BSA 溶液的 A 为空白对照,以蛋白质
量浓度为横坐标(X),A 值为纵坐标(Y),绘制
标准曲线,回归方程为 Y=1.141 8 X+0.001 0,r=
0.998 9,线性范围为 10~100 μg。
2.4.3 样品的测定 按“2.4.1”项方法制备供试品
溶液分别稀释 10 倍后,取 400 μL,按“2.4.2”项
下的方法测定红参总蛋白的量。
2.5 人参皂苷的测定[6]
2.5.1 色谱条件 以乙腈为流动相 A,以 0.05%磷
酸水溶液为流动相 B,按表 2 的流动相系统进行梯
度洗脱;检测波长为 203 nm;柱温为 30 ℃。
表 2 梯度洗脱流程
Table 2 Gradient elution program
tR /min 体积流量/(mL·min−1) A/% B/%
0 1.2 19 81
15 1.2 19 81
24 1.0 22 78
25 1.0 22 78
32 1.0 24 76
35 1.0 30 70
43 1.0 31 69
53 1.0 33 67
73 1.0 55 45
85 1.0 75 25
95 1.0 90 10
105 1.0 100 0
115 1.0 100 0
116 1.0 19 81
120 1.0 19 81

2.5.2 供试品溶液制备 取红参 100 g(原药材去芦
头),粉碎过 4 号筛,混匀。取 5 g 粉末,精密称定,
置圆底烧瓶中,加入氯仿 50 mL 加热回流 3 h,弃
去氯仿液;药渣挥干溶剂后,80 mL 的 85%乙醇回
流 2 次,2 次回流时间分别为 2 h 和 1 h。提取液减
压回收至无醇味,用 0.5 mol/L NaOH 的 20%甲醇溶
液转移定容至 100 mL 量瓶中。精密量取上述溶液
10 mL,上预先处理好的 AB-8 树脂柱(80~100 目,
柱内径 6~8 mm,树脂柱高约 5 cm;10 mL 甲醇冲
洗,再用 0.5 mol/L NaOH 的 20%甲醇溶液约 5 mL
冲洗处理),以 0.5 mol/L NaOH 的 20%甲醇溶液 5
mL 冲洗,流出液弃去,再以 20%甲醇溶液 10 mL
冲洗,流出液弃去,然后用甲醇洗脱收集于 10 mL
量瓶中至近刻度,加甲醇至刻度,摇匀,过 0.45 μm
滤膜,取续滤液作为供试品溶液。
2.5.3 对照品溶液制备 精密称取 10 种人参皂苷
对照品适量,加甲醇制成含 209.6 μg/mL 人参皂苷
Rg1、98.0 μg/mL Re、298.8 μg/mL Rb1、197.6 μg/mL
Rb2、104.8 μg/mL Rc、92.4 μg/mL Rf、46.0 μg/mL
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Rg3、68.8 μg/mL Rb3、10.0 μg/mL Rd、106.0 μg/mL
Rg2 的混合对照品溶液。
2.5.4 线性关系考察 取上述混合对照品溶液,按
设定的色谱条件,分别进样 2、4、8、10、12 μL,
以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归处理,得回
归方程见表 3。
表 3 对照品回归方程
Table 3 Regression equation of reference substances
人参皂苷对照品 回归方程 r 线性范围/μg
Rg1 Y=304 668 X-17 644 0.999 7 0.419 2~2.515 2
Re Y=397 561 X-9 987.7 0.999 7 0.196 0~1.176 0
Rf Y=339 514 X-6 754.4 0.999 8 0.184 8~1.108 8
Rb1 Y=237 923 X-18 239 0.999 7 0.597 6~3.585 6
Rg2 Y=481 945 X-13 289 0.999 6 0.212 0~1.272 0
Rc Y=299 005 X-11 990 0.999 5 0.209 6~1.257 6
Rb2 Y=310 604 X-16 730 0.999 6 0.395 2~2.371 2
Rb3 Y=267 040 X-6 644.1 0.999 5 0.137 6~0.825 6
Rd Y=398 565 X-9 403.8 0.999 6 0.200 0~1.200 0
Rg3 Y=712 685 X-7 722.7 0.999 7 0.092 0~0.552 0

2.5.5 样品测定 取供试品 10 μL,在“2.1.1”项
下色谱条件测定不同原料参制得红参中 10 种人参
皂苷量。
3 结果与分析
3.1 非皂苷类成分的测定结果
锈腐病、受伤及正常鲜参加工而成的红参中非
皂苷类成分量检测结果见表 4。从表 4 中可以看出
锈腐病、受伤鲜参加工成的红参中总灰分、酸不溶
性灰分、挥发性醚浸出物、蔗糖量都显著高于正常
鲜参加工成的红参。正常鲜参和受伤鲜参加工成的
红参中总蛋白量显著高于锈腐病鲜参加工成的红
参。锈腐病鲜参加工成的红参中麦芽糖量显著高于
正常鲜参加工成的红参,受伤鲜参加工成的红参中
麦芽糖量显著低于正常鲜参加工成的红参。
3.2 10 种人参皂苷量比较
锈腐病、受伤及正常鲜参加工成的红参中 10
种人参皂苷量测定结果见表 5。从表 5 可以看出锈
腐病、受伤鲜参加工成的红参的人参皂苷 Rg1、Rb1、
表 4 常规指标比较 ( ± = 3x s n, )
Table 4 Comparison on regular indices ( ± = 3x s n, )
样品 总灰分/% 酸不溶性灰分/% 醚浸出物/% 总蛋白/% 蔗糖/% 麦芽糖/%
正常 4.140±0.123 bA 0.170±0.009 cB 0.066±0.002 bB 3.836±0.115 bA 8.197±0.053 bB 9.718±0.093 bB
受伤 4.360±0.037 aA 0.226±0.015 bA 0.080±0.004 aA 4.283±0.350 aA 9.099±0.239 aA 9.224±0.085 cC
锈腐 4.229±0.056 abA 0.246±0.002 aA 0.078±0.001 aA 3.149±0.063 cB 8.905±0.032 aA 10.477±0.123 aA
组间均值多重比较中小写字母为 0.05 水平下比较;大写字母为 0.01 水平下比较(表 5 同)
Lower-case letters present 0.05 level and up-case letters present 0.01 level in multiple comparison of mean values among groups
表 5 10 种人参皂苷量测定结果 ( ± = 3x s n, )
Table 5 Determination of ten kinds of ginsenosides ( ± = 3x s n, )
样品 Rg1/(mg·g−1) Re/(mg·g−1) Rf/(mg·g−1) Rb1/(mg·g−1) Rg2/(mg·g−1) Rc/(mg·g−1)
正常 3.428±0.026 aA 1.190±0.007 aA 1.080±0.006 aA 5.581±0.012 aA 0.270±0.007 aA 3.800±0.092 aA
受伤 2.359±0.021 cB 0.637±0.004 bB 0.659±0.008 cC 4.282±0.018 cC 0.166±0.002 bB 1.751±0.058 bB
锈腐 3.340±0.046 bA 0.458±0.021 cC 0.747±0.010 bB 4.551±0.046 bB 0.086±0.003 cC 1.825±0.054 bB
样品 Rb2/(mg·g−1) Rb3/(mg·g−1) Rd/(mg·g−1) Rg3/(mg·g−1) 10 种皂苷总量/(mg·g−1)
正常 1.740±0.045 aA 0.342±0.010 aA 0.966±0.018 aA 0.138±0.004 aA 18.535±0.082 aA
受伤 1.061±0.053 cC 0.166±0.006 cC 0.386±0.008 cC 0.115±0.003 bB 11.582±0.137 cC
锈腐 1.447±0.053 bB 0.202±0.005 bB 0.499±0.015 bB 0.097±0.002 cC 13.252±0.099 bB
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Rc、Rb2、Re、Rf、Rb3、Rd、Rg2、Rg3量和 10 种人
参皂苷总量都显著低于正常鲜参加工成的红参。
4 讨论
锈腐病、受伤鲜参加工成的红参的人参皂苷
Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Re、Rf、Rb3、Rd、Rg2、Rg3
量都显著低于正常鲜参加工成的红参。受伤、锈腐
病和正常鲜参加工成的红参的人参皂苷 Re 和人参
皂苷 Rg1 的总量都大于 0.25%,人参皂苷 Rb1 量都
大于 0.2%,表明受伤、锈腐病和正常鲜参加工成的
红参的品质均符合《中国药典》2010 年版规定。
现代研究表明,人参皂苷是红参的活性成分,具有
抗肿瘤[7-9]、抗衰老[10-11]、提高免疫力[12]及抗心律
失常[13]等多种药理作用。受伤鲜参和锈腐病鲜参加
工成的红参中的人参皂苷 Re、Rg1、Rb1 虽然符合
《中国药典》2010 年版中的规定,但是其 10 种人参
皂苷的量都显著低于正常鲜参加工成的红参。
受伤、锈腐病和正常鲜参加工成的红参的总
灰分量<5%,酸不溶性灰分量<0.3%,符合《中
华人民共和国国家标准》红参分等质量中关于普
通红参的规定。锈腐病和受伤鲜参加工成的红参
的总灰分、酸不溶性灰分、挥发性醚浸出物、蔗
糖量都显著高于正常鲜参加工成的红参。正常鲜
参和受伤鲜参加工成的红参中的总蛋白量显著高
于锈腐病鲜参加工成的红参。锈腐病鲜参加工成
的红参的麦芽糖量显著高于正常鲜参加工成的红
参,受伤鲜参加工成的红参的麦芽糖量显著低于
正常鲜参加工成的红参。
白容霖等[3]测定人参锈腐病根和健根中多种有机
物质,发现病根中人参总皂苷、淀粉、总糖和 6 种氨
基酸的量减少,但脂肪酸、木质素、还原糖和 10 种
氨基酸的量比健参根增加。本实验研究锈腐鲜参与正
常鲜参加工成的红参中化学物质量变化结果与白容
霖等[3]的实验结果基本一致,分析指出人参锈腐病根
体内氮代谢遭到较严重的干扰。人参根体内氮代谢的
异常必然会影响到其他代谢途径,例如产生活性成分
人参皂苷的代谢途径也会受到影响。研究结果表明锈
腐病参中人参皂苷量较健康参根降低。蛋白质、糖类
物质是人参的初生代谢产物,而人参皂苷是人参的次
生代谢产物。正常人参受伤或发生锈腐病害后,体内
的代谢途径受到严重影响,导致其参根内的化学物质
如蛋白质、糖类及人参皂苷等的量发生变化。人参体
内物质成分蛋白质、糖类物质及人参皂苷等与其代谢
途径的关系还有待进一步研究。
鲜参加工成红参后,其活性成分人参皂苷不
仅量会发生变化,还会产生微量人参皂苷 Rg2、
Rg3、Rg5、Rhl、Rh2[14]。因此,将样品的鲜参和
红参比较,其结果的差异会与红参加工的过程有
关。本研究过程中供试材料鲜参采用统一的红参
加工方法,避免了因红参加工过程不同而引起实
验结果差异。锈腐病鲜参和受伤鲜参加工成的红
参与正常鲜参加工成的红参相比较,其含有的活
性成分人参皂苷量较低,因此建议红参加工过程
中避免采用锈腐病、受伤的鲜参为原料,以免影
响红参饮片的临床疗效。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部 2010.
[2] 赫荣琳, 马贵龙, 李 玉. 人参锈腐病研究进展 [J].
菌物研究, 2005, 3(4): 47-51.
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