全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 ·487·
3 种方法制备的黄连解毒汤提取液指纹图谱比较
陈丽静，孙秀梅*，张兆旺，黄延亮，周 莹
山东中医药大学，山东 济南 250355
摘 要：目的 比较以半仿生提取法（SBE 法）、醇提取法（AE 法）、水提取法（WE 法）制得黄连解毒汤方药提取液的指
纹图谱，进一步验证该方药较佳的提取方法。方法 采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，比较 3 种方法制备的黄连解
毒汤相对分子质量≤1 000 的提取液的指纹图谱。结果 SBE 提取液有 23 个特征指纹峰；与 SBE 提取液相比较，AE 提取液
缺少 5 个特征指纹峰（5、9、10、11、22），WE 提取液缺少 3 个特征指纹峰（11、22、23）；用夹角余弦法计算特征指纹峰
的相似度，结果 SBE 提取液的数值均大于 AE 提取液和 WE 提取液，这与共有特征峰重叠率的计算结果也较相符。栀子苷、
黄芩素、盐酸小檗碱 3 种指标成分及共有特征指纹峰总面积比较，皆是 SBE 提取液＞AE 提取液＞WE 提取液。结论 黄连
解毒汤方药以 SBE 法提取得到的相对分子质量≤1 000 的提取液中成分最多。
关键词：黄连解毒汤；SBE 法；AE 法；WE 法；HPLC 指纹图谱；特征峰
中图分类号：R284.2；R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)03 - 0487 - 05
Comparison on fingerprints of extract solutions from Huanglian Jiedu Decoction
by three kinds of methods
CHEN Li-jing, SUN Xiu-mei, ZHANG Zhao-wang, HUANG Yan-liang, ZHOU Ying
Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China
Abstract: Objective To compare HPLC fingerprints of extract solutions from Huanglian Jiedu Decoction (HJD) made by
semi-bionic extraction (SBE), alcohol extraction (AE), and water extraction (WE), and verify the best extraction method furtherly.
Methods Fingerprint of extract solutions with relative molecular mass (RMM)≤1 000 from HJD made by the three different
methods was investigated and compared by RP-HPLC. Results There were 23 characteristic peaks in SBE solution, while there were
five characteristic peaks (5, 9, 10, 11, 22) in AE solution and three (11, 22, 23) in WE solution less than those in SBE solution. Data
were analyzed by fingerprint similarity evaluation software and the similarity of characteristic peaks in SBE solution was larger than
those in AE and WE solutions, which was in accordance with the overlap rate of common peak. The comparion between geniposide,
baicalein, and berberine and the total area of characteristic peak is SBE＞AE＞WE, respectively. Conclusion The optimal method
for making the extract solution with RMM≤1 000 of HJD is SBE.
Key words: Huanglian Jiedu Decoction (HJD); SBE method; AE method; WE method; HPLC fingerprint; characteristic peak

黄连解毒汤源自唐·《外台秘要》，由黄连、黄
芩、黄柏和栀子组成，具有清热、泻火、解毒之功
效。现代研究表明，黄连解毒汤主要含有小檗碱、
巴马亭、药根碱等生物碱类，黄芩苷、汉黄芩素、
木犀草素等黄酮类，栀子苷等环烯醚萜苷类成分，
药理活性主要集中在抑菌、抗炎、抗氧化、抗脑缺
血缺氧、提高机体免疫功能等方面[1-4]。前期根据
SBE 法理论与研究方法[5-8]，对该方研究已取得一定
进展，特别是对其半仿生提取液（SBE 液）、醇提
取液（AE 液）、水提取液（WE 液）作多指标（盐
酸小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、
HPLC 峰总面积、相对分子质量≤1 000 提取物）综
合评判比较，结果综合评判（Y）值为：YSBE＞YAE＞
YWE[9]。在此基础上，本研究对该方药 3 种提取方法
制得的相对分子质量≤1 000 提取液作 HPLC 指纹
图谱比较，进一步验证该方药较佳的提取方法。

收稿日期：2011-09-27
基金项目：国家科技重大新药创制专项——“中药‘半仿生’提取关键技术研究”（2010ZX09401）
作者简介：陈丽静（1987—），女，山东聊城人，硕士研究生，研究方向为中药新药与中药炮制原理研究。
Tel: 13791070052 E-mail: chenlijing0921@163.com
*通讯作者 孙秀梅 Tel: (0531)82628081 E-mail: sunxiumei8@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 ·488·
1 仪器与材料
pHS—3C 型精密 pH 计（上海雷磁仪器厂）；
MA110 型电子分析天平（上海第二分析仪器厂）；
1100 系列高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）；
UV3010 型紫外分析仪（日立公司）；KQ—250E 型
医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；
DH—系列中空纤维超滤膜（上海德宏生物医学科学
科技发展有限公司）。
方药经山东中医药大学张兆旺教授鉴定：黄连
为毛茛科植物黄连 Coptis chinensis Franch.的干燥
根茎加工成的饮片；黄芩为唇形科植物黄芩
Scutellaria baicaLensis Georgi 的干燥根加工成的饮
片；黄柏（关黄柏）系芸香科植物黄檗 Phellodendron
amurense Rupr.的干燥树皮加工成的饮片；栀子为
茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis 的干燥
成熟果实加工成的饮片。
盐酸小檗碱（批号 111595-200604）、黄芩素（批
号 110715-200815）、栀子苷（批号 110749-200613）
均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈均为
色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品液的制备
2.1.1 半仿生提取液（SBE 液）的制备 按处方比
例称取方药粗粉（10～20 目）100 g，按照优选的
SBE 法提取工艺条件和药材组合方式（黄连与栀子
合煎，黄芩与黄柏合煎，合并煎液）[10]，分别浸泡
30 min，分别用 SBE 法提取 3 次，加水量依次为药
量的 10、8、8 倍，3 煎 pH 值依次为 2.0、7.0、9.0，
提取时间依次为 2、1.5、1.5 h，分别将 3 煎提取液
依次粗滤，离心，相对分子质量为 1 000 的中空纤
维超滤膜滤过，浓缩，合并，定容至 500 mL，即得
相对分子质量≤1 000 提取物的样品液（含生药
200 g/L）。
2.1.2 醇提液（AE 液）的制备 按“2.1.1”项下
方法，改用 60%乙醇作溶剂[11]，依法制得相对分子
质量≤1 000 提取物的样品液（含生药 200 g/L）。
2.1.3 水提液（WE 液）的制备 按“2.1.1”项下
方法，改用中性水作溶剂，依法制得相对分子质
量≤1 000 提取物的样品液（含生药 200 g/L）。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取“2.1”项下 3 种样品液，各 10.0 mL，
分别置蒸发皿中，水浴浓缩蒸至近干，加硅藻土 0.8
g，拌匀，蒸干，研匀，转移至 100 mL 干燥磨口三
角瓶中，精密加入甲醇 25 mL 溶解，称定质量，超
声提取 30 min，放冷，补足减失的质量，摇匀，布
氏漏斗滤除残存硅藻土。精密吸取上述滤液各 2.5
mL，分别用甲醇定容至 10 mL，即得 3 种供试品溶
液（含生药 20 g/L）。
2.3 混合对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品 5.10 mg，黄芩素对照
品 1.96 mg，小檗碱对照品 2.32 mg，用甲醇定容至
10 mL，即得混合对照品溶液。
2.4 色谱条件[12-14]
色谱柱为 DiamonsilTM C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为（0.1%磷酸＋0.02 moL/L KH2PO4）
（A）-乙腈（B），线性梯度洗脱程序：0～30 min，
5%～30% B；30～40 min，30% B；40～60 min，
30%～40% B；检测波长 225 nm；体积流量 0.8
mL/min；进样量 20 μL；柱温 30 ℃。
2.5 内参照峰的选择
以上述流动相进行梯度洗脱，从图 1 可以看出，
7 号峰保留时间适中，峰面积较大且稳定，峰形较
好，故选择 7 号峰为内参照峰进行各供试品溶液相
对保留时间和相对峰面积的计算。
2.6 方法学考察
2.6.1 精密度试验 取“2.2”项下供试品溶液（SBE
液），连续进样 5 次，检测指纹图谱，计算得各色谱
峰相对保留时间的 RSD＜1.0%，相对峰面积的
RSD＜5.0%。
2.6.2 稳定性试验 取“2.2”项下供试品溶液（SBE
液），分别在 0、2、6、12、24 h 检测指纹图谱，计
算得各色谱峰相对保留时间的 RSD＜1.0%，相对峰
面积的 RSD＜5.0%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.6.3 重现性试验 按“2.1”和“2.2”项下方法，
制备供试品溶液（SBE 液）5 份，检测指纹图谱，
计算得各色谱峰的相对保留时间的 RSD＜1.0%，相
对峰面积的 RSD＜5.0%。
2.7 方药 3 种方法提取相对分子质量≤1 000 供试
品溶液指纹图谱的建立与比较
2.7.1 指纹图谱的建立 按“2.1”项下方法，分别
制备 SBE 液、AE 液和 WE 液，按“2.2”项下方法，
分别制备 SBE 供试品溶液、AE 供试品溶液和 WE
供试品溶液，按“2.4”项下色谱条件，分别进样 20
μL，记录 HPLC 图，结果见图 1。
2.7.2 指纹图谱的比较 取 3 种供试品溶液，分别
进样，记录 HPLC 图，色谱图经《中国药典》2010
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 ·489·






7-栀子苷 18-黄芩素 20-盐酸小檗碱，下同
7-geniposide 18-baicalein 20-berberine hydrochloride, same as below

图 1 SBE 法 (A)、AE 法 (B) 和 WE 法 (C) 提取相对分子质量≤1 000 供试液 HPLC 指纹图谱以及混合对照品的
HPLC 色谱图 (D)
Fig. 1 HPLC fingerprints of extract solutions with RMM≤1 000 made by SBE (A), AE (B), and WE (C) methods,
and HPLC chromatogram of mixed reference substances (D)

年版规定的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》
处理，得相对保留时间、相对峰面积，见表 1、2。
2.7.3 特征峰重叠率 由表 1 可知，以 SBE 液的指
纹图谱峰数为对照样品峰，其共有 23 个指纹峰；
AE 液指纹图谱与 SBE 液指纹图谱比较，有 18 个相
对应的共有峰，峰 5、9、10、11、22 未检出；WE
液指纹图谱与 SBE 液指纹图谱比较，有 20 个相对
应的共有峰，峰 11、22、23 未检出。
2
3 1 4 5
6
7
8
9
10 11 12 13
14 15
16
17
18
19
20
21 22 23
1
2
4
6
7
8
12 13 14
15
16
17
18
19
20
21
23
2110 12 13 14
15
16
17
18
19
20
1
2 3 4
5 6
7
8
9
7
18
20
0 10 20 30 40 50 60
t / min
A
B
C
D
3
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 ·490·
表 1 3 种方法提取相对分子质量≤1 000 供试品溶液
特征指纹峰的保留时间及相对保留时间
Table 1 Retention and relative retention times of extract
solutions with RMM≤1 000 made by three
different methods
保留时间 / min 相对保留时间 峰号
SBE 法 AE 法 WE 法 SBE 法 AE 法 WE 法
1 7.66 7.55 7.56 0.370 6 0.369 5 0.370 4
2 11.06 10.89 10.90 0.535 0 0.533 5 0.533 9
3 12.90 12.76 12.75 0.624 3 0.624 7 0.624 7
4 14.21 13.58 14.02 0.687 4 0.664 9 0.686 6
5 15.33 － 15.12 0.741 6 － 0.740 4
6 17.61 17.40 17.41 0.852 2 0.852 0 0.852 7
7 20.67 20.42 20.41 1.000 0 1.000 0 1.000 0
8 22.48 22.18 22.27 1.087 4 1.085 9 1.090 8
9 24.12 － 23.79 1.166 8 － 1.165 3
10 24.57 － 24.24 1.188 8 － 1.187 6
11 26.30 － － 1.272 4 － －
12 27.66 27.44 27.49 1.338 4 1.343 8 1.346 8
13 29.37 29.11 29.28 1.421 0 1.425 7 1.434 3
14 31.22 31.05 31.08 1.510 7 1.520 6 1.522 5
15 32.64 32.45 32.60 1.579 2 1.588 9 1.596 9
16 33.06 32.84 33.03 1.599 4 1.608 4 1.617 8
17 33.92 33.66 33.90 1.641 2 1.648 6 1.660 8
18 35.11 34.89 34.96 1.698 7 1.708 6 1.712 4
19 37.03 36.86 37.09 1.791 9 1.804 9 1.816 9
20 38.33 38.14 38.46 1.854 4 1.867 6 1.883 9
21 43.64 43.30 43.43 2.111 5 2.120 5 2.127 4
22 48.61 － － 2.352 0 － －
23 58.62 58.25 － 2.836 1 2.852 4 －
“－”未检出，下同
“－” undetected, same as below

用共有峰的重叠率公式分别计算 SBE 液与 AE
液、WE 液指纹图谱共有峰的重叠率，结果 SBE 液
的重叠率为 1，AE 液的重叠率为 0.870 8，WE 液的
重叠率为 0.930 2。
重叠率＝共有峰数×2 / (X＋SBE 液峰数)
X 为待测样品的峰数
2.7.4 特征指纹峰相似度 色谱图经《中药色谱指
纹图谱相似度评价系统》处理，SBE 法、AE 法、
WE 法提取相对分子质量≤1 000 供品溶液特征指
纹峰相似度（夹角余弦法）评价结果分别为 1.000 0、
0.977 3、0.984 6。
该方药 3种方法提取相对分子质量≤1 000提取
表 2 3 种方法提取相对分子质量≤1000 供试品溶液
特征指纹峰的面积及相对峰面积
Table 2 Peak areas and relative peak areas of extract
solutions with RMM≤1 000 made
by three different methods
峰面积 相对峰面积 峰号
SBE 法 AE 法 WE 法 SBE 法 AE 法 WE 法
1 251.1 78.7 121.7 0.044 2 0.015 1 0.024 8
2 877.0 875.4 533.0 0.154 2 0.167 4 0.108 7
3 717.2 624.0 543.2 0.126 1 0.119 4 0.110 8
4 288.3 540.0 111.3 0.050 7 0.103 3 0.022 7
5 700.8 － 928.9 0.123 2 － 0.189 5
6 1 128.2 987.4 917.2 0.198 4 0.188 9 0.187 1
7 5 686.8 5 228.3 4 901.9 1.000 0 1.000 0 1.000 0
8 3 525.3 2 765.3 2 678.4 0.619 9 0.528 9 0.546 4
9 578.2 － 339.7 0.101 7 － 0.069 3
10 854.6 － 325.4 0.150 3 － 0.066 4
11 1 062.1 － － 0.186 8 － －
12 714.1 544.8 482.2 0.125 6 1.041 4 0.098 4
13 1 450.3 915.5 585.1 0.255 0 0.175 1 0.119 4
14 1 659.5 584.5 548.9 0.291 8 0.111 8 0.112 0
15 1 292.1 1 118.9 778.4 0.227 2 0.214 0 0.158 8
16 3 020.7 3 242.8 2 359.6 0.531 2 0.620 2 0.481 4
17 3 798.0 3 218.4 2 311.7 0.667 9 0.615 6 0.471 6
18 6 887.4 4 108.5 4 056.0 1.211 1 0.785 8 0.827 4
19 3 583.9 4 004.8 3 033.3 0.630 2 0.766 0 0.618 8
20 14 065.4 9 669.8 8 670.0 2.473 3 1.849 5 1.768 7
21 764.1 1 191.2 947.3 0.134 4 0.227 8 0.193 3
22 772.1 － － 0.135 8 － －
23 631.3 225.2 － 0.111 0 0.043 1 －
总面积 54 308.5 39 923.5 35 173.2

液的特征指纹峰比较结果：SBE 液有 23 个特征指
纹峰，与 SBE 液相比较，AE 液缺少 5 个特征指纹
峰（5、9、10、11、22），WE 液缺少 3 个特征指纹
峰（11、22、23），由此可以说明，SBE 液中含有
的化学成分数量多于 AE 液和 WE 液；用夹角余弦
法计算特征指纹峰的相似度，结果 SBE 液的数值均
大于 AE 液和 WE 液，与共有特征峰重叠率的计算
结果也较相符。栀子苷、黄芩素、盐酸小檗碱 3 个
指标成分及共有特征指纹峰总面积比较，SBE 液＞
AE液＞WE液[9]。综上看来，该方药制剂时以用SBE
法制备相对分子质量≤1 000 提取物成分较多。正在
进行的该方药 3 种方法提取液的药效学比较也证明
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月 ·491·
SBE 法优于 AE 法和 WE 法（文献待发表）。
3 讨论
经对 380 余种常用中药中已知活性成分的统计，
绝大多数相对分子质量小于 1 000，这与“中药活性
成分分子量表”对 245 种成分的统计结果相符合[15]，
故本实验以相对分子质量≤1 000 提取物为最终产
物进行指纹图谱测定，能体现中药整体、综合、客
观、模糊的特点，为选用现代药物新剂型提供了技
术支撑，也对药效物质未知的中药提取研究拓展了
思路。
半仿生提取法（semi-bionic extraction method，
SBE 法）是根据中药和方剂中部分成分已知，大部
分成分未知的现实，将整体药物研究法与分子药物
研究法相结合，从生物药剂学角度，模拟口服给药
及药物经胃肠道转运的过程，为经消化道给药的中
药制剂设计的一种新的提取技术。本方法在提取工
艺中坚持“有成分论，不唯成分论，重在机体药效
学反应”的观点[5-7]，以一种或几种有效成分、总浸
出物及不同极性部分等做指标和（或）主要药理作
用做指标，综合评判，优选提取工艺，不拘泥于某
化学成分或适合纯化学成分的药理模型，而是考虑
到综合成分的作用。SBE 法自创立以来，已被应用
于多种中药和复方的研究。结果皆表明，SBE 法在
增加有效成分的提取率、提高某些药学指标方面明
显优于 WE 法和 AE 法，本研究进一步表明 SBE 法
具有广泛的推广应用前景。
参考文献
[1] 曾明飞, 潘林梅, 朱华旭, 等. 黄连解毒汤中栀子苷在
正常及脑缺血大鼠体内药动学研究 [J]. 中草药, 2010,
41(4): 617-620.
[2] 邓远雄, 刘晓东, 刘 李, 等. 黄连解毒汤对糖尿病大
鼠肠道二糖酶活性的影响 [J]. 中草药, 2010, 41(7):
1127-1130.
[3] 邓远雄, 何丽华, 万思婷, 等. 黄连解毒汤对体内外晚
期糖基化终产物形成的影响 [J]. 中草药, 2011, 42(1):
130-133.
[4] 宋 珏, 路 通, 谢 林, 等. 黄连解毒汤的药动学-药
效学相关性研究 [J]. 中草药, 2011, 42(10): 2042-2046.
[5] 张兆旺. 中药药剂学专论 [M]. 北京: 人民卫生出版
社, 2009.
[6] 张兆旺, 孙秀梅. 建立中药复方用半仿生提取研究的
技术平台 [J]. 世界科学技术——中医药现代化, 2005,
7(1): 56-59.
[7] 张兆旺, 孙秀梅. 试论“半仿生提取法”制备中药口服
制剂 [J]. 中国中药杂志, 1995, 20(11): 670-673.
[8] 宋宏新, 刘 静, 张彦娟. 半仿生酶法提取三七皂苷工
艺研究 [J]. 中草药, 2009, 40(6): 905-907.
[9] 窦锦明, 孙秀梅, 张兆旺, 等. 黄连解毒汤方药 3 种方
法提取液成分比较 [J]. 时珍国医国药, 2010, 21(6):
1369-1371.
[10] 黄延亮. 以黄连解毒汤方药探讨中药复方用“半仿生-
酶法”研究的初步模式 [D]. 济南: 山东中医药大学,
2011.
[11] 窦锦明. 以≤1 000 Da 提取物探讨中药复方成分提取
用 SBE 法研究的基本模式 [D]. 济南: 山东中医药大
学, 2010.
[12] 曹现峰, 沈 嘉. 黄连解毒汤的HPLC指纹图谱测定条
件初探 [J]. 中成药, 2003, 25(7): 519-522.
[13] 任玲玲, 薛兴亚, 徐 青, 等. 黄连解毒汤高效液相色
谱分析方法的建立 [J]. 世界科学技术——中医药现代
化, 2005, 7(5): 41-44.
[14] 沈 嘉, 曹现峰, 刘九飞. 几种黄连解毒汤的 HPLC 指
纹图谱研究 [J]. 中成药, 2003, 25(6): 433-437.
[15] 季宇彬. 中药有效成分药理与应用 [M]. 哈尔滨: 黑龙
江科学技术出版社, 2004.