全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 4 期 2012 年 4 月

·711·
HPLC-MS/MS 法测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷
张 婷 1, 2，美尔哈巴•热西提 1，林 潇 2，解军波 1*，张彦青 1
1. 天津商业大学 制药工程系，天津 300134
2. 沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016
摘 要：目的 建立 HPLC-MS/MS 检测银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的方法。方法 应用超声提取和 Agilent G6410B Triple
Quad LC/MS 检测。Agilent Eclipse Plus C18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）分析柱，流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液（60∶40），
体积流量 0.2 mL/min，柱温 25 ℃，进样量为 20 μL；以液相色谱分离、电喷雾离子化串联质谱进行检测。结果 绿原酸和
黄芩苷分别在 50～800 ng/mL、125～2 000 ng/mL 线性关系良好，银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的平均加样回收率分别为
102.96%、100.69%。结论 该方法快速简便、精密度好、灵敏度高，可用于银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的定量测定。
关键词：银黄颗粒；绿原酸；黄芩苷；HPLC-MS/MS；超声提取
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)04 - 0711 - 03
Determination of chlorogenic acid and baicalin in Yinhuang Granule
by HPLC-MS/MS
ZHANG Ting1, 2, REXIT•Marhaba 1, LIN Xiao2, XIE Jun-bo1, ZHANG Yan-qing1
1. Department of Pharmacceutical Engineering, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China
2. Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
Key words: Yinhuang Granule; chlorogenic acid; baicalin; HPLC-MS/MS; ultrasonic extraction

银黄颗粒是由金银花提取物、黄芩提取物加工
制成的复方制剂，具有清热、解毒、消炎的功效，
用于治疗急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、上呼吸
道感染等[1]。本制剂中的主要药效指标成分为黄芩
苷和绿原酸，有文献报道采用 HPLC 法分别测定银
黄颗粒及相关制剂中绿原酸和黄芩苷的量[2-5]，但
HPLC-MS/MS 法对银黄黄颗粒的质量控制研究未
见文献报道。本实验建立了 HPLC-MS/MS 法同时
测定银黄颗粒剂中绿原酸和黄芩苷的定量方法，研
究结果显示该法快速简便、精密度好、灵敏度高，
可用于银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的测定。
1 仪器与材料
Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪，含
G1322A 在线脱气机、G1312B 二元泵、G1316B 柱
温箱、G1315C DAD 紫外检测器、G1367D 自动进
样器（美国 Agilent 公司）；G6410B Triple Quad
LC/MS、Masshunter 色谱工作站（美国 Agilent 公
司）；BP211D 型十万分之一电子天平（德国 Satorius
公司）；ZH—2 型涡流混合器（天津大学无线电厂）；
AS10200A 型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公
司）。绿原酸（批号 110753-200412）、黄芩苷（批
号 715-200010）对照品均购自中国药品生物制品检
定所；银黄颗粒剂样品由市场购得，分别为四川三
精升和制药有限公司（批号 20080904）、湖南麓山
天然植物制药有限公司（批号 20090205）、天津太
平洋制药有限公司（批号 090604），规格均为 4 g/袋；
色谱纯甲醇与超纯水均购自 J. T. Baker 公司。
2 方法与结果
2.1 分析条件
2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Eclipse Plus C18
柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm），柱温为 25 ℃，流
动相为 0.1%醋酸水溶液-甲醇（60∶40），体积流量
0.2 mL/min，进样量为 20 μL。
2.1.2 质谱条件 电喷雾 ESI 离子源，多反应检测

收稿日期：2011-08-09
作者简介：张 婷（1986—），女，硕士研究生，研究方向为中药制剂。Tel: 13602196583 E-mail: zhangting19860511@126.com
*通讯作者 解军波 Tel: 13902153236 E-mail: junboxie@yahoo.com.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 4 期 2012 年 4 月

·712·
（MRM）方式，电喷雾电压 4 000 V，雾化气体为氮
气，雾化气压 241.325 kPa，干燥气体为氮气，干燥
气体积流量 8 L/min，离子源温度 350 ℃，碰撞气
体高纯氮气，碰撞气压力 0.15 MPa。绿原酸和黄芩
苷质谱分析的条件参数见表 1。
按上述色谱和质谱条件对银黄颗粒样品中各成
分进行测定，记录色谱图。图 1 为混合对照品和银
黄颗粒样品总离子流图及 2 种目标化合物的提取离
子流图。由图 1 可知银黄中各组分峰型良好，方法
具有较好的分离度和灵敏度，可以进行定量分析。

表 1 绿原酸和黄芩苷质谱分析的条件参数
Table 1 MS parameters of chlorogenic acid and baicalin
化合物 时间 / min ESI (＋/−) MRM 反应 碎裂电压 / V 碰撞能量 / V 驻留时间 / s
绿原酸 0～2.6 ESI (−) 353.1→191.0 100 10 0.2
黄芩苷 2.6～3.8 ESI (＋) 447.1→271.2 160 10 0.2




图 1 混合对照品 (A) 和银黄颗粒样品 (B) 的 HPLC-MS/MS 色谱图
Fig. 1 HPLC-MS/MS chromatograms of mixed reference substances (A) and Yinhuang Granule sample (B)

2.2 对照品溶液的配制
分别精密称量绿原酸、黄芩苷 10 mg，置 100 mL
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀后即得质
量浓度分别为 100 μg/mL 的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取银黄颗粒研成细粉，精密称取 10 mg，置 5 mL
量瓶中，加流动相适量，超声处理 30 min，用流动
相稀释至刻度，摇匀，针芯式微孔滤膜滤过，加流
动相稀释 50 倍后即得供试品溶液。
2.4 线性关系考察
分别精密量取各对照品溶液适量置 100 mL 量
瓶中，配成含绿原酸 1 μg/mL 和黄芩苷 2.5 μg/mL
的混合对照品溶液。精密量取上述混合对照品溶液
8、4、2、1、0.5 mL 置 10 mL 量瓶中，加流动相稀
释至刻度，摇匀，按上述色谱和质谱条件进行测定。
以进样质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）
进行线性回归，得回归方程：绿原酸 Y＝105 X－
1.25，r＝0.999 6；黄芩苷 Y＝391.81 X＋19.67，r＝
0.999 8；表明绿原酸在 50～800 ng/mL、黄芩苷在
125～2 000 ng/mL 线性关系良好。
2.5 精密度试验
按照“2.3”项制备方法，制备批号 20090205
银黄颗粒的供试品溶液，精密吸取该供试品溶液，
进样 20 μL，连续 5 次，测定峰面积，计算得绿原
酸、黄芩苷离子流色谱峰峰面积的 RSD 分别为
1.28%、2.69%。
2.6 稳定性试验
按照“2.3”项制备方法，制备批号 20090205
银黄颗粒的供试品溶液，精密吸取该供试品溶液，
进样 20 μL，分别于 0、2、4、6、8 h 进行分析，测
A B
1
0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
t / min
2
1 2
1 2
1 2
1 2
1 2
绿原酸
黄芩苷
绿原酸
黄芩苷
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 4 期 2012 年 4 月

·713·
定色谱峰面积，计算得绿原酸和黄芩苷提取离子流
色谱峰峰面积的 RSD 分别为 1.83%、2.55%，表明
供试品溶液在 8 h 内稳定性良好。
2.7 重复性试验
按照“2.3”项制备方法，制备批号 20090205
银黄颗粒的供试品溶液，共 5 份，依法测定，结
果绿原酸和黄芩苷质量分数的 RSD 分别为 2.15%、
2.91%。
2.8 加样回收率试验
制备批号 20090205 银黄颗粒的供试品溶液，按
检出量精密加入质量浓度为 100 μg/mL 的绿原酸和
黄芩苷对照品溶液各 1.2、2.9 mL，按照“2.3”项制
备供试品溶液，共 5 份，依法测定，结果绿原酸和
黄芩苷的平均加样回收率分别为（102.96±2.57）%、
（100.69±2.16）%。
2.9 样品测定
取 3 批银黄颗粒，按照“2.3”项制备方法制备
供试品溶液，精密吸取供试品溶液，进样 20 μL，测
定峰面积。每批重复测定 3 次，按回归方程计算绿
原酸和黄芩苷的量，结果见表 2。

表 2 银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的测定 (n＝3)
Table 2 Determination of chlorogenic acid and baicalin
in Yinhuang Granule (n＝3)
批 号 绿原酸 / (mg·g−1) 黄芩苷 / (mg·g−1)
20080904 6.47 33.31
20090205 11.52 29.35
090604 3.85 28.04
3 讨论
银黄颗粒是由金银花提取物、黄芩提取物加工
制成的复方制剂，本制剂中的主要药效指标成分为
黄芩苷和绿原酸，本实验应用 HPLC-MS/MS 方法
建立了同时检测银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的定量
测定方法。研究结果发现，以甲醇-0.1%醋酸水溶液
（60∶40）作为流动相，体积流量 0.2 mL/min，得到
较好的分离度，且保留时间适当。方法学考察发现
本方法可以很好地测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷
的量，不仅为银黄颗粒的质量控制提供了一定参考
和依据，同时为下一步研究大鼠口服银黄颗粒后体
内指标成分的药动学特征奠定了基础。
参考文献
[1] 宣铁锋. 银黄颗粒质量标准研究 [J]. 中国药业, 2006,
15(5): 52-53.
[2] 黄 雄, 黄 嬛, 黄 佳, 等. HPLC 同时测定银黄颗
粒中绿原酸和黄芩苷的含量 [J]. 中国现代应用药学杂
志, 2009, 26(5): 417-419.
[3] 魏 清, 康红英. 高效液相色谱法测定银黄颗粒中绿
原 酸 的 含 量 [J]. 时 珍 国 医 国 药 , 2007, 18(7):
1689-1670.
[4] 马纪伟, 闫冬良. HPLC 测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩
苷的含量 [J]. 现代中药研究与实践 , 2008, 22(4):
34-35.
[5] 杨克迪, 王丽君, 龙云飞. 高效液相色谱程序可变波长
法测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量 [J]. 中国医
院药学杂志, 2007, 27(7): 992-993.
[6] 罗 雄, 胡瑞刚, 陈兰英, 等. 大鼠灌服炙甘草汤后甘
草 次 酸 药 动 学 研 究 [J]. 中 草 药 , 2011, 42(8):
1580-1584.