全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 22 期 2013 年 11 月

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一测多评法测定热毒宁注射液中 9 种成分
张亚非 1，王 雪 2, 3，毕宇安 2, 3，王振中 2, 3，萧 伟 2, 3*，李 萍 1
1. 中国药科大学中药学院，江苏 南京 210009
2. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
3. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 建立一测多评（QAMS）法测定热毒宁注射液中 9 种成分的分析方法，并与外标法进行比较，评价 QAMS
法用于热毒宁注射液质量控制的技术适应性和应用可行性。方法 以热毒宁注射液为研究对象，以绿原酸、异绿原酸 A 和
栀子苷为内参物，建立绿原酸与新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸间的相对校正因子（f），异绿原酸 A 与异绿原酸 B、异绿原酸
C 间的 f，栀子苷与断氧化马钱子苷间的 f，比较该方法与外标法测定结果的差异，并对该方法进行再验证。结果 热毒宁注
射液中各成分的 f 分别为 f 绿原酸/新绿原酸＝0.965、f 绿原酸/隐绿原酸＝0.991、f 绿原酸/咖啡酸＝0.555、f 异绿原酸 A/异绿原酸 B＝1.283、f 异绿原酸 A/异绿原酸 C＝1.129、
f 栀子苷/断氧化马钱子苷＝1.030。QAMS 法的计算结果与外标法的实测结果无显著性差异，再验证结果也无显著性差异，实验所得的 f
可信。结论 QAMS 可以作为一种简便准确的质量评价模式用于热毒宁注射液多种成分的定量测定。
关键词：一测多评；相对校正因子；热毒宁注射液；高效液相色谱；绿原酸；咖啡酸；栀子苷；断氧化马钱子苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)22 - 3162 - 08
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.22.013
Determination of nine components in Reduning Injection by quantitative analysis
of multi-components with a single-marker
ZHANG Ya-fei1, WANG Xue2, 3, BI Yu-an2, 3, WANG Zhen-zhong2, 3, XIAO Wei2, 3, LI Ping1
1. School of Traditional Chinese Medicine, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China
2. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Company with Limited Liability, Lianyungang 222001, China
3. State Key Laboratory of Pharmaceutical Process New-tech for Chinese Medicine, Lianyungang 222001, China
Abstract: Objective To establish a quantitative analysis of multi-components with a single-marker (QAMS) method for the
determination of the nine components in Reduning Injection (RI), comparing with the external standard method, and to evaluate the
adaptation and application of QAMS method in the quality control of RI. Methods Chlorogenic acid, isochlorogenic acid A, and
gardenoside were used as the internal reference substances. The relative correlation factors (f) of neochlorogenic acid, cryptochlorogenic
acid, and caffeic acid to chlorogenic acid, isochlorogenic acid B and isochlorogenic acid C to isochlorogenic acid A, and secoxyloganin
to gardenoside were calculated and established. The results were compared with those obtained by the external standard method. Results
Within the linear ranges, the f values of chlorogenic acid to neochlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, and caffeic acid were 0.965,
0.991, and 0.555, respectively; isochlorogenic acid A to isochlorogenic acid B and isochlorogenic acid C were 1.283 and 1.129,
respectively; jasminoidin to secoxyloganin was 1.030. The two methods did not show the significant difference in assay results.
Conclusion The QAMS method is feasible and credible, and could be used to determine the multiple components in RI.
Key words: quantitative analysis of multi-components with a single-marker; relative correlation factors; Reduning Injection; HPLC;
chlorogenic acid; caffeic acid; jasminoidin; secoxyloganin



收稿日期：2013-07-03
基金项目：国家“重大新药创制”——现代中药创新集群与数字制药技术平台（2013ZX09402203）；国家“重大新药创制”——大品种药物 IV
期临床试验及新药临床试验审评研究技术平台——热毒宁注射液 IV 期临床试验研究（2011ZX09304）
作者简介：张亚非（1989—），女，硕士研究生在读，研究方向为工业药学。Tel: 15861297031 E-mail: zhangyafei77@163.com
*通信作者 萧 伟，男，研究员级高级工程师，博士。研究方向为中药新药的研究与开发。
Tel: (0518)85522009 Fax: (0518)85522017 E-mail: kanionlunwen@163.com
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热毒宁注射液处方由青蒿、金银花、栀子 3 味
中药组成，临床上用于治疗上呼吸道感染，中医辨
证为外感风热证引起的高热不退、鼻塞、流涕、头
身痛、咽喉肿痛等病症。据热毒宁注射液成分研究
结果，现已明确的主要有机酚酸类及环烯醚萜苷类
成分分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、
异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀子苷和
断氧化马钱子苷，且已经建立了上述多种成分同时
测定的定量方法[1]。但由于对照品不易获得，价格
昂贵，直接限制了用常规外标法来实现其多指标质
量控制的目的，导致其方法无法在生产实践中得到
应用。基于中药的化学成分多为一类或几类化合
物，可采用一测多评（QAMS）法中药质量评价模
式，已有文献报道该方法在黄连、连翘、关黄柏、
大黄、预知子、丹参、秦皮、穿心莲等药材及成方
制剂中开展了可行性研究[2-12]，成功应用该方法的
黄连质量评价方法已被《中国药典》2010 年版收
载。但部分业内学者可能对该方法一些关键问题认
识欠缺，陆兔林等[13]在总结分析文献的基础上对
该方法的可行性研究及方法建立过程中涉及的关
键问题进行了深入探讨，以便该方法能更好地应用
到生产实践中。本研究对 QAMS 法建立过程中涉
及的关键问题进行研究，根据该方法的适用性，结
合热毒宁注射液中已知化合物的结构，建立绿原酸
与新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸间的相对校正因子
（f），异绿原酸 A 与异绿原酸 B、异绿原酸 C 间的
f，栀子苷与断氧化马钱子苷间的 f，通过测定绿原
酸、异绿原酸 A 和栀子苷的量来计算其余待测成
分的量，用于热毒宁注射液多种成分的质量评价，
并和常规的外标法进行比较，评价 QAMS 法的技
术适应性和应用可行性，结果该方法简便快捷，大
大减少检测成本，使热毒宁注射液多指标质量控制
应用于实践成为可能。
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪；Agilent 1200 高
效液相色谱仪；Waters Alliance 2695 高效液相色谱
仪；岛津 UV—2401PC 紫外分光光度计。色谱柱：
Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），Phenomenex
luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），岛津 C18（250
mm×4.6 mm，5 μm），Waters C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm），Unique C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），
Venusil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。甲醇为色
谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。
绿原酸（批号 110753-200413，质量分数为＞
98%）、栀子苷（批号 110749-200714，质量分数为＞
98%）、咖啡酸（批号 110885-200102，质量分数为＞
98%）、异绿原酸 A（批号 111782-201203，质量分
数为＞98%）、异绿原酸 C（批号 111894-201102，
质量分数为＞98%）对照品均由中国药品生物制品
检定所提供，新绿原酸（批号 101212168，质量分
数为＞98%）、隐绿原酸（批号 101245643，质量分
数为＞98%）对照品均由 Sigma 公司提供，异绿原
酸 B（批号 MUST-11083102，质量分数为 92.1%）
对照品由成都曼斯特生物科技有限公司提供，断氧
化马钱子苷对照品为自制（质量分数为 98.1%）。45
批热毒宁注射液（批号分别为 120704、120705、
120707、120709、120710、120714、120715、120716、
120721、120722、120724、120801、120802、120803、
120807、120809、120810、120815、120816、120817、
120818、120823、120824、120825、120827、120901、
120902、120904、120905、120906、121102、121103、
121108、121109、121111、121118、121119、121120、
121121、121122、121124、121125、121126、121127、
121128）均由江苏康缘药业股份有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5
μm），以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱：
0～10 min，15%～25%甲醇；10～30 min，25%～
35%甲醇；30～60 min，35%～50%甲醇；进样量为
10 μL；体积流量为 0.8 mL/min；柱温为 30 ℃；栀
子苷和断氧化马钱子苷的检测波长为 237 nm，新绿
原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、
异绿原酸 A、异绿原酸 C 检测波长为 324 nm，此条
件下各组分分离度良好，色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡
酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀子
苷和断氧化马钱子苷对照品适量，分别加入 50%甲
醇溶解并稀释制成含各成分分别为 364.2、746.5、
353.0、36.3、73.0、44.0、68.6、1 132.3、182.3 μg/mL
的混合对照品溶液，摇匀，即得。
精密吸取热毒宁注射液1 mL，置20 mL量瓶中，
加 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液 0.25、0.5、1.0、
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1-新绿原酸 2-绿原酸 3-隐绿原酸 4-咖啡酸 5-栀子苷 6-断氧化马钱子苷 7-异绿原酸 B 8-异绿原酸 A 9-异绿原酸 C
1-neochlorogenic acid 2-chlorogenic acid 3-cryptochlorogenic acid 4-caffeic acid 5-jasminoidin 6-secoxyloganin
7-isochlorogenic acid B 8-isochlorogenic acid A 9-isochlorogenic acid C

图 1 混合对照品 (A) 和供试品 (B) 分别在 237 nm (I) 和 324 nm (II) 处的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A) and sample (B) at 237 nm (I) and 324 nm (II)

2.0、4.0、10.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇稀
释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各 10 μL，
注入液相色谱仪，以对照品质量浓度为横坐标（X），
峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程：
新绿原酸 Y＝37 477 X＋30.064，r＝0.999 9，线性
范围 9.1～364.2 μg/mL；绿原酸 Y＝35 128 X＋
154.73，r＝0.999 9，线性范围 18.7～746.5 μg/mL；
隐绿原酸 Y＝35 000 X＋15.731，r＝0.999 9，线性
范围 8.8～353.0 μg/mL；咖啡酸 Y＝65 644 X＋
2.129 5，r＝0.999 9，线性范围 0.9～36.3 μg/mL；
异绿原酸 B Y＝39 725 X＋1.011 9，r＝0.999 9，线
性范围 1.8～73.0 μg/mL；异绿原酸 A Y＝48 637
X－1.359 7，r＝0.999 8，线性范围 1.1～44.0 μg/mL；
异绿原酸 C Y＝42 248 X－1.916 8，r＝0.999 9，线
性范围 1.7～68.6 μg/mL；栀子苷 Y＝17 250 X＋
57.022，r＝0.999 9，线性范围 28.3～1 132.3 μg/mL；
断氧化马钱子苷 Y＝17 488 X＋5.595 5，r＝0.999 9，
线性范围 4.6～182.3 μg/mL。
2.4 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液，连续进样 6 次，记
录峰面积，结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖
啡酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀
子苷和断氧化马钱子苷峰面积的RSD依次为 0.4%、
0.4%、0.3%、0.5%、0.3%、0.4%、0.5%、1.1%、
0.9%，表明在此条件下进样精密度良好。
2.5 稳定性试验
取混合对照品溶液和供试品溶液，分别于 0、2、
4、6、8、10、12、16、20 h 进样，记录峰面积，计
算 RSD。结果混合对照品溶液中新绿原酸、绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异
绿原酸 C、栀子苷和断氧化马钱子苷峰面积的 RSD
依次为 1.5%、1.6%、1.6%、1.6%、1.7%、1.5%、
1.3%、1.3%和 1.6%，供试品中新绿原酸、绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异
绿原酸 C、栀子苷和断氧化马钱子苷峰面积的 RSD
依次为 0.8%、0.8%、0.7%、0.8%、0.8%、1.5%、
0.8%、1.2%和 1.3%，表明混合对照品溶液及供试品
溶液在 20 h 内稳定性均较好。
2.6 重复性试验
取供试品（批号 120807）溶液，平行制备 6 份，
测定各成分的质量分数。结果供试品中新绿原酸、
绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、异绿原
酸 A、异绿原酸 C、栀子苷和断氧化马钱子苷的平
均质量分数依次为 2.91、5.71、2.87、0.14、0.53、
0.24、0.44、9.12 和 1.31 mg/mL，RSD 依次为 1.3%、
1.1%、1.3%、1.1%、1.1%、1.2%、1.4%、1.3%和
1.9%，表明该方法的重复性良好。
2.7 加样回收试验
精密吸取已测定的供试品（批号 120807）溶液
0.5 mL，置 20 mL 量瓶中，精密加入“2.2”项下混
合对照品溶液 4.0 mL，加 50%甲醇稀释至刻度，摇
匀，平行制备 6 份，测定各成分质量分数，计算加
样回收率，结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖
啡酸、异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀
子苷和断氧化马钱子苷的平均加样回收率依次为
98.6%、99.9%、98.2%、97.6%、98.6%、98.5%、
1
2
3
4
5
6 7 8 9
1
2
3
4
5
6 7 8 9
1
2
3
4
1
2
7 8 9
3
4 7 8 9
A-I B-I
A-II B-II
0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
t / min
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99.9%、99.0%和 97.3%，RSD 依次为 0.9%、1.0%、
1.1%、0.5%、0.9%、0.5%、0.5%、1.5%和 1.2%，
表明该方法的准确度良好。
2.8 f 的确定
2.8.1 f 的测定 取“2.3”项下各混合对照品溶液，
每个样品进样 2 次，测定各成分的峰面积。根据 f
计算公式[11]，以绿原酸作为内参物计算新绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸的 f，以异绿原酸 A 作为内参物
计算异绿原酸 B、异绿原酸 C 的 f，以栀子苷作为
内参物计算断氧化马钱子苷的 f，结果新绿原酸、
隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、异绿原酸 C 和断
氧化马钱子苷的 f 依次为 0.965、0.991、0.555、1.283、
1.129、1.030，RSD 分别为 1.0%、1.3%、1.7%、1.8%、
1.8%、1.7%。结果见表 1。

表 1 各成分的 f 值
Table 1 f values of each component
序 号 f 绿原酸/新绿原酸 f 绿原酸/隐绿原酸 f 绿原酸/咖啡酸 f 异绿原酸 A/异绿原酸 B f 异绿原酸 A/异绿原酸 C f 栀子苷/断氧化马钱子苷
1 0.966 0.995 0.552 1.299 1.184 1.050
2 0.965 0.997 0.565 1.254 1.133 1.058
3 0.962 0.996 0.547 1.231 1.102 1.062
4 0.970 0.997 0.563 1.254 1.103 1.012
5 0.971 0.997 0.565 1.290 1.124 1.033
6 0.972 0.995 0.560 1.290 1.133 1.028
7 0.972 0.997 0.563 1.299 1.135 1.027
8 0.972 0.997 0.554 1.299 1.132 1.014
9 0.971 0.994 0.558 1.296 1.127 1.023
10 0.971 0.995 0.556 1.288 1.124 1.021
11 0.945 0.963 0.538 1.298 1.128 1.019
12 0.945 0.964 0.540 1.296 1.128 1.017
平均值 0.965 0.991 0.555 1.283 1.129 1.030
RSD / % 1.0 1.3 1.7 1.8 1.8 1.7

2.8.2 不同体积流量对 f 的影响 考察了不同体积
流量（0.7、0.8、0.9 mL/min）对各 f 的影响，结果
RSD 依次为 0.2%、0.2%、0.1%、0.3%、0.6%、0.7%，
表明微调体积流量对各成分的 f 无显著影响。
2.8.3 不同柱温对 f 的影响 考察了不同柱温（25、
28、30、32、35 ℃）对各 f 的影响，结果 RSD 依
次为 0.1%、0.2%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%，表
明柱温对各成分的 f 无显著影响。
2.8.4 不同色谱柱对 f 的影响 考察了 6 种不同品
牌色谱柱（Kromasil C18 1#、Kromasil C18 2#、
Phenomenex luna C18、岛津 C18、Waters C18、Unique
C18、Venusil C18）对各 f 的影响，结果使用岛津
C18、Waters C18、Unique C18、Venusil C18 色谱柱时
隐绿原酸与其他杂质峰不能实现完全分离，使用
Waters C18色谱柱时异绿原酸 B 和异绿原酸 A 色谱
峰重叠，使用 Venusil C18 色谱柱时咖啡酸和栀子苷
色谱峰重叠，使用 Kromasil C18 和 Phenomenex luna
C18 时样品中各成分实现良好分离，此 3 根色谱柱
的各成分 f 的 RSD 依次为 0.8%、1.3%、1.9%、2.0%、
1.7%、2.1%，表明此 3 根色谱柱对各成分的 f 无显
著影响。
2.8.5 不同仪器对 f 的影响 考察了 5 台高效液相
色谱仪（3 种型号）对各 f 的影响，结果 RSD 依次
为 1.0%、2.2%、1.0%、3.5%、2.1%、2.4%，表明
此不同仪器对各成分的 f 无显著影响。
2.8.6 不同实验人员对 f 的影响 考察了 3 名实验
人员对各 f 的影响，结果 RSD 依次为 0.6%、1.4%、
1.5%、2.3%、0.8%、2.6%，表明不同操作人员所得
各成分的 f 无显著差异。
2.8.7 f 耐用性影响因素综合 综合以上各种因素，
新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸 B、异绿
原酸 C 和断氧化马钱子苷 f 的 RSD 依次为 0.7%、
1.4%、1.5%、2.2%、1.4%、1.7%。结果见表 2。
2.9 待测组分色谱峰的定位
本研究采用相对保留时间进行待测成分色谱峰
的定位，新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸
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表 2 各种因素对 f 的影响
Table 2 Effects of various factors on f values
影响因素 f 绿原酸/新绿原酸 f 绿原酸/隐绿原酸 f 绿原酸/咖啡酸 f 异绿原酸 A/异绿原酸 B f 异绿原酸 A/异绿原酸 C f 栀子苷/断氧化马钱子苷
0.7 mL/min 0.969 1.003 0.568 1.270 1.128 1.037
0.8 mL/min 0.966 1.000 0.567 1.266 1.119 1.029
不同体积流量
0.9 mL/min 0.969 1.002 0.568 1.262 1.115 1.023
25 ℃ 0.968 1.005 0.567 1.266 1.131 1.040
28 ℃ 0.967 1.000 0.567 1.263 1.122 1.025
30 ℃ 0.966 1.000 0.567 1.266 1.119 1.029
32 ℃ 0.969 1.000 0.568 1.271 1.122 1.023
不同柱温
35 ℃ 0.969 1.001 0.568 1.271 1.115 1.034
Aglient11001# 0.952 1.025 0.554 1.210 1.152 1.000
Aglient11002# 0.982 0.985 0.549 1.308 1.132 1.031
Aglient12001# 0.966 1.000 0.567 1.266 1.119 1.029
Aglient12002# 0.968 0.976 0.554 1.308 1.131 1.044
不同仪器
WatersAlliance 0.971 0.974 0.547 1.317 1.171 1.065
luna 0.970 0.975 0.546 1.297 1.158 1.000
Kromasil1# 0.966 1.000 0.567 1.266 1.119 1.029
不同色谱柱
Kromasil2# 0.981 0.982 0.557 1.317 1.136 1.043
实验员 1 0.966 1.000 0.567 1.266 1.119 1.029
实验员 2 0.974 0.974 0.557 1.326 1.137 1.069
不同实验人员
实验员 3 0.963 0.978 0.550 1.291 1.126 1.019
平均值 0.968 0.992 0.562 1.282 1.129 1.033
RSD / % 0.7 1.4 1.5 2.2 1.4 1.7

B、异绿原酸 C 和断氧化马钱子苷的相对保留时间
依次为 0.66、1.11、1.25、0.98、1.21、1.45，RSD
依次为 0.8%、0.8%、0.7%、0.1%、0.6%、0.8%。
2.10 QAMS 法与外标法测定结果的比较
取 29 批热毒宁注射液，采用外标法对热毒宁注
射液进行多种成分同步定量测定，再用建立的
QAMS 法进行定量计算，以验证 QAMS 法用于热
毒宁注射液多指标质量评价的准确性。结果见表
3～4。2 种方法测得的各种成分的量没有显著性差
异，相对偏差［RD＝(QAMS 法计算值－外标法实
测值) / 外标法实测值］＜5.0%，表明建立的方法具
有较好的可信度。
2.11 QAMS 法的再验证
另取热毒宁注射液 15 批，按照建立的 QAMS
法进行各待测成分色谱峰的定位，并对其量进行实
际测算，得到质量分数的计算值，再以外标法进行
反证，进一步验证 QAMS 法的合理性。结果见表 5～
6。2 种方法得到的各成分的量无显著性差异，RD＜
5.0%，表明建立的 QAMS 法在热毒宁注射液各成分
检测中适用性良好。
3 讨论
本实验对各单一对照品进行了全波长扫描，各
有机酸类成分在 324 nm 附近有最大吸收，环烯醚
萜苷类成分在 237 nm 附近有最大吸收，因此选择
237 nm 作为栀子苷和断氧化马钱子苷的检测波长，
324 nm 作为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、
异绿原酸 B、异绿原酸 A和异绿原酸 C 的检测波长。
待测成分色谱峰的准确定位是一测多评方法成
功应用的关键，一般可以采用保留时间差或相对保
留时间来定位待测成分色谱峰[14]。相对保留时间指
各待测成分 i 与内参物 s 间保留时间的比值，计算
公式：ris＝tRi/tRs；保留时间差指各待测成分 i 与内
参物 s 间保留时间的差值，计算公式：ΔtRis＝tRi－tRs。
本实验考察了相对保留时间和保留时间差在不同品
牌色谱柱和不同仪器上的重现性，结果保留时间差
的波动较为明显，不太适合作为待测成分色谱峰定
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 22 期 2013 年 11 月

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表 3 QAMS 法与外标法测定绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸和咖啡酸的结果
Table 3 Determination of chlorogenic acid, neochlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, and caffeic acid
by QAMS and external standard methods
质量浓度 / (mg·mL−1) 质量浓度 / (mg·mL−1)
新绿原酸 隐绿原酸 咖啡酸 新绿原酸 隐绿原酸 咖啡酸 批 号 绿原酸
a b a b a b
批 号
绿原酸
a b a b a b
120704 6.14 2.71 2.70 2.57 2.58 0.12 0.12 120810 6.35 2.81 2.82 2.84 2.86 0.13 0.13
120705 6.33 2.41 2.40 2.34 2.36 0.25 0.25 120815 6.52 2.68 2.70 2.74 2.75 0.16 0.16
120707 6.26 2.73 2.72 2.58 2.59 0.12 0.12 120816 6.55 2.71 2.72 2.75 2.77 0.16 0.16
120709 6.08 2.76 2.74 2.59 2.60 0.16 0.16 120817 6.48 2.81 2.82 2.84 2.86 0.15 0.15
120710 5.94 2.25 2.24 2.21 2.22 0.14 0.14 120818 6.64 2.77 2.78 2.80 2.82 0.13 0.13
120714 6.37 2.90 2.88 2.78 2.80 0.13 0.13 120823 6.32 2.78 2.79 2.83 2.85 0.16 0.16
120715 6.03 2.76 2.75 2.65 2.66 0.13 0.13 120824 6.63 3.03 3.04 3.05 3.07 0.17 0.17
120716 6.10 2.65 2.64 2.55 2.57 0.15 0.15 120825 6.47 2.89 2.91 2.90 2.92 0.14 0.14
120721 6.21 3.13 3.12 3.00 3.01 0.23 0.23 120827 6.48 2.85 2.86 2.85 2.87 0.14 0.14
120722 6.21 2.99 2.98 2.88 2.90 0.19 0.19 120901 6.49 3.25 3.28 3.20 3.17 0.14 0.14
120724 6.15 2.91 2.89 2.88 2.89 0.17 0.17 120902 6.42 2.96 2.98 2.94 2.92 0.16 0.16
120801 6.51 2.83 2.82 2.89 2.90 0.17 0.17 120904 6.51 3.00 3.02 2.99 2.97 0.13 0.13
120802 6.60 2.83 2.81 2.84 2.85 0.18 0.18 120905 6.55 3.20 3.23 3.08 3.11 0.16 0.16
120803 6.47 2.79 2.78 2.83 2.84 0.15 0.15 120906 6.37 3.20 3.22 3.08 3.12 0.14 0.14
120809 6.67 2.68 2.69 2.72 2.74 0.17 0.17
a-外标法 b-QAMS 法，下表同
a-external standard method b-QAMS method, same as following tables

表 4 QAMS 法与外标法测定异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀子苷、断氧化马钱子苷的结果
Table 4 Determination of isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid C, jasminoidin,
and secoxyloganin by QAMS and external standard methods
质量浓度 / (mg·mL−1) 质量浓度 / (mg·mL−1)
异绿原酸
B
异绿原酸
C
断氧化马
钱子苷
异绿原酸
B
异绿原酸
C
断氧化马
钱子苷
批 号 异绿原
酸 A
a b a b
栀子苷
a b
批 号 异绿原
酸 A
a b a b
栀子苷
a b
120704 0.19 0.40 0.39 0.34 0.35 10.36 1.56 1.58 120810 0.18 0.38 0.37 0.28 0.29 9.67 1.38 1.37
120705 0.20 0.41 0.40 0.37 0.37 10.71 1.56 1.57 120815 0.17 0.35 0.34 0.27 0.28 9.97 1.29 1.29
120707 0.20 0.41 0.40 0.34 0.35 10.46 1.26 1.28 120816 0.18 0.37 0.36 0.31 0.32 9.98 1.34 1.34
120709 0.14 0.31 0.31 0.23 0.24 10.77 1.55 1.56 120817 0.19 0.38 0.38 0.33 0.33 9.90 1.42 1.42
120710 0.10 0.41 0.40 0.37 0.37 10.65 1.39 1.40 120818 0.23 0.45 0.45 0.25 0.26 10.00 1.41 1.41
120714 0.22 0.44 0.44 0.40 0.40 10.34 1.49 1.51 120823 0.21 0.43 0.41 0.41 0.42 9.76 1.34 1.33
120715 0.22 0.44 0.44 0.39 0.40 10.13 1.39 1.40 120824 0.27 0.54 0.52 0.29 0.30 9.90 1.54 1.54
120716 0.21 0.43 0.42 0.38 0.38 10.21 1.37 1.38 120825 0.24 0.49 0.48 0.27 0.27 9.69 1.43 1.42
120721 0.33 0.49 0.47 0.32 0.32 10.03 1.37 1.39 120827 0.19 0.39 0.39 0.39 0.40 9.97 1.41 1.41
120722 0.22 0.45 0.45 0.38 0.39 10.20 1.18 1.19 120901 0.25 0.51 0.51 0.27 0.28 10.48 1.53 1.54
120724 0.24 0.52 0.50 0.43 0.43 9.36 1.30 1.31 120901 0.26 0.52 0.52 0.28 0.29 10.04 1.30 1.31
120801 0.22 0.45 0.44 0.40 0.40 9.91 1.66 1.68 120904 0.24 0.47 0.48 0.26 0.27 10.17 1.32 1.33
120802 0.22 0.45 0.44 0.40 0.40 10.27 1.77 1.78 120905 0.24 0.50 0.49 0.26 0.27 10.07 1.15 1.16
120803 0.22 0.45 0.45 0.39 0.40 10.42 1.55 1.56 120906 0.30 0.52 0.51 0.33 0.34 9.95 1.30 1.31
120809 0.17 0.36 0.35 0.28 0.29 9.79 1.37 1.37
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 22 期 2013 年 11 月

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表 5 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸成分测定的再验证
Table 5 Validation on determination of neochlorogenic acid, chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, and caffeic acid
质量浓度 / (mg·mL−1) 质量浓度 / (mg·mL−1)
新绿原酸 隐绿原酸 咖啡酸 新绿原酸 隐绿原酸 咖啡酸 批 号
绿原酸
a b a b a b
批 号
绿原酸
a b a b a b
121102 6.62 3.01 3.03 2.95 2.98 0.16 0.16 121121 6.77 3.13 3.15 3.09 3.07 0.10 0.10
121103 6.58 2.97 2.99 2.89 2.93 0.15 0.15 121122 6.79 2.76 2.77 2.75 2.74 0.15 0.15
121108 6.49 3.08 3.10 3.03 3.06 0.16 0.16 121124 6.73 2.95 2.96 2.96 2.94 0.16 0.16
121109 6.56 2.95 2.97 2.92 2.95 0.13 0.13 121125 6.28 2.58 2.58 2.59 2.58 0.12 0.12
121111 6.48 3.01 3.03 2.94 2.98 0.13 0.13 121126 6.66 2.80 2.82 2.78 2.77 0.13 0.13
121118 6.39 2.89 2.91 2.83 2.86 0.16 0.16 121127 6.39 2.85 2.87 2.86 2.84 0.15 0.15
121119 6.80 2.89 2.92 2.82 2.85 0.14 0.14 121128 6.52 2.81 2.82 2.82 2.80 0.13 0.13
121120 6.78 2.92 2.94 2.91 2.90 0.11 0.11

表 6 异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸 C、栀子苷、断氧化马钱子苷成分测定的再验证
Table 6 Validation on determination of isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid C,
jasminoidin, and secoxyloganin
质量浓度 / (mg·mL−1) 质量浓度 / (mg·mL−1)
异绿原酸
B
异绿原酸
C
断氧化马
钱子苷
异绿原酸
B
异绿原酸
C
断氧化马
钱子苷
批 号 异绿原
酸 A
a b a b
栀子苷
a b
批 号 异绿原
酸 A
a b a b
栀子苷
a b
121102 0.27 0.55 0.54 0.37 0.38 10.07 1.26 1.28 121121 0.23 0.48 0.46 0.32 0.32 10.35 1.30 1.30
121103 0.25 0.52 0.51 0.37 0.37 10.10 1.22 1.24 121122 0.20 0.41 0.40 0.36 0.37 10.29 1.04 1.04
121108 0.25 0.51 0.50 0.35 0.36 10.26 1.53 1.55 121124 0.21 0.43 0.42 0.33 0.33 10.27 1.12 1.12
121109 0.23 0.46 0.45 0.33 0.34 10.51 1.48 1.49 121125 0.18 0.39 0.38 0.38 0.39 9.69 1.10 1.09
121111 0.23 0.46 0.45 0.32 0.33 10.33 1.49 1.51 121126 0.20 0.42 0.41 0.35 0.36 10.00 1.20 1.21
121118 0.23 0.46 0.45 0.33 0.34 10.19 1.48 1.49 121127 0.21 0.44 0.43 0.33 0.34 10.01 1.19 1.20
121119 0.21 0.43 0.42 0.31 0.32 10.20 1.21 1.22 121128 0.26 0.53 0.51 0.36 0.37 10.10 1.20 1.20
121120 0.22 0.46 0.44 0.34 0.35 10.33 1.35 1.35

位的依据，相对保留时间的波动相对较小，因此采
用相对保留时间法进行热毒宁注射液中各待测成分
色谱峰的定位较为可靠。
由于热毒宁注射液中待测成分较多，部分品牌
或型号色谱柱无法实现各成分的良好分离，尤其样
品中隐绿原酸与杂质峰难以实现完全分离，故对色
谱柱品牌和型号有一定的限制。研究中发现，使用
Kromasil C18和 Phenomenex luna C18时，热毒宁注
射液中各成分实现良好分离。
本研究首次以不同类型化合物成分分别作为内
参物来确定同类成分之间的 f，因同类成分之间的
紫外吸收接近，f 接近于 1，在实际应用中误差较小，
一测多评方法的应用可行性更强[10]，故热毒宁注射
液中采用不同的化合物分别作为内参物，建立同类
似结构成分之间的 f，从而计算待测成分的量。热
毒宁注射液中现已知的成分可分为有机酚酸类和环
烯醚萜苷类（栀子苷、断氧化马钱子苷）2 大类，
其中有机酚酸类成分除咖啡酸以外，又分为单咖啡
酰奎宁酸（绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸）和二咖
啡酰奎宁酸（异绿原酸 B、异绿原酸 A、异绿原酸
C），故选择绿原酸、异绿原酸 A 和栀子苷分别作为
单咖啡酰奎宁酸、二咖啡酰奎宁酸和环烯醚萜苷类
的内参物，来计算其余同类成分的 f。所得的 f 中
f 绿原酸/新绿原酸＝0.97，f 绿原酸/隐绿原酸＝0.99，f 栀子苷/断氧化马钱子苷＝
1.03，f 接近于 1，且QAMS 法与外标法的量结果差异
较小，准确度高。而 f 绿原酸/咖啡酸＝0.56，f 异绿原酸A/异绿原酸B＝
1.28，f 偏离 1 较大，其中咖啡酸是因为比绿原酸少
了 1 个奎宁酸结构，紫外吸收有差异。异绿原酸 B
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 22 期 2013 年 11 月

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的 f 偏离 1 的原因有可能是其质量分数偏低（面积
归一化法质量分数为 92.1%），以后需做进一步的研
究验证，同时提示 QAMS 法在实际应用过程中，对
照品纯度问题应该引起研究者的关注。
本研究首次将 QAMS 法应用到热毒宁注射液
的多指标质量评价模式中，通过大量数据建立了以
多个内参物计算同类成分的 f，并确定了各待测成
分的色谱定位方法，对 QAMS 法应用于热毒宁注射
液中多种成分同步测定进行了可行性研究。实验的
研究结果，进一步确证了在对照品获得困难和多指
标高昂检测成本的情况下，QAMS 法显示了突出的
优势和在热毒宁注射液多成分同步测定过程中良好
的应用前景，使中药的多指标质量控制和评价模式
应用于生产实践成为可能。
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